全 文 ：2016年3月第22卷第5期 March.2016 Vol.22 No.5
*基金项目：广东省自然科学基金团队项目(No.S201230006598)
通讯作者：李耿，E-mail：lg@gzhtcm.edu.cn
甲型H1N1流感病毒属季节性流感病毒，是威胁人类健康
的重要病原体。1933年由Smith等[1]人通过雪貂培养分离，因为
其表面抗原多变，因此病毒变异迅速，同时感染性和传染性
强，是流感大流行的主要病毒。甲型流感一年四季都有可能
发生，但是以冬春季多见。其典型症状为发热、寒颤、乏力、厌
食、咳嗽、头痛、咽喉痛和肌肉疼痛等[2]。目前对于H1N1流感的
预防和治疗主要是接种疫苗和抗病毒药物治疗。然而病毒的
不断变异及世界各地不同的耐药株的出现导致抗病毒药物
的使用受到一定的限制。相比抗病毒药物，中药由于化学成
分比较多，能够发挥多靶点的作用，因此在这方面具有广阔
的前景。
余甘子Phyllanthus emblica是大戟科叶下珠属植物余甘
子的干燥果实，味甘、酸，涩，性凉，含有较多的鞣质类、黄酮
类、多糖和维生素C等化学成分。余甘子具有化痰止咳、健胃
消食、清热生津、保肝解毒等功效。现代药理研究结果表明，
余甘子有抗微生物感染、抗氧化、抗肿瘤、降血脂、降血糖、降
压、补益等多种生物活性[3]；主治感冒发热、咳嗽、咽喉痛、白
喉、烦热口干、消化不良、高血压病、肥胖症等[4]。故此，本实验
余甘子总黄酮提取物对H1N1流感病毒感染
小鼠肺炎的影响*
孔秀娟，于 然，刘建兴，张 莹，胡秋萍，劳梓钊，赖小平，李 耿
（广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006）
[摘要] 目的：探讨余甘子黄酮提取物对感染H1N1流感病毒小鼠的保护作用及肺指数的影响。方法：以H1N1
流感病毒感染小鼠建立模型，以利巴韦林为阳性药对照，不同浓度的余甘子黄酮提取物水溶液灌胃给药，统计
各组小鼠平均存活时间及肺指数。结果：余甘子总黄酮高、中剂量组小鼠肺指数均低于模型组（P＜0.01），余甘子
总黄酮中剂量和高剂量可显著降低H1N1流感病毒小鼠肺指数；模型组小鼠存活时间明显低于正常组，差异有统
计学意义（P＜0.01）。余甘子总黄酮高、中剂量组小鼠存活时间高于模型组，差异有统计学意义（P＜0.01），余甘子
总黄酮高、中剂量可延长感染小鼠平均存活时间。结论：余甘子总黄酮提取物具有较好的抑制H1N1病毒感染小
鼠肺部炎症的作用。
[关键词] 余甘子总黄酮；H1N1流感病毒；利巴韦林；肺炎；小鼠
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1672-951X（2016）05-0064-02
TheInfluencw of Flavone Extract of Phyllanthus Emblica on Influenza
H1N1VirusInfected Pneumonia Mice
KONG Xiu-juan, YU Ran, LIU Jian-xing, ZHANG Ying, HU Qiu-ping, LAO Zi-zhao,
LAI Xiao-ping, LI Geng
(College of Traditional Chinese Medicine, Guangzhou University of Chinese Medicine,
Guangzhou Guangdong 510006, China)
[Abstract] Objective: To study the protection and the lung index inhibition of flavone extract from Phyllan－
thus emblica in H1N1 influenza virus infected mice. Methods: The mice were infected with influenza A (H1N1)
virus. Different concentrate Phyllanthus emblica flavone extract were gavage submission to influenza A (H1N1)
virus infected mice, and ribavirin as positive contrast. Survival situation and the lung index of mice were ob－
served after experiments. Results: High and middle concentration Phyllanthus emblica flavone groups showed low－
er lung index than the model group (P＜0.01); High and middle concentration Phyllanthus emblica flavone can
significantly inhibit the lung inflammation in H1N1 influenza virus infected mice. The Model group showed short－
er survival time than the normal group, with statistical difference (P＜0.01); And the high and middle concentra－
tion Phyllanthus emblica flavone groups showed longer survival time than the modell group, with statistical dif－
ference (P＜0.01). High and middle concentration Phyllanthus emblica flavone can prolong the survival time of
mice. Conclusions: Phyllanthus emblica flavone could resistance pneumonia in H1N1 influenza virus infected mice.
[Key words] Phyllanthus emblica; H1N1 flu virus; ribavirin; mneumonia; mouse
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中药制剂与药理研究
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DOI:10.13862/j.cnki.cn43-1446/r.2016.05.019
2016年3月第22卷第5期 March.2016 Vol.22 No.5
研究余甘子黄酮提取物对甲型H1N1流感病毒滴鼻感染小鼠肺
炎的影响及死亡保护作用，为进一步的研究提供实验依据。
1 实验材料
1.1 药物 余甘子由广州中医药大学新药中心提供，经广州
中医药大学赖小平教授鉴定为大戟科叶下珠属余甘子Phyl－
lanthus emblica.的干燥果实。
1.2 实验动物 SPF级昆明小鼠，体质量(14±1) g，雌雄各半，
购于广州中医药大学实验动物中心，许可证编号：SCXK(粤)
2013-0020。
1.3 病毒毒株 流感病毒鼠肺适应FM1株，由广州中医药大
学热带病毒研究所提供，广州中医药大学中药学院BSL-2生
物安全实验室鸡胚传代，-80 ℃保存备用。经测定其LD50为
10-2.57/0.05 mL。
1.4 仪器与试剂 D101型号大孔树脂（上海劲凯有限公
司）；分析天平（广州市授科仪器科技有限公司）；乙醇（分析
纯，天津市大茂化学试剂厂，批号：110206）；正丁醇（分析纯，
天津市大茂化学试剂厂，批号：093317）；利巴韦林片（江西汇
仁药业有限公司，批号：1403008）。
2 实验方法
2.1 余甘子总黄酮制备 取余甘子药材，加入8倍量水提取2
次，滤过，收集滤液，浓缩至50 mL，加入盐酸液调pH至3～4，滤
过；滤液过D101大孔吸附树脂柱，用水洗至流出液中性；再用
70％乙醇洗脱；收集洗脱液并浓缩；浓缩液用正丁醇萃取；浓
缩正丁醇萃取溶液，得余甘子提取物粉末，即为余甘子总黄
酮粉末。余甘子总黄酮用生理盐水配置成浓度为0.6 g/mL的
溶液，作为高浓度，并用生理盐水稀释成中（0.3 g/mL）、低剂
量（0.15 g/mL）浓度。
2.2 余甘子总黄酮提取物对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺炎
的影响 SPF级昆明小鼠72只，随机分为正常组、模型组、利
巴韦林组、余甘子总黄酮高、中、低剂量组，每组12只。小鼠乙
醚轻度麻醉，15倍LD50病毒稀释液滴鼻感染小鼠，每只约
0.05 mL。正常组以等体积生理盐水滴鼻。感染2 h后各组小鼠
分别给予相应的药物，正常组、模型组给予生理盐水。给药体积
均为0.2mL/10 g。连续给药4 d，1次/d，末次给药后30 min，各组
小鼠轻微麻醉，打开胸腔取出全肺，肉眼观察肺部病变，记录
肺部病变的程度，用生理盐水洗净，后用干净滤纸吸掉残余
盐水，称量湿质，计算肺指数、肺指数抑制率。肺指数（%）=肺
质/小鼠体质量×100%；肺指数抑制率=（病毒对照组平均肺指
数-药物组平均肺指数）/病毒对照组平均肺指数×100%。
2.3 余甘子黄酮提取物对感染甲型H1N1流感病毒小鼠的死
亡保护作用 小鼠分组及造模方法同“2.2”，每组12只。感染
6 h后各组小鼠分别给予相应的药物，正常组、模型组给予生
理盐水。给药体积均为0.2 mL/10 g。连续给药10 d，1次/d。逐日
观察动物发病情况并记录死亡数，共观察15 d，计算死亡保护
率和生命延长率。死亡保护率（%）=（病毒对照组死亡率-药
物组死亡率）/病毒对照组死亡率×100%，生命延长率=（药物
组平均存活时间-病毒对照组平均存活时间）/病毒对照组平
均存活时间×100%。
2.4 统计学方法 采用SPSS20.0软件分析数据，计量资料比
较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。
3 结 果
3.1 余甘子总黄酮对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺炎的影
响 病毒感染后，病毒在小鼠肺组织中大量增殖并破坏肺泡
细胞，随之引发炎症反应。大量的炎症介质生成并渗出到肺组
织中，使肺指数显著升高。实验结果表明，余甘子总黄酮高、中
剂量组小鼠肺指数均低于模型组（P＜0.01），表明高、中剂量余
甘子总黄酮可降低H1N1流感病毒感染小鼠肺指数。（见表1）
表 1 各组病毒性肺炎小鼠肺指数比较 （x±s）
组别 动物数(只) 剂量/生药[g/(kg·d)] 平均肺指数 肺指数抑制率(%)
正常组 12 - 0.82±0.05 -
模型组组 12 - 1.70±0.10a -
利巴韦林组 12 0.075 1.11±0 6ab 34.32
余甘子总黄酮低剂量组 12 1.5 1.56±0 25a 8.05
余甘子总黄酮中剂量组 12 3 1.40± .20ab 13.70
余甘子总黄酮高剂量组 12 6 1.28±0.18ab 20.30
注：与正常组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01。
3.2 余甘子总黄酮对感染甲型H1N1流感病毒小鼠的死亡保
护作用 病毒感染后第3天开始有小鼠死亡。15 d内，模型组
小鼠全部死亡，利巴韦林组4只小鼠死亡，余甘子总黄酮高、
中、低剂量组小鼠死亡数分别为8只、9只、12只。模型组小鼠
存活时间明显低于正常组，差异有统计学意义（P＜0.01）。余甘
子总黄酮高、中剂量组小鼠存活时间高于模型组，差异有统
计学意义（P＜0.01），表明余甘子总黄酮高、中剂量组小鼠存活
时间延长。（见表2、图1）
表 2 余甘子黄酮对 H1N1感染小鼠的死亡保护结果 （x±s）
剂量/生药 死亡数 死亡保护 平均存活 生命延长
[g/(kg·d)] (只) 率(﹪) 时间(d) 率(﹪)
正常组 12 - 0 - 15.00 -
模型组 12 - 12 - 4.67±0.65a -
利巴韦林组 12 0.075 4 66.67 11.83±4.69b153.32
余甘子总黄酮低剂量组 12 1.5 12 0 6.67±0.65a 42.83
余甘子总黄酮中剂量组 12 3 9 25 8.17±0. 5ab 74.95
余甘子总黄酮高剂量组 12 6 8 33.33 9.83±3.95ab 110.49
注：与正常组比较，aP＜0.01；与模型组比较，bP＜0.01。
图 1 各组小鼠的生存曲线图
4 讨 论
流感病毒感染后，小鼠肺组织水肿样病变严重，肺组织
中充斥着大量的组织渗出液。大量的组织液渗出并无法重吸
收，导致肺组织气体交换障碍，进而发展为的肺通气与换气
功能严重障碍，表现为小鼠呼吸急促，出现腹式呼吸；小鼠口
唇紫绀也表明其呼吸通气功能已经发生
组别 动物数(只)
（下转第71页）
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2016年3月第22卷第5期 March.2016 Vol.22 No.5
严重障碍。如果肺部组织液大量渗出没有得
到有效控制，则易发生死亡。
本实验中小鼠肺组织大体解剖发现，病毒感染小鼠肺组
织颜色暗红，呈水肿样病变，肺叶边缘不清，肺部一叶至多叶
甚至整个肺部淤血；余甘子总黄酮高、中剂量组小鼠肺组织
颜色较浅，水肿样病变轻，有一定量的淤血区，面积均比较
小，呈散点状分布。表明余甘子黄酮提取物可抑制H1N1型流感
病毒所致小鼠肺部炎症。肺指数实验结果表明，余甘子总黄
酮能有效地抑制病毒感染后小鼠肺组织炎症介质的生成或
渗出。死亡保护实验表明，模型组小鼠在病毒感染后第3天开
始食欲明显下降，并有部分小鼠死亡，随后大部分小鼠逐渐
出现耸毛、甩头，呼吸短促现象，并伴随腹式呼吸，行动迟缓
无力，弓背，消瘦，体质量减轻，第5天小鼠大量死亡。余甘子
总黄酮组症状较轻，死亡时间延长，即余甘子总黄酮提取物
具有改善病毒感染后小鼠生存质量及一定的死亡保护作用。
黄酮类化合物是植物次生代谢产物，它以游离或与糖结
合成苷的形式广泛存在于高等植物根、茎、叶、花、果实中，不
仅种类繁多，而且具有多种多样的生物活性。其主要的药理
作用为抗炎抑菌、降血糖、抗氧化、抗辐射、抗肿瘤以及增强
免疫能力等。研究表明木犀草素、黄芩苷、黄芩素以及槲皮
素、桑色素等具有抗炎、抗病毒的作用。靳玉瑞等[5]通过研究
发现多种黄酮类化合物包括槲皮素、山萘酚等对甲型流感病
毒的神经氨酸酶具有一定的抑制作用。余甘子中富含多种黄
酮类化合物，蔡英卿等[6]用聚酰胺层析显色发现余甘子枝叶
中总黄酮含量在4%左右，果实中含量在1.5%左右。余甘子总
黄酮中黄酮类成分多样，结构类型复杂多样，并含有一定量
的槲皮素、山萘酚、和汉黄芩素。
余甘子总黄酮提取物具有较好的抑制H1N1流感病毒感染
小鼠肺部炎症的作用，但其抗病毒感染小鼠肺部炎症及延长
与改善小鼠生存时间、生存质量是否相关，及其发挥作用的
物质基础需要进一步研究，其作用机制是抑制病毒的复制为
主还是抗炎为主也需要进一步的研究。
参考文献
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2272-2278.
（收稿日期：2015-07-15 编辑：蒋凯彪）
鼠模型。本实验就是通过小鼠尾静脉注射耐异烟肼的结核杆
菌来制造相关模型，造模前，空白对照组、耐异烟肼菌株组、
标准菌株组小鼠体质量比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；造
模后，空白对照组与耐异烟肼菌株组小鼠体质量比较，差异
有统计学意义（P＜0.01），空白对照组与标准菌株组小鼠体质
量比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。说明耐异烟肼菌株组、
标准菌株组造模后与空白对照组造模后相比较，体质量减
轻。空白对照组造模前后体质量比较，差异有统计学意义（P＜
0.01），标准菌株组造模前后体质量比较，差异有统计学意义
（P＜0.05），耐异烟肼菌株组造模前后体质量比较，差异无统计
学意义（P＞0.05）。说明空白对照组造模后体质量增加，标准菌
株组造模前后体质量增加，耐异烟肼菌株组造模后体质量无
显著增加。细菌培养可见空白对照组未培养出结核菌，耐异
烟肼菌株组、标准菌株组中每只小鼠肺组织均培养出结核分
枝杆菌。
根据以上实验结果可以看出，耐异烟肼肺菌株组和标准
菌株组小鼠体质量增加幅度小，肺组织检测出结核杆菌，说
明结核小鼠模型造模成功。因此本研究建立的小鼠结核分枝
杆菌耐异烟肼株静脉感染动物模型可用于耐药结核的机制
和治疗研究。
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（收稿日期：2015-06-13 编辑：罗英姣）
（上接第65页）
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