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第 1 8 卷 第 4 期
2016 年 4 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 18 No. 4
Apr .，2016
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余甘子又名山油柑、油甘子、余甘果等，为大戟
科叶下珠属植物余甘子（Phyllanthus emblica L．）的
干燥成熟果实 [1]。余甘子的药理活性成分有许多，
如黄酮、生物碱、多糖、氨基酸、维生素和微量元素
等，其中黄酮、多糖、生物碱是最主要活性成分 [2-4]。
现代药理研究表明，余甘子具有抗关节炎、抗癌、抗
病毒、抗氧化、保肝等多种功效 [3]。因此，余甘子中
黄酮类成分提取、分离、纯化的研究对开发利用余甘
子具有重要意义。
1　实验材料
1.1　药材来源
余甘子药材，购自佳木斯宝泰医药，经佳木斯
大学药学院鉴定为正品。
1.2　材料
仪器：FA-2004 型电子分析天平；UV-757CRT
型紫外可见光分光光度计；RE-52A 旋转蒸发仪；
余甘子中总黄酮提取工艺研究
宋琳琳，沙靖全，张磊，王宇亮
（佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007）
摘 要：目的：筛选余甘子中总黄酮的最佳提取工艺。方法：分别采用浸泡提取法、超声波提取法、回流提取法
对余甘子中总黄酮进行提取，其中超声波提取法通过运用单因素试验结合正交设计考察乙醇浓度、料液比、提取时
间、提取温度4个因素。最后以芦丁为对照品，采用紫外分光光度法对提取的余甘子中总黄酮进行质量控制。结果：
对浸泡提取法、超声波提取法、回流提取法提得余甘子中总黄酮含量进行比较，得出超声波提取法提得余甘子总黄
酮含量较高，且超声波提取法的最佳提取工艺为以70%乙醇作为溶剂，料液比为1∶16，提取时间为20 min，提取温
度为60 ℃。以此条件的余甘子中总黄酮含量为25.881%。结论：采用超声波提取法提取总黄酮的方法可行，筛选出
了最佳工艺，达到了预期的效果。
关键词：余甘子；总黄酮；超声波提取法；正交试验
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2016) 04- 0042- 03
收稿日期：2015-10-28
基金项目：国家自然科学基金项目（21271089）；黑龙江省卫生厅项目（2013-223）
作者简介：宋琳琳（1982-），女，黑龙江佳木斯人，讲师，硕士，研究方向：天然药物研究与开发。
Studies on the Extraction Process of Total
Flavonoids in Phyllanthi Fructus
SONG Linlin，SHA Jingquan，ZHANG Lei，WANG Yuliang
（School of Pharmacological Sciences of Jiamusi University，Jiamusi 154007，Heilongjiang，China）
Abstract：Objective：Screen the optimum extraction process of total flavonoids in Phyllanthi Fructus.
Methods：By using immersion extraction，ultrasonic extraction and reflux extraction to extract the total
flavonoids from Phyllanthi Fructus. Through single factor combined with orthogonal test to investigate
concentration of ethanol，solid-liquid ratio，extraction time，extraction temperature. At last using rutins
the comparison sample，by using physical and chemical identification，and ultraviolet spectrophotometry
to make quality controlling. Results：Through comparison the content of total flavonoids in Phyllanthi
Fructus extracted by immersion extraction，ultrasonic extraction and reflux extraction，we can get ultrasonic
extraction has a higher extraction rate and the optimum extraction process of ultrasonic extraction is use 70%
ethanol as solvent，solid-liquid ratio is 1∶16，extraction time 20 min，extraction temperature 60 ℃ . The
flavones content in this condition for 25.881%. Conclusions：Use ultrasonic extraction to extract the total
flavonoids from Phyllanthi Fructus is feasible and screen the optimum extract process of the total flavonoids
in hawthorn leaves，got the expected effect.
Keywords：Phyllanthi Fructus；total flavonoids；ultrasonic extraction；orthogonal test adjuvant
· 方药纵横 ·
DOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2016.04.013
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Ⅲ型电热鼓风干燥箱；SHZ- Ⅲ循环水真空泵；KQ-
500DE 型医用数控超声波清洗器。
乙醇 95%、苯酚、浓硫酸由南京化学试剂有限公
司生产；试剂：化学试剂均为分析纯；水为蒸馏水；
芦丁标准品由中国药品生物制品检定所提供；固体
氢氧化钠、无水乙醇由天津市凯通化学试剂有限公
司生产；亚硝酸钠、硝酸铝由天津市科密欧化学试
剂有限公司生产。
2　方法
2.1　余甘子总黄酮的提取工艺
2.1.1　浸渍法
将备用的余甘子原料称取 5 g，加 70% 乙醇
60 mL，冷浸 24 h，使有效成分充分浸出。
2.1.2　超声波提取法
将备用的余甘子原料称取 5 g，加 70% 乙醇
60 mL，超声提取 1 次，在提取温度为 60 ℃，功率为
70%（总功率为 500 W），提取时间为 1 h 的条件下进
行提取。
2.1.3　回流提取法
将备用的余甘子原料称取 5 g，加 70% 乙醇
60 mL 回流提取 1 次，提取时间为 1 h，提取温度为
80 ℃进行回流提取。
2.2　超声波提取法的单因素实验
2.2.1　乙醇浓度对余甘子中总黄酮提取含量的影响
称取备用余甘子 5 g，料液比 1∶16（g/mL），超
声波提取 20 min，提取温度 40 ℃，提取功率 70%，
提取 1 次的条件下，分别以 50%、60%、70%、80%、
90% 的乙醇浓度提取余甘子中总黄酮，将提取液用
8 层纱布过滤，精确吸取提取液 1.0 mL，加入蒸馏
水 6 mL，加入 5%（w/v）亚硝酸钠 1 mL，摇匀，放置
6 min 后加入 10%（w/v）硝酸铝 1 mL，摇匀，6 min 后
再加入 10%（w/v）氢氧化钠 10 mL，混匀，用蒸馏水
定容至 25 mL，静置 15 min 后测定其吸光度值。考
察了不同乙醇浓度对余甘子中总黄酮提取含量的影
响，结果见图 1。
2.2.2　料液比对余甘子中总黄酮提取含量的影响
称取备用余甘子5 g，乙醇浓度为60%，超声波
提取20 min，提取温度40 ℃，提取功率70%，提取1
次的条件下，分别以1∶12、1∶16、1∶20、1∶24、1∶28
的料液比提取余甘子中总黄酮，将提取液用纱布过
滤，精确吸取提取液 1.0 mL，加入蒸馏水 6 mL，加入
5%（w/v）亚硝酸钠 1 mL，摇匀，放置 6 min 后加
入 10%（w/v）硝酸铝 1 mL，摇匀，6 min 后再加入
10%（w/v）氢氧化钠 10 mL，混匀，用蒸馏水定容
至 25 mL，静置 15 min 后测定其吸光度值。考察了
不同料液比对余甘子中总黄酮提取含量的影响，
结果见图 2。
2.2.3　提取温度对余甘子中总黄酮提取含量的影响
称取备用余甘子 5 g，乙醇浓度为 60%，料液比
为 1∶16（g/mL），超声波提取 20 min，提取 1 次的
条件下，分别以 40、50、60、70、80 ℃的提取温度提
取余甘子中总黄酮，将提取液用 8 层纱布过滤，精
确吸取提取液 1.0 mL，加入蒸馏水 6 mL，加入 5%
（w/v）亚硝酸钠 1 mL，摇匀，放置 6 min 后加入 10%
（w/v）硝酸铝 1 mL，摇匀，6 min 后再加入 10%（w/v）
氢氧化钠 10 mL，混匀，用蒸馏水定容至 25 mL，静
置 15 min 后测定其吸光度值。考察了不同提取温
度对余甘子中总黄酮提取含量的影响，结果见图
3。
2.2.4　提取时间对余甘子中总黄酮提取含量的影响
称取备用余甘子 5 g，乙醇浓度为 60%，料液比
为 1∶16（g/mL），提 取 温 度 40 ℃，提 取 功 率 70%，
提取 1 次的条件下，分别以 10、15、20、25、30 min 的
提取时间提取余甘子中总黄酮，将提取液用 8 层纱
布过滤，精确吸取提取液 1.0 mL，加入蒸馏水 6 mL，
加入 5%（w/v）亚硝酸钠 1 mL，摇匀，放置 6 min 后
加入 10%（w/v）硝酸铝 1 mL，摇匀，6 min 后再加入
10%（w/v）氢氧化钠 10 mL，混匀，用蒸馏水定容至
25 mL，静置 15 min 后测定其吸光度值。考察不同提
取时间对余甘子中总黄酮提取含量的影响，结果见
图 4。
2.3　正交实验
在单因素实验的基础上，选取乙醇浓度、料液
比、提取时间、提取温度为考察因素，以余甘子中总
黄酮含量为衡量指标，采用正交表 L9（3
4）进行正交
优化实验，因素水平选取如表 1 所示，正交实验结果
见表 3。
表 1　L9（3
4）正交实验因素水平表
因素
水平
乙醇浓度（%）
A
料液比（g/mL）
B
温度（℃）
C
时间（min）
D
1 50 1∶12 50 15
2 60 1∶14 60 20
3 70 1∶16 70 25
3　结果
3.1　余甘子总黄酮的提取工艺
表 2　余甘子中总黄酮的提取
提取方法
第一次吸
光度（A）
第二次吸
光度（A）
第三次吸
光度（A）
总黄酮含量
平均值（%）
浸泡提取法 1.988 2.024 2.024 20.715
超声提取法 2.157 2.156 2.158 22.293
回流提取法 2.083 2.127 2.127 21.825
由表 2 可知超声提取法提取余甘子中总黄酮含
量最高，所以选择超声提取法筛选余甘子中提取总
黄酮的最佳提取工艺。
3.2　超声提取余甘子总黄酮的单因素实验
3.2.1　乙醇浓度对余甘子中总黄酮含量的影响
图 1　乙醇浓度的影响
由图 1 可知吸光度随着乙醇浓度的增加而增
大，当乙醇浓度为 70% 时吸光度最大。然后吸光度
随着乙醇浓度的增加而减小。乙醇浓度较高有利于
提高总黄酮的含量，但乙醇浓度过高又会使其有效
成分溶出减少。因此，从吸光度来看，乙醇浓度应控
制在 50%~70%。
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3.2.2　料液比对余甘子中总黄酮提取含量的影响
图 2　料液比的影响
由图 2 可知随着料液比的增加吸光度反而降
低。而计算得的总黄酮含量随着料液比的增加而
增大，在料液比为 1∶16 时达到最大，之后随着料
液比的增大总黄酮的含量反而降低，可见并不是
料液比越大总黄酮的含量越大。因此，从计算得
出的总黄酮的含量来看，料液比应选在 1∶12~1∶
16 为宜。
3.2.3　提取温度对余甘子中总黄酮提取含量的影响
图 3　提取温度的影响
由图 3 可知，随着提取温度的升高吸光度增
大，当温度达到 70 ℃时，吸光度达到最高，之后基
本保持恒定。因此，提取温度应选在 50~70 ℃为
宜。
3.2.4　提取时间对余甘子中总黄酮提取含量的影响
图 4　提取时间的影响
由图 4 可知随着提取时间的增加，吸光度增大，
但当提取时间达到 20 min 后吸光度增加量不大，基
本保持平衡，所以选择提取时间在 15~25 min 为宜，
这样更加省时、简便。
3.3　正交实验结果分析
3.3.1　正交实验结果
正交实验结果表明，各因素对余甘子中总黄
酮提取效果的影响大小顺序为：料液比（B）> 乙
醇浓度（A）> 提取温度（C）> 提取时间（D），并由
正交实验得出余甘子中总黄酮超声提取的最佳
工艺条件为：A3B3C2D2。综合单因素实验和正交
实验结果，可以得出超声提取法提取余甘子中总
黄酮的最佳工艺条件为：乙醇浓度为 70%，料液
比为 1∶16（g/mL），提取温度为 60 ℃，提取时间
为 20 min。
表 3 正交实验结果
项目 A B C D
总黄酮含
量（%）
1 50（1） 1∶12（1） 50（1） 15（1） 19.545
2 50（1） 1∶14（2） 60（2） 20（2） 22.535
3 50（1） 1∶16（3） 70（3） 25（3） 23.056
4 60（2） 1∶12（1） 60（2） 25（3） 20.767
5 60（2） 1∶14（2） 70（3） 15（1） 21.658
6 60（2） 1∶16（3） 50（1） 20（2） 22.457
7 70（3） 1∶12（1） 70（3） 20（2） 22.605
8 70（3） 1∶14（2） 50（1） 25（3） 22.559
9 70（3） 1∶16（3） 60（2） 15（1） 25.628
K
1
21.712 20.972 21.520 22.277
K
2
21.627 22.251 22.977 22.532
K
3
23.597 23.714 22.440 22.127
R 1.97 2.742 1.457 0.405
3.3.2　验证实验结果
在 正 交 实 验 中，实 验 结 果 较 好 的 方 案 为
A3B3C2D2，以此最佳提取方案即乙醇浓度为 70%，
料液比为 1∶16（g/mL），提取温度为 60 ℃，提取时
间为 20 min 提取余甘子中总黄酮，平行实验 3 次，
计算平均总黄酮含量，结果可知超声提取法最佳提
取方案 A3B3C2D2，提取余甘子中总黄酮含量最高为
25.881%。
4　讨论
本研究采用浸泡提取法、超声波提取法、回流
提取法从余甘子中提取总黄酮，结果显示超声提取
法比其他提取法提取的总黄酮含量更高。运用单因
素实验结合正交实验考察了乙醇浓度、料液比、提取
时间、提取温度对超声提取法从余甘子中提取总黄
酮含量的影响。结合时间、成本等多方面考虑确定
超声提取法从余甘子中提取总黄酮的最佳条件为以
70% 乙醇作为提取溶剂，料液比为 1∶16（g/mL），提
取时间为 20 min，提取温度为 60 ℃。
通过此方法提取的余甘子总黄酮含量最高，课
题组将以此方法进一步进行余甘子总黄酮对于类风
湿性关节炎干预作用的研究。◆
参考文献
[ 1 ] 宋立人，洪恂，丁绪亮，等 . 现代中药学大辞典 · 上册 [ M ] . 北
京：人民卫生出版社，2001：165.
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[ J ] . 中国民族民间医药杂志，2002，11 ( 6 )：345.
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Med Today，1999，5 ( 8 )：367.
[ 4 ] Rigelsky JM，Sweet BV. Hawthorn：pharmacology and
therapeuticuses[ J ] .Am J Health Syst Pharm，2002，59 ( 5 )：
417-422.
[ 5 ] 高鹰，李存仁 . 余甘子的抗炎作用与毒性实验研究 [ J ] . 云南
中医中药杂志，1999，17 ( 2 )：47-50.