全 文 ：收稿日期：２０１２－０９－２８
修回日期：２０１２－１０－１６
作者简介：张柯媛（１９８１－），女，硕士研究生，主要从事医药和卫生检验与
教学工作。
＊ 广西中药质量标准研究重点实验室系统性研究课题（桂中重系
２０１２０９）资助。
＊＊通讯作者。
广西科学Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　２０１２，１９（４）：３５２～３５４
四数九里香药材中补骨脂素的定性定量分析方法研究＊
Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　ａｎｄ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　Ｐｓｏｒａｌｅｎ　ｉｎ
Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ
张柯媛１，３，黄　艳１，２，刘布鸣１，２＊＊，陈明生１，２，李齐修１，２，稂文旺１，２，卢文杰１，２
ＺＨＡＮＧ　Ｋｅ－ｙｕａｎ１，３，ＨＵＡＮＧ　Ｙａｎ１，２，ＬＩＵ　Ｂｕ－ｍｉｎｇ１，２，ＣＨＥＮ　Ｍｉｎｇ－ｓｈｅｎｇ１，２，
ＬＩ　Ｑｉ－ｘｉｕ１，２，ＬＡＮＧ　Ｗｅｎ－ｗａｎｇ１，２，ＬＵ　Ｗｅｎ－ｊｉｅ１，２
（１．广西中药质量标准研究重点实验室，广西南宁　５３００２２；２．广西中医药研究院，广西南宁　
５３００２２；３．广西卫生职业技术学院，广西南宁　５３００２１）
（１．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｔｒａｄｔｉｔｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｔａｒｄａｎｄｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，
Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２２，Ｃｈｉｎａ；２．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｍｅｄｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｓｃｉ－
ｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２２，Ｃｈｉｎａ；３．Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｖｏｃａｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，
Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３００２１，Ｃｈｉｎａ）
摘要：采用薄层色谱法对四数九里香药材中补骨脂素定性鉴别，高效液相色谱法测定补骨脂素含量，建立四数九
里香中补骨脂素的定性定量分析方法。色谱柱为大连依力特Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇－水
（５２∶４８），流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长２４６ｎｍ。结果表明，ＴＬＣ斑点清晰，补骨脂素在０．０６～０．３６μｇ范围内呈
良好线性关系（ｒ＝０．９９９２），平均回收率为１０１．６％，ＲＳＤ 为１．８４％ （ｎ＝６）。该方法准确、可靠，可以作为四
数九里香药材的质量标准制定分析方法。
关键词：分析方法　补骨脂素　四数九里香　薄层色谱　高效液相色谱
中图法分类号：Ｏ６５７．７，Ｒ２８４．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００５－９１６４（２０１２）０４－０３５２－０３
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｔｏ　ｅｓｔｉｍａｔｅ　ｐｓｏｒａｌｅｎ　ｉｎ
Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ．Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＴＬＣ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎ－
ｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｓｏｒａｌｅｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．ＳｉｎｏＣｈｒｏｍ　ＯＤＳ－ＢＰ　ｃｏｌｕｍｎ（４．６
ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈｏｌ－ｗａｔｅｒ（５２∶４８）ａｔ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｏｆ　１．０ｍｌ／ｍｉｎ，ａｎｄ
ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２４６ｎｍ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＴＬＣ　ｓｐｏｔｓ　ｗｅｒｅ　ｃｌｅａｒ，ａｎｄ
ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｐｓｏｒａｌｅｎ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０６～０．３６μｇ，ｒ＝０．９９９２；ｔｈｅ
ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　１０１．６％ａｎｄ　ＲＳＤｗａｓ　１．８４％ （ｎ＝６）．Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａ－
ｂｌｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｄｏｐｔｅｄ　ａｓ　ａ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｎａｌｙｓｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ，ｐｓｏｒａｌｅｎ，Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ，ＴＬＣ，ＨＰＬＣ
　　中药材四数九里香为芸香科九里香属植物
ＭｕｒｒａｙａｔｅｔｒａｅｒａＨｕａｎｇ的干燥茎叶，产于广西的百
色、德保和云南东部的砚山、富宁、文山、西畴，常见于
石灰岩山顶阳光充足的地方［１］，以叶和根入药，夏秋
采叶，秋季采根，洗净切段，均可鲜用或阴干备用。四
数九里香具有祛风解表、行气止痛、活血散淤、抗炎、
镇痛、解热之功效［２］，用于感冒发热，支气管炎，哮喘，
风湿麻木，筋骨疼痛，跌打瘀血肿痛，皮肤瘙痒，湿疹，
毒蛇咬伤，疟疾，胃痛，水肿等［３］。四数九里香中含有
补骨脂素等化合物［４］，补骨脂素（ｐｓｏｒａｌｅｎ，ＰＳＯ）具有
广泛的生物学活性及药理作用，如光敏作用、保护心
血管、抗组胺、抗肿瘤、促进粒细胞生长、抗生育和雌
激素样作用，对子宫、鼻和牙龈等出血有止血作用，对
支气管平滑肌有舒张作用等［５］。目前四数九里香中
补骨脂素的定性定量分析方法未见有文献报道。本
研究采用薄层色谱法和高效液相色谱法，对四数九里
２５３ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１９Ｎｏ．４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１２
DOI:10.13656/j.cnki.gxkx.2012.04.008
香中补骨脂素进行定性定量分析方法研究，为四数九
里香药材质量标准的提高和进一步开发利用，提供科
学依据。
１　仪器与试药
　　威玛龙高效液相色谱仪，ＵＣ３２８２泵，ＵＣ３２９２可
变波长检测器；威玛龙 ＷＭ２０１０通用多媒体色谱工
作 站；Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｓｙｒ．ＬＣ　５０μｌ　ＦＮ 微 量 进 样 器；
ＫＱ５２００Ｂ型超声清洗器。补骨脂素对照品是中国药
品生物制品检定所产品（批号：１１０７３９－２０１１１５），纯
度大于９８％。ＨＰＬＣ所用试剂均为色谱纯，其他试
剂均为分析纯。硅胶Ｇ由青岛海洋化工厂生产。
　　四数九里香药材采自广西德保、河池等地，原植
物经广西中医药研究院赖茂详研究员鉴定为
Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ，植物标本保存在广西中医
药研究院标本馆（ＧＸＭＩ）。
２　方法与结果
２．１　薄层色谱鉴别
　　取本品粉末２ｇ，置具塞锥形瓶中，加乙酸乙酯３０
ｍｌ，超声处理１５ｍｉｎ，取出，滤过，滤液蒸干，残杂用
少量乙酸乙酯使溶解作为供试品溶液。另取四数九
里香对照药材２ｇ，同法制成对照药材溶液。再取补
骨脂素对照品，加乙酸乙酯制成每１ｍｌ含１ｍｇ的溶
液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（中国药典
２０１０年版一部附录ＶＩ　Ｂ）试验，吸取上述３种溶液各
２～３μｌ，分别点于同一含羧甲基纤维素纳为粘合剂
的硅胶Ｇ薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯（６∶４）为展
开剂，展开，取出，晾干，喷以１０％氢氧化钾甲醇溶
液，晾干，置紫外光灯（３６５ｎｍ）下检视。供试品色谱
（图１）中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置
上，显相同的颜色的荧光斑点。经多批样品试验，薄
层色谱的重现性好，可以作为四数九里香药材的定性
鉴别方法。
２．２　含量测定
２．２．１　色谱条件和提取条件的选择
　　色谱柱为大连依力特Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，
５μｍ），流动相为甲醇 －水（５２∶４８）。检测波长２４６
ｎｍ，柱温为室温，进样量２０μｌ。理论塔板数按补骨
脂素计算不低于３０００。补骨脂素对照品、四数九里
香供试品溶液 ＨＰＬＣ图如图２所示。
　　补骨脂素难溶于水，易溶于醇，分别比较甲醇和
乙醇、５０％乙醇和５０％甲醇不同溶液的提取率，结果
甲醇溶液的提取含量高，故选择甲醇溶液为提取溶
剂。对超声时间进行比较实验的结果显示，超声３０
ｍｉｎ、６０ｍｉｎ、９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎ的提取含量分别为
０．１８ｍｇ／ｇ，０．２３ｍｇ／ｇ，０．２３ｍｇ／ｇ，０．２４ｍｇ／ｇ，超声
６０ｍｉｎ的提取含量与超声９０ｍｉｎ、１２０ｍｉｎ的提取率
基本相当，说明超声６０ｍｉｎ基本可以将样品中的补
骨脂素提取完全，为缩短分析时间，实验选择超声时
间为６０ｍｉｎ。
图１　四数九里香的薄层色谱
Ｆｉｇ．１　ＴＬＣ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ
　　１．四数九里香药材对照；２，４，５：四数九里香药材；３．补骨
脂素对照品；６．空白溶剂。
１．Ｍａｔｅｒｉａｌ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ；２，４，５：Ｓａｍ－
ｐｌｅ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ；３．Ｐｓｏｒａｌｅｎ；６．Ｂｌａｎｋ　ｓｏｌｖｅｎｔ．
图２　四数九里香的 ＨＰＬＣ
Ｆｉｇ．２　ＨＰＬＣ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ
Ａ．补骨脂素对照品；Ｂ．四数九里香药材。
　 　 Ａ．Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｐｓｏｒａｌｅｎ；Ｂ．Ｓａｍｐｌｅ　ｏｆ
Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ．
２．２．２　对照品溶液及供试品溶液的制备
　　精密称取补骨脂素对照品适量，加甲醇制成１０
μｇ／ｍｌ的对照品溶液，即得对照品溶液。
　　精密称取四数九里香药材粉末１ｇ，精密称定，置
１００ｍｌ具塞锥形瓶中，加入甲醇２５ｍｌ，精密称定，超
声处理（功率３２０Ｗ，频率８０ｋＨｚ）１ｈ，用甲醇补重，
３５３广西科学　２０１２年１１月　第１９卷第４期
滤过，用微孔滤膜（０．４５μｍ）滤过，取续滤液，即得供
试品溶液。
２．２．３　线性关系考察
　　精密称取补骨脂素对照品１０ｍｇ，置入１００ｍｌ
容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取
０．３ｍｌ、０．６ｍｌ、０．９ｍｌ、１．２ｍｌ、１．５ｍｌ、１．８ｍｌ，分别
置于１０ｍｌ量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得系列
浓度对照品溶液，分别精密吸取２０μｌ，按上述色谱条
件注入色谱仪，测定峰面积值，以峰面积值为纵坐标
（Ｙ），进样量（μｇ）为横坐标（Ｘ），绘制标准曲线，并
求得标准曲线回归方程为：Ｙ ＝８９０８６９５．２３８１　Ｘ －
５０５０６．００００，ｒ＝０．９９９２（ｎ＝６），补骨脂素进样量在
０．０６～０．３６μｇ范围呈良好线性关系。
２．２．４　精密度、稳定性和重现性试验
　　取同一对照品溶液，连续重复进样６次，测得补
骨脂素峰面积平均值为１６７１８５０，ＲＳＤ ＝１．６０％。
取同一供试品溶液，连续重复进样６次，测得补骨脂
素峰面积平均值为１７８０２９０，ＲＳＤ ＝１．６６％。实验
的精密度高。
　　取同一供试品溶液，每隔２ｈ进样，进行１０ｈ稳定
性考察。结果补骨脂素峰面积平均值为１６１７５２４，
ＲＳＤ ＝１．７２％。实验的稳定性良好。
　　精密称取同一批四数九里香药材样品各６份，按
上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定峰面积并
计算，结果测得补骨脂素平均含量为０．２２８ｍｇ／ｇ，
ＲＳＤ ＝１．８４％（ｎ＝６）。实验的重现性良好。
２．２．５　加样回收率试验
　　称取已测知补骨脂素平均含量（０．２２８ｍｇ／ｇ）的
四数九里香药材粉末，共６份，每份０．５ｇ，精密称定。
置入具塞锥形瓶中，编号１～６号，精密加入对照品溶
液（０．１１ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌ，按供试品溶液的制备方法制备
供试品溶液，按上述色谱条件测补骨脂素含量，计算
回收率，结果平均回收率为 １０１．６３％，ＲＳＤ ＝
１．８４％（ｎ＝６）。详见表１。
表１　四数九里香药材回收率试验结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ
编号
Ｎｏ．
供试品
取样量
Ｗｅｉｇｈｔ
（ｇ）
供试品中补
骨脂素含量
Ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ
ｐｓｏｒａｌｅｎ
（ｍｇ）
加入补
骨脂素
的量
Ａｄｄｉｔｉｏｎ
（ｍｇ）
测得值
Ｍｅｓ－
ｓｕｒｅｄ
ｖａｌｕｅ
（ｍｇ）
回收率
Ｒｅｃｏｖ－
ｅｒｙ（％）
１　 ０．５０１６　 ０．１１４３　 ０．１１００　 ０．２２４９　 １００．５３
２　 ０．５０４２　 ０．１１４９　 ０．１１００　 ０．２２８３　 １０２．９３
３　 ０．５０７９　 ０．１１５８　 ０．１１００　 ０．２２７７　 １０１．６６
４　 ０．５０６５　 ０．１１５４　 ０．１１００　 ０．２２７７　 ９８．８５
５　 ０．５０７５　 ０．１１５７　 ０．１１００　 ０．２２７６　 １０１．６３
６　 ０．５１３５　 ０．１１７０　 ０．１１００　 ０．２３２０　 １０４．２２
２．２．６　样品含量测定
　　分别取３个产地的四数九里香，按上述供试品溶
液制备方法和色谱条件依法测定补骨脂素含量。结
果（表２）显示，四数九里香样品中补骨脂素的含量为
０．２０％～０．２３％。
表２　四数九里香样品中补骨脂素含量测定结果（ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｍｕｒｒａｙａ　ｔｅｔｒａｅｒａ　Ｈｕａｎｇ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｔ　ｒｅｇｉｏｎ
序号
Ｎｏ．
产地
Ｒｅｇｉｏｎ
补骨脂素含量
Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐｓｏ－
ｒａｌｅｎ（ｍｇ／ｇ）
１ 广西德保Ｄｅｂａｏ　Ｇｕａｇｎｘｉ　 ０．２３
２ 广西河池 Ｈｅｃｈｉ　Ｇｕａｇｎｘｉ　 ０．２０
３ 广西武鸣 Ｗｕｍｉｎｇ　Ｇｕａｇｎｘｉ　 ０．２１
３　结束语
　　本研究采用薄层色谱法对四数九里香中补骨脂
素定性鉴别，高效液相色谱法测定补骨脂素含量，建
立四数九里香药材中补骨脂素的定性定量分析方法，
并对不同样品进行了测定。四数九里香药材样品用
甲醇溶液为提取溶剂，超声６０ｍｉｎ进行提取。色谱
柱为大连依力特Ｃ１８柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流
动相为甲醇－水（５２∶４８），流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ；检测波长
２４６ｎｍ。该方法的ＴＬＣ斑点清晰，补骨脂素在０．０６
～０．３６μｇ范围内呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９２），平
均回收率为１０１．６％，ＲＳＤ 为１．８４％ （ｎ＝６）。该
方法准确、可靠，可以作为四数九里香药材的质量标
准制定分析方法。
参考文献：
［１］　中国科学院中国植物志编辑部委员会．中国植物志
［Ｍ］．北京：科学技术出版社，１９９７：１４５－ｌ４６．
［２］　中华本草编委会．中华本草［Ｍ］．上海：上海科学技术出
版社，１９９８：９４７－９４８．
［３］　全国中草药汇编编写组．全国中草药汇编（上册）［Ｍ］．
第２版．北京：人民卫生出版社，１９９６：１０．
［４］　牙启康，卢文杰，陈家源，等．四数九里香的化学成分研
究［Ｊ］．广西科学，２０１０，１７（４）：３４７－３４８，３５２．
［５］　李祝，宋宝安．补骨脂素抗肿瘤机理及其应用研究进展
［Ｊ］．山地农业生物学报，２００７，２６（３）：２５５－２６０．
（责任编辑：邓大玉）　　
４５３ Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ．１９Ｎｏ．４，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ　２０１２