全 文 ：2. 1 将 105 例哮喘疾病患者在治疗前后的各项肺功能测定数值进行
仔细对比，其详细情况如表 1。
患者在治疗后的用力肺活量数值、第 1s 产生的最大呼气量数值、最
大的呼气流峰值、用力呼气产生的 25%和 50%流速数值均大于治疗前，
治疗前后的对比差异显著，有统计学意义(P ＜ 0. 05)。
表 1 全部患者在治疗前后的各项肺功能测定数值对比结果(x ± s)
项目 用力肺活量
第 1s产生的最
大呼气量
最大呼气流
峰值
用力呼气产生
的 25%流速
用力呼气产生
的 50%流速
治疗前 74. 37 ± 2. 56 59. 06 ± 4. 11 49. 37 ± 4. 16 30. 24 ± 1. 64 50. 14 ± 2. 61
治疗后 90. 21 ± 3. 14 76. 32 ± 2. 74 67. 23 ± 2. 63 47. 57 ± 2. 51 61. 41 ± 3. 32
t 9. 45 10. 21 10. 33 11. 15 9. 17
P ＜ 0. 05 ＜ 0. 05 ＜ 0. 05 ＜ 0. 05 ＜ 0. 05
2. 2 计算治疗后患者肺功能实际测量的数值在预算值中的所占的比
值，得出的详细结果如下:
治疗前患者的用力肺活量数值占预算值的(71. 45 ± 2. 41)%，第 1s
产生的最大呼气量数值占预算值的(50. 33 ± 1. 74)%，最大的呼气流峰值
占预算值的(42. 54 ± 1. 84)%，用力呼气产生的 25%和 50%流速数值分
别占其预算值的(24. 54 ± 1. 21)%和(32. 75 ± 2. 06)。治疗后患者的用力
肺活量数值占预算值的(80. 21 ± 3. 47)%，第 1s产生的最大呼气量数值
占预算值的(63. 18 ± 2. 56)%，最大的呼气流峰值占预算值的(54. 31 ±
3. 81)%，用力呼气产生的 25% 和 50% 流速数值分别占其预算值的
(30. 28 ± 3. 81)%和(36. 16 ± 1. 88)%。综合比较上述数据，可发现患者
在治疗后的用力肺活量数值、第 1s产生的最大呼气量数值、最大的呼气
流峰值、用力呼气产生的 25%和 50%流速数值占预算值的比值均大于治
疗前，其对比有统计学意义(P ＜ 0. 05)。
3. 讨论
支气管哮喘以气道慢性炎症引起易感个体的气道反应性增强为主要
特征，在接触刺激因素时，患者气道内的可逆性气流受到限制，其病情的
严重程度与气道反应性和气道阻塞存在着密切联系，因此，肺功能测定的
结果可以作为哮喘病诊断鉴别的依据，也可以作为病情评价、疗效判定的
主要观察指标。根据本文研究呈现的结果，患者在治疗后的用力肺活量
数值、第 1s产生的最大呼气量数值、最大的呼气流峰值、用力呼气产生的
25%和 50%流速数值均大于治疗前，治疗前后的对比差异显著，有统计学
意义(P ＜ 0. 05)。此外，患者在治疗后的用力肺活量数值、第 1s产生的最
大呼气量数值、最大的呼气流峰值、用力呼气产生的 25%和 50%流速数
值占预算值的比值均大于治疗前，其对比有统计学意义(P ＜ 0. 05) ，充分
显示在治疗前后患者的肺呼出功能发生了显著的变化，肺功能呈现出明
显的恢复趋势。
患者的大气道阻塞程度可以通过气体流率呈现，最大的呼气流峰值
是指用力呼气时可以达到的最大气体流速，可作为哮喘病情的动态观察
指标;对用力呼气产生的 25%和 50%流速数值进行比较，可以反映患者
气道的不稳定性，是判断病情程度和衡量患者临床治疗反映的重要参考
依据之一;而最大的呼气流峰值在反映小气道阻塞程度和评估小气道阻
塞病情方面表现得更为敏感。该研究结果中还反映了患者的用力呼气产
生的 50%流速为占其预算值的(36. 16 ± 1. 88)% ，表明患者的肺功能受
到了较为严重的损害，针对哮喘患者，应坚持进行抗炎治疗，抑制气道炎
性反应。以上分析体现对于哮喘疾病患者的诊断及检查，将患者的肺功
能测定结果纳入到病情观察指标中，能够发挥很好的鉴别价值，并且能够
动态地反映患者的病情发展，为哮喘类疾病的临床诊治提供重要依据，可
以在临床诊治过程中予以恰当利用。
余甘子总黄酮对乳腺癌细胞 MCF － 7 增殖及凋亡的影响研究
吴登攀 周楠 秦嫦云 钟盛蕾 徐凤玲 王萌萌 黄金兰*
(徐州医学院 江苏 徐州 221004)
基金项目:本研究获得国家自然基金项目(编号 81402946)和江苏省创新创业训练计划项目(编号:201410313055X)支持。
作者简介:吴登攀，男，医学博士，讲师，从事抗肿瘤新药开发研究;
【摘要】目的:探讨余甘子总黄酮(PEF)对乳腺癌细胞 MCF － 7 增殖及凋亡的影响。方法:采用 SＲB 法检测 PEF 对 MCF － 7 细胞增殖的影响，集
落形成法检测 PEF对 MCF － 7 细胞集落形成能力的影响;采用 Hoechst33258 染色法观察 PEF对肿瘤细胞凋亡的影响。结果:不同浓度 PEF分别作用
细胞 24h、48h和 72h后，药物对细胞增殖有不同程度的抑制作用，呈时间和剂量依赖性。6μg /mL和 12μg /mLPEF组的集落抑制率分别为 52. 84%和
43. 1%。给予不同浓度 PEF诱导后，细胞出现细胞核或细胞质中浓染的蓝色颗粒及细胞形态改变，凋亡率有显著差异。结论:PEF可显著抑制 MCF
－ 7 细胞增殖并诱导细胞凋亡。
【关键词】余甘子总黄酮;乳腺癌;增殖;凋亡
【中图分类号】Ｒ446. 6 【文献标识码】B 【文章编号】1009 － 6019(2015)22 － 0057 － 02
从天然植物中寻找有效的抗肿瘤药物已成为国内外研究热点。余甘
子是大戟科叶下珠属落叶灌木或小乔木，广泛分布于我国广西、广东、福
建等省。据报道，余甘子具有抗氧化和清除自由基作用、抗动脉粥样硬化
及降血脂、抗肝损伤作用及抗病原微生、抗诱变和抗肿瘤作用［1］等。目
前对余甘子抗肿瘤作用的研究主要集中在酚酸类成分［2］，对黄酮类成分
研究较少。因此，本研究将采用 SＲB、集落形成及 Hoechst 33258 染色等方
法探讨余甘子总黄酮(PEF)对乳腺癌 MCF － 7 细胞凋亡的影响。
1. 材料
PEF由广西中医药大学自提，人乳腺癌 MCF － 7 细胞株购自 ATCC。
胚胎牛血清 (FBS，Thermo) ;ＲPMI － 1640 培养基(Life technologies) ;胰蛋
白酶 (Life technologies) ;Hoechst 33342(Beyotime) ;丽丝胺罗丹明 B
(SＲB，Sigma － Aldrich) ;快速瑞姬染液(南京建成生物工程研究所)。
1. 1 仪器
CO2 培养箱(Thermo Forma) ，美国产;倒置显微镜(Olympus) ，日本
产;倒置荧光显微镜(Nikon) ，日本产;酶标仪(Clinibio)奥地利产。
2. 方法
2. 1 细胞培养
MCF － 7 细胞置 37℃、5% CO2 的培养箱中，用含 10% FBS 的 ＲP-
MI1640 培养液培养。胰酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。
2. 2 丽丝胺罗丹明 B(SＲB)法检测药物对细胞增殖的影响
细胞接种 96 孔板，将不同浓度 PEF分别作用细胞 24h、48h和 72h，吸
去培养液，加入 100μL 预冷的 10% TCA 固定，4℃冰箱置 1h。弃固定液，
清水洗净，甩干干燥，每孔加入 100μL0. 4% SＲB作用 30min，用 1%冰醋酸
洗去游离染料。甩干干燥，每孔加入 100μL10mM Tris 溶解，放摇床至染
料全部溶解。最后用酶标仪在 564nm波长处测定 OD值。细胞抑制率 =
1 －(各组平均 OD值 －空白平均 OD值)/(对照组平均 OD值 －空白平均
OD值)。
2. 3 集落形成法
将 MCF － 7 细胞按 500 个 /mL 接种于 6 孔培养板，24h 后，实验组加
入含 6μg /mL和 12μg /mL PEF培养液，空白对照组加入等体积溶剂，置培
养箱中培养 7d，弃液，用瑞氏 －姬姆萨染色后计数含 50 个细胞以上的细
胞集落。集落抑制率(%)= (1 － 实验组平均集落数 /对照组平均集落
数)× 100%
2. 4 Hoechst33258 染色检测细胞形态
MCF － 7 细胞悬液 2mL置于放有盖玻片的 6 孔培养板，药物处理 72h
后，用 Ψ甲醇:Ψ冰乙酸 = 3:1 的细胞固定液 4℃固定 5min，蒸馏水冲洗，
加入 Hoechst33258 工作染液避光染色 10min，蒸馏水冲洗，封片剂封片后
荧光显微镜观察。在 40 ×光镜下随机选择 10 个无重叠视野，计算细胞凋
亡率。
2. 5 统计学方法
采用 SPSS11. 5 统计软件，数据以 珋x ± s表示，计量资料采用 t 检验分
析，P ＜ 0. 05 为差异有统计学意义。
3. 结果
3. 1 PEF对 MCF － 7 细胞增殖的影响
5 ～ 80μg /mL浓度的 PEF 对 MCF － 7 细胞增殖的抑制作用呈时间和
剂量依赖性。药物作用细胞 24h、48h和 72h的 IC50 分别为 51. 85μg /mL、
37. 49μg /mL和 29. 04μg /mL。
3. 2 集落形成法检测 PEF对 MCF － 7 细胞生长的影响
浓度为 6μg /mL和 12μg /mL 的 PEF 作用 MCF － 7 细胞 7 天后，集落
抑制率分别为 52. 84%和 43. 1%。
3. 3 PEF对 MCF － 7 细胞形态的影响
40 倍光镜下观察 5 ～ 20μg /mL 浓度的 PEF 作用 MCF － 7 细胞形态，
发现对照组细胞界限清晰，细胞核呈弥散均匀荧光，凋亡细胞的细胞核或
细胞质内可见浓染致密的蓝色颗粒块状荧光，并可见不规则、强荧光得细
—75—
2015 年 11 月 第 9 卷 第 22 期
大家健康
For all Health 检验与诊断
胞碎片。随机选择 10 个无重叠视野计数并计算凋亡率，结果得知随着药
物浓度增加，细胞的凋亡率明显增加。
4. 讨论
SＲB测定稳定性较好且无成色反应时间依赖性等优点，目前已被广
泛使用于体外抗肿瘤活性筛选［3］。我们使用 SＲB 法检测 PEF 体外抗肿
瘤活性，结果表明 PEF对 MCF － 7 细胞增殖有不同程度的抑制作用，呈时
间和剂量依赖性。
细胞集落形成率是反映肿瘤细胞中具有增殖活性的干细胞的增殖能
力的指标［4］。因此，采用集落形成法进一步验证 PEF 对 MCF － 7 细胞增
殖的抑制作用，结果表明，6μg /mL 和 12μg /mLPEF 组的集落抑制率分别
为 52. 84%和 43. 1%。这说明 PEF 对 MCF － 7 细胞生长有明显的抑制
作用。
为了探讨 PEF对 MCF － 7 细胞凋亡的影响，采用 Hoechst 33258 染色
法观察细胞形态学变化，结果表明，给予不同浓度 PEF 诱导后，细胞出现
细胞核或细胞质中浓染的蓝色颗粒及细胞形态改变，这表明，PEF作用细
胞后可出现典型的凋亡细胞形态学变化，凋亡率与对有显著差异，并呈浓
度依赖性，这说明 PEF可诱导细胞凋亡。
以上结果提示，PEF可显著抑制 MCF － 7 细胞增殖并诱导细胞凋亡，
但其抗肿瘤作用的确切机制以及体内抗肿瘤活性还需进一步研究。
参考文献
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甲状腺良性疾病的病理诊断分析
由广玉
(牡丹江市第一人民医院 黑龙江 牡丹江 157011)
【摘要】目的:分析探讨甲状腺良性疾病的病例诊断方法及临床效果。方法:选择我院 2012 年 1 月 － 2013 年 12 月之间收治的 68 例甲状腺疾病
患者作为观察对象，对所有患者进行手术病例确诊。结果:患者通过病理确诊为甲状腺良性疾病，主要有:结节性甲状腺肿、单纯性甲状腺肿以及甲
状腺炎患者 61 例、甲状腺癌患者 7 例，患者的病灶大小在 0. 25 － 1. 06cm之间，病理表现为灰白色点状或片状的瘢痕。对其中 35 例患者采取甲状腺
局部切除、22 例患者采取患侧腺叶加峡部切除、8 例患者采取甲状腺次全切除、剩余 3 例患者采取甲状腺切除联合局部淋巴结清扫。所有患者的治疗
效果较好，随访至今没有出现死亡病例。结论:对甲状腺良性疾病患者进行病理诊断具有非常重要的意义，帮助医生判断病情的发展程度，为临床治
疗提供重要依据。
【关键词】甲状腺良性疾病;病理诊断;临床效果
【中图分类号】Ｒ446. 8 【文献标识码】B 【文章编号】1009 － 6019(2015)22 － 0058 － 01
甲状腺疾病是临床中非常常见的病症，女性为主要发病人群［1］，相
关资料显示，女性甲状腺疾病患者高于男性 3 倍以上。临床病理诊断过
程中，结节性甲状腺肿大的发生频率非常高，大多为冷结节，但是在特殊
情况下，由于患者肿瘤体积小，临床症状不明显，非常容易出现漏诊和误
诊，部分患者被诊断成为甲状腺微小癌［2］，影响其治疗和康复。因此，本
文对 68 例甲状腺良性肿瘤患者的临床资料进行分析，探讨病理确诊的方
法和疗效，现将结果报道如下。
1. 资料与方法
1. 1 一般资料
选择我院 2013 年 1 月 － 2014 年 12 月之间收治的 68 例甲状腺疾病
患者作为观察对象。68 例患者中有男性 19 例、女性 49 例;患者的年龄在
31 － 78 岁会见，平均年龄为(53. 68 ± 6. 87)岁;患者的病程在 3 个月 － 12
年之间，平均病程为(4. 62 ± 1. 07)年;通过 B超检查发现有实生结节患者
29 例、囊实性结节患者 36 例，均匀回声患者 3 例:结节性甲状腺肿患者39
例、单纯性甲状腺肿患者 12 例、甲状腺炎患者 10 例、甲状腺癌患者 7 例。
患者的病灶大小在 0. 25 － 1. 06cm之间，病理表现为灰白色点状或片状的
瘢痕。
1. 2 方法
对所有患者进行手术病例确诊，对患者的病理标本进行冰冻快速石
蜡切片处理，通过 HE染色之后使用光学显微镜进行观察，患者的检查结
果至少由 2 名以上的主治医生进行判断。
2. 结果
患者的病灶大小在 0. 25 － 1. 06cm 之间，病灶大小在 0. 25 － 0. 50cm
之间的患者由 42 例，病灶大小超过 0. 50cm 以上的患者有 26 例;左侧甲
状腺患者 29 例、右侧甲状腺患者 39 例。患者的病理表现为灰白色点片
状瘢痕，或者是呈现放射状的瘢痕桩，质地多为中等。发生退行性钙化，
未见包膜现象。
确诊为甲状腺瘤疾病患者有 61 例、7 例为甲状腺癌，甲状腺癌患者的
毛玻璃样核相对较为明显，有 4 例患者的细胞中发现核沟，确诊为 II － III
级特细乳头，呈现典型转移的特性。有 2 例患者在术前通过病例诊断确
诊为甲状腺结节，在进行手术病例确诊过程中发现存在完整的包膜肿瘤，
残余的甲状腺组织中出现直径约为 0. 2cm的结节，呈现灰白色，通过手术
病例确诊为淋巴结内乳头状腺癌转移。对其中 35 例患者采取甲状腺局
部切除、22 例患者采取患侧腺叶加峡部切除、8 例患者采取甲状腺次全切
除、剩余 3 例患者采取甲状腺切除联合局部淋巴结清扫。所有患者的治
疗效果较好，随访至今患者均健在，没有出现死亡病例，另有 8 例患者出
现复发，复发主要受到患者手术切除范围以及年龄因素的影响。
3. 讨论
随着社会的发展，人们的生活方式发生了巨大的改变，越来越重视健
康对于生活质量的影响，生活压力的增加和健康体检的普及让甲状腺疾
病的发病率与检出率越来越高，且主要集中在女性人群当中，相关资料显
示，男性群体的甲状腺疾病在发病顺位中没有明显的变化，临床中，甲状
腺功能亢进、甲状腺肿、甲状腺腺瘤、分化型甲状腺癌以及甲状腺炎等都
可能导致甲状腺疾病的病理发生改变，其中大多数均属于良性病变，发生
恶性病变的可能性仅为 2% －5%，因而，通过科学的病例诊断措施，辨别
每一位病人的甲状腺疾病的情况发展状况对于治疗非常关键。
在传统的疾病诊断过程中，触诊是非常重要的判断标准，在触诊过程
中发现患者的甲状腺结节质地较硬、活动度非常小一级表面不光滑都要
怀疑是否出现恶性病变。核素扫描也是诊断的重要途径，在扫描过程中
会出现甲状腺冷结节的表现，除此之外还有热结节、温结节两种甲状腺静
态显像检查提示，但是甲状腺的这一显示特征并不能作为甲状腺疾病发
生恶性病变的依据，更不能作为甲状腺癌的判断标准。当前，多普勒彩色
超声诊断仪是临床检查甲状腺疾病的重要仪器，通过彩色超声能够对患
者甲状腺的性质、包膜、便捷大小等情况进行综合判断，掌握患者甲状腺
结节的血液供应及钙化状况。不同的检验人员和不同的诊断仪对同一患
者检测的结果可能存在差异，因此要严格按照检验标准执行。
病理诊断是当前公认的最为权威的甲状腺疾病诊断标准，通过锋锐
取材刀对将标本以 0. 2cm的间距进行扇形切开，通常情况下，恶性肿瘤呈
现出结节状硬化或者是浸润性生长的病例特性，而良性肿瘤一般体积较
小、直径较小，整体上呈现灰白色，类似于瘢痕组织，边界较为模糊，没有
其他继发性改变。在诊断中，为了确保不出现误诊和漏诊，应当多进行取
材和切片，在本组研究中患者多为甲状腺良性疾病，病灶较小，病例特征
显示为灰白色的点状与片状瘢痕样。退行性钙化现象一般是由于组织坏
死而形成的，在良性结节中能够发现，本组中大多数患者可见退行性钙
化。总而言之，甲状腺良疾病的发病不断上升，对患者进行病理诊断确诊
能够为治疗提供依据，对于患者的恢复具有非常重要的意义。
参考文献
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节性疾病规范化诊疗中的应用［J］. 中国普通外科杂志，2013，22
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检验与诊断
大家健康
For all Health 2015 年 11 月 第 9 卷 第 22 期