全 文 ： 2009, Vol. 30, No. 07 食品科学 ※基础研究106
余甘子果实粗提物的抑菌活性研究
唐春红 1，陈 岗 1 , 2，陈冬梅 1，幸宏伟 1，高伦江 1 , 2
(1.重庆工商大学环境与生物工程学院，绿色食品研究所，重庆 400067；2.西南大学食品科学学院，重庆 400716)
摘 要：本实验研究并探讨了余甘子果实 70%乙醇提取物的抗菌谱和抑菌特性，结果表明：70%的乙醇提取物对
供试霉菌几乎没有抑菌活性；对啤酒酵母有一定的抑菌活性；对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变
形杆菌和嗜热脂肪芽孢杆菌有很强的抑菌活性，抑菌活性强弱顺序为：嗜热脂肪芽孢杆菌＞变形杆菌＞金黄色葡萄
球菌＞大肠杆菌＞枯草芽孢杆菌，其MIC值分别为：2.0%、2.0%、2.0%、4.0%、4.0%，啤酒酵母的MIC值
为 8 .0%。
关键词：余甘子果实粗提取；抗菌谱；抗菌活性
Study on Antimicrobial Activity of Crude Extract from Phyllanthus emblica L. Fruits
TANG Chun-hong1，CHEN Gang1,2，CHEN Dong-mei1，XIN Hong-wei1，GAO Lun-jiang1,2
(1. College of Environmental and Biological Engineering, Natural and Health Food Research Institute, Chongqing Technology and
Business University, Chongqing 400067, China；2.College of Food Sicence, Southwest University, Chongqing 400716, China)
Abstract ：This study investigated the antimicrobial spectrum and activities of 70% ethanol extract of Phyllanthus emblica L.
fruits. The results indicated that the extract shows little antimicrobial activity against tested mold, but it has certain antimicrobial
activity against Saccharomyces cerevisiae with a MIC of 8.0%, and presents strong antimicrobial activities against Bacillus
stearothermophilus, Bacillus proteus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Bacillus subtilis in turn with MICs of 2.0%,
2.0%, 2.0%, 4.0%, and 4.0%, respectively.
Key words：crude extract from Phyllanthus emblica L. fruits；antimicrobial spectrum；antimicrobial activity
中图分类号：TS202.3　 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)07-0106-03
收稿日期：2008-12-31
基金项目：重庆市自然基金项目(CSTC2006bb125205)
作者简介：唐春红(1965-)，女，教授，博士，研究方向为天然防腐抗氧化剂和保健食品的开发。E-mail：023tch@163.com
余甘子(Phyl lan thus emblica L . )来源于大戟科
(Euphorbiaceae)叶下珠属(Phyllanthus)的果实。余甘子
的化学成分比较多，含有 V C、脂肪、蛋白质、多酚、
V E、鞣质、黄酮、生物碱、氨基酸及各种微量元素
等 [ 1 ]。现代药理研究证实余甘子具有广泛的抗菌能力，
余甘子果实浸出液对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、
鼠沙门氏菌、霍乱弧菌、大肠埃希氏菌、酵母菌、须
发癣菌和红色癣菌均有抑(杀)菌效果[2]。由于本实验主要
研究该提取物是否可以用于食品防腐剂，因此只选择乙
醇溶剂对余甘子果实进行粗提，研究该粗提物对食品中
常见菌的抗菌谱和抗菌活性。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
余甘子果实购于云南思茅。
供试菌种由重庆工商大学生化实验中心提供。
95%乙醇(分析纯)；葡萄糖(分析纯)；蛋白胨；琼
脂；麦芽汁；牛肉膏；二甲基亚砜(DMSO) 成都市
科龙化工试剂厂；MTT染料(噻唑蓝 Tluka，用 PBS-G
配成 1 mg / ml，4℃避光保存)；其它试剂均为分析纯。
1.2 仪器与设备
YXQ.SG41.280手提式压力蒸汽灭菌器；SHA-C恒
温振荡器；TDZ5-WS离心机；BC-R5001旋转蒸发仪；
DNM-9602G酶标仪。
1.3 方法
1.3.1 余甘子粗提物的制备
余甘子干果粉碎，过 40 目的孔筛，放入旋转蒸发
仪器(不开真空泵)，用 70%的乙醇分两次提取，提取温
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度 50℃、时间 4h。第一次用 6 倍体积的醇液提取，第
二次用 4倍体积的醇液提取。两次提取液过滤合并，以
3000r/min离心 20min，上清液用旋转蒸发仪浓缩至无醇
味。浸膏用真空微波干燥器干燥成粉末。用二甲基亚
砜(DMSO)溶解粗提物配成 10%、1%和 0.1%三个浓度
梯度备用。
1.3.2 菌悬液的制备
配制培养基：分别对各菌种接种、常规培养至三
代备用。取培养后的细菌原液，采用 l0 倍稀释法稀释，
依次标记为 l0 -1、l0 -2、l0 -3⋯l0 -8，各浓度分别做两个平
行实验。采用平板菌落计数法，培养后计算各培养皿
的菌落，得最佳供试菌液浓度为 10 6CFU/ml。
1.3.3 粗提物抑菌实验
在无菌条件下，取 106的菌悬液 0.2ml涂布在凝固的
平板表面，每个浓度的菌悬液做三个平行；分别取各个
浓度的含药溶液及二甲基亚砜(空白)2ml 于灭菌培养皿
中，放入直径为 5 m m 的中性滤纸片，浸泡 4 h，用无
菌镊子夹起滤纸片(按浓度从大到小)顺时针贴在表面含菌
的同一平板上，细菌 37℃培养 24h，酵母菌 28℃培养
24h，霉菌 28℃培养 48h。培养结束后测量抑菌圈的大
小，计算平均值。
1.3.4 粗提物最低抑菌浓度实验
MTT比色分析法的原理是利用活细菌细胞内的琥珀
酸脱氢酶，将染料MTT 还原成不溶性的甲臜颗粒，按
酸化异丙醇溶解甲臜颗粒所呈现的颜色深浅来反映细
菌、酵母、霉菌的数量及代谢活跃程度。
通过抑菌圈实验，选择有较强抑菌作用的菌株做最
低浓度实验。将 96孔培养板经紫外线消毒 30min后，每
排第 1孔加入 16%的DMSO溶解的提取液 0.1ml，依次
加入 2倍稀释度的提取物溶液至第 9孔，各孔均以菌悬
液(106CFU/ml)补充至 0.2ml，第 10孔作为对照，做三个
平行。将细菌培养板置于 37℃培养箱培养 2h，酵母菌
于 28℃培养箱培养 6h，然后每孔加入MTT液 50μl，再
培养 1～4h，当培养板底微显蓝色颗粒物样时，3000r/min
离心 10min，吸取上清液，加入酸化异丙醇 100μl，振
荡 1min，在 570/630nm处比色，按下式计算抑菌百分
率( A )。
　　
不同浓度药液孔OD值
A(%) = (1－ ———————————)× 100
　　 对照孔OD
2 结果与分析
2.1 余甘子果实粗提物得率
余甘子果实 1kg粉碎后，过 40目孔筛，用 70%乙
醇(10L)、转速 50r /min、50℃浸提 4h，合并提取液，
离心分离，回收溶剂至无醇味，真空微波干燥得到提
取物粉末 317g，得率为 31.7%。
2.2 余甘子果实粗提物对霉菌的抑菌活性
实验用的滤纸片是由直径为 5mm 的打孔器制成的，
当抑菌圈接近 5mm时，可以认为不抑菌，结果见表 1。
抑菌圈直径(mm)
供试菌
10.0% 1.0% 0.1% 空白
黑曲霉(Aspergillus niger) 5.0 5.0 5.0 5.0
青 霉(Penicillium sp.) 5.0 5.0 5.0 5.0
黑根霉(Rhizopus nigricans) 5.0 5.0 5.0 5.0
表1 不同浓度余甘子果实粗提物对霉菌的抑菌活性
Table 1 Diameters of inhibition zone of extract of Phyllanthus
emblica L. at different concentrations against different species of
molds
从表 1可以看出，实验中采用的余甘子果实提取的
浓度范围内对黑曲霉、青霉、黑根霉没有抑菌活性。
考虑到提取物要在食品中使用，选取较大的浓度进行实
验意义不大，所以最大浓度只选择了 1 0 %。
2.3 余甘子果实粗提物对酵母菌的抑菌活性
抑菌圈直径(mm)
供试菌
10.0% 1.0% 0.1% 空白
啤酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae) 7.0 5.0 5.0 5.0
表2 不同浓度余甘子果实粗提物对酵母菌的抑菌活性
Table 2 Diameters of inhibition zone of extract of Phyllanthus
emblica L. at different concentrations against Saccharomyces
cerevisiae
从表 2看出，余甘子果实粗提物对啤酒酵母有一定
的抑菌作用，但抑菌活性不是很强，在三个浓度梯度
中，只有 10%的供试液有抑菌活性，而 1.0%和 0.1%的
供试液没有抑菌活性，这是由于供试液浓度未达到最低
抑菌浓度值。
2.4 余甘子果实粗提物对细菌的抑菌活性
抑菌直径(mm)
供试菌
10.0% 1.0% 0.1% 空白
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 12.3 7.8 5.0 5.0
枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) 10.3 5.7 5.0 5.0
凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans) 6.83 5.0 5.0 5.0
嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillus stearothermophilus) 15.3 8.3 5.0 5.0
苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis) 6.8 5.0 5.0 5.0
变形杆菌(Bacillus proteus) 14.0 7.8 5.0 5.0
大肠杆菌(Escherichia coli) 12.3 7.0 5.0 5.0
绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa) 9.3 5.0 5.0 5.0
产气夹膜杆菌(Enterobacter aerogenes) 7.3 5.0 5.0 5.0
表3 不同浓度余甘子果实粗提物对细菌的抑菌活性
Table 3 Diameters of inhibition zone of extract of Phylla thus
emblica L. at different concentrations against different species of
bacteria
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从表 3 看出，提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆
菌、枯草芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、变形杆菌的
抑制活性非常强，尤其是对嗜热脂肪芽孢杆菌的作用最
强，除了 10%的供试溶剂有作用外，1%提取物也有作
用，只是抑制活性没有前者强。
2.5 余甘子果实粗提物的最低抑菌浓度(MIC)
通过MTT 微量法快速测定余甘子粗提物对嗜热脂
肪芽孢杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、
枯草芽孢杆菌和啤酒酵母的抑制作用，结果如图 1 所
示 。
4.0%。啤酒酵母的最小完全抑菌浓度为 16.0%，最小抑
菌浓度为 8 .0%。
3 结 论
通过余甘子果实粗提物对 9 株细菌、3 株霉菌、1
株啤酒酵母菌的抑菌实验可知，粗提物对霉菌没有抑菌
活性；对啤酒酵母有一定的抑菌活性，但活性不强；
对 9 株细菌都有一定的抑制作用，但对凝结芽孢杆菌、
苏云金杆菌、产气夹膜杆菌、绿脓杆菌的作用效果不
明显，对另外 5 种细菌的抑菌效果明显，1% 浓度的提
取物也有一定的活性，抑制作用强弱顺序为：嗜热脂肪
芽孢杆菌＞变形杆菌＞金黄色葡萄球菌＞大肠杆菌＞枯
草芽孢杆菌。采用MTT 法来测定粗提物对嗜热脂肪芽
孢杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯
草芽孢杆菌、啤酒酵母的MIC值分别为：2.0%、2.0%、
2 . 0%、4 . 0%、4 . 0%、8 . 0%。
参考文献：
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MTT法显示的结果和滤纸片抑菌圈法的结果有很好
的同一性，即抑制作用大小为：嗜热脂肪芽孢杆菌>变
形杆菌>金黄色葡萄球菌>大肠杆菌>枯草芽孢杆菌。如
果以 100%的抑菌率为完全抑菌，90%以上的抑菌率为
具有抑菌作用，则余甘子提取物对嗜热脂肪芽孢杆菌、
变形杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆
菌的最小完全抑菌浓度为 4.0%、4.0%、4.0%、8.0%、
8.0%。最小抑菌浓度为 2.0%、2.0%、2.0%、4.0%、
图1 提取物对细菌和啤酒酵母的抑制效果
Fig.1 Inhibition rates of extract of Phyllanthus emblica L. at
different concentrations against Saccharomyces cerevisiae and
different species of bacteria
100
80
60
40
20
0
嗜热脂肪芽孢杆菌
大肠杆菌
枯草芽孢杆菌
金黄色葡萄球菌
变形杆菌
啤酒酵母
抑
制
率
(%
)
浓度(%)
16 8 4 2 1 0.5 0.25 0.125 0.063