全 文 ：基金项目:武汉市中青年医学骨干人才项目(编号:武卫计生通［2015］9 号)
通讯作者:王薇 Tel: (027)83087097 E-mail:7331435@ qq． com
山橘叶镇咳祛痰平喘作用的实验研究
邹戬 王薇 李杰 (武汉市中医医院 武汉 430014)
摘 要 目的:研究山橘叶镇咳、祛痰、平喘的作用。方法:采用氨水诱咳法考察山橘叶对小鼠的镇咳作用;采用酚红排泌法
考察山橘叶对小鼠的祛痰作用;采用磷酸组胺喷雾法考察山橘叶对豚鼠的平喘作用。结果:山橘叶高、中、低剂量能不同程度
地减少氨水诱发的小鼠咳嗽次数，延长小鼠致咳潜伏期(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01) ;山橘叶高剂量能使小鼠气管段酚红排泌量显
著增加(P ＜ 0． 05) ;山橘叶高、中剂量能明显延长磷酸组胺喷雾所致豚鼠哮喘的引喘潜伏期(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01)。结论:山
橘叶具有显著的抗炎、止咳、祛痰和镇痛作用。
关键词 山橘叶具有良好的镇咳、祛痰、平喘作用。
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-049X(2017)02-0256-03
Experimental Study on Antitussive，Expectorant and Antiasthmatic Effects of Fortunella Hindsii Leaves
Zou Jian，Wang Wei，Li Jie (Wuhan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430014，China)
ABSTＲACT Objective:To study the antitussive，expectorant and antiasthetic effects of Fortunella hindsii leaves． Methods:The
antitussive effects were observed by the method of ammonia-induced cough in mice，the expectorant effects were observed by the method
of phenolsulfonphthalein excretion in mice，and the antiasthmatic effects were observed by the method of histamine phosphate spray in
guinea pigs． Ｒesults:The leaves of Fortunella hindsii at low，medium and high doses could decrease the cough times and prolong the
cough latent period (P ＜ 0． 05 or P ＜ 0． 01) ，high dose could promote the phenol red excretion (P ＜ 0． 05) ，and high and medium do-
ses could prolong the incubation period of guinea pigs for asthma caused by histamine phosphate (P ＜ 0． 05 or P ＜ 0． 01)． Conclu-
sion:The leaves of Fortunella hindsii have promising antitussive，expectorant and antiasthmatic effects．
KEY WOＲDS Leaf of Fortunella hindsii;Antitussive;Expectorant;Antiasthmatic
山橘叶为芸香科植物山橘 Fortunella hindsii
(Champ．)Swingle 的叶，广泛分布于广东、广西、福
建等地［1］。山橘以根和叶入药，具有悠久的药用历
史［2］。山橘叶归肺、肝经，具有宣肺止咳、散瘀消肿
之功效，临床主要用于治疗感冒咳嗽、跌打损伤［3］。
目前，国内外学者针对山橘叶的研究不多，且以化学
成分的研究为主［4］，而关于山橘叶药理作用的研究
报道更是鲜见，本研究分别采用氨水诱咳法、酚红排
泌法以及磷酸组胺喷雾法，考察山橘叶的镇咳、祛
痰、平喘的作用，以期为进一步探索其药理作用，指
导临床合理应用提供依据。
1 材料与方法
1． 1 试药
枸橼酸喷托维林片(吉林省东方制药有限公
司，批号:20140901) ;氨茶碱片(国药集团汕头金石
制药有限公司，批号:151001) ;氨水(北京精细化学
品有限责任公司，批号:20140201) ;苯酚红(天津津
北精细化工有限公司，批号:20091110) ;碳酸氢钠
(北京化学试剂公司，批号:010220) ;磷酸组胺(上
海谱振生物科技有限公司，批号:201313)。
山橘叶，产地广东，批号:160110 由湖北天济中
药饮片公司提供，经武汉市中医医院张义生主任药
师鉴 定 为 芸 香 科 植 物 山 橘 Fortunella hindsii
(Champ．)Swingle的叶。
1． 2 动物
SPF级 KM 小鼠，雌雄各半，体质量 18 ～ 22 g，
动物合格证号:42000600014052;普通级 Hartley 豚
鼠，雌雄各半，体质量 250 ～ 300 g，动物合格证号:
42000600014051;实验动物均由武汉生物制品研究
所提供，许可证号:SCXK(鄂)2012-0003;实验动物
均在 12 h光照和 12 h 黑暗环境下自由饮食，温度
22 ～ 24 ℃，湿度 45% ～65%。
1． 3 给药溶液的制备
1． 3． 1 山橘叶供试液［5］ 将山橘叶 60 ℃烘干，剪
成小段，取 200 g置 5 000 ml圆底烧瓶中，采用水回
流法提取 2 次，每次加入蒸馏水 2 000 ml，每次提取
1 h，合并 2 次滤液，减压浓缩至 200 ml，制成浓度为
1． 0 g·ml －1(以生药计)的供试液，冷藏备用，临用
时用蒸馏水配制成不同浓度。
1． 3． 2 枸橼酸喷托维林片混悬液 将枸橼酸喷托
维林片置于研钵中粉碎，取适量加蒸馏水制成浓度
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为0． 5 mg·ml －1的混悬溶液，冷藏备用。
1． 3． 3 氨茶碱片混悬液 将氨茶碱片置于研钵中
粉碎，取适量加蒸馏水制成浓度为5． 0 mg·ml －1的
混悬溶液，冷藏备用。
1． 4 动物分组及给药
KM小鼠适应性饲养 1 周后，进行初筛实验。
将小鼠放入容积约 500 ml 的玻璃钟罩中，以 25 %
浓氨水定量喷雾 10 s，观察小鼠从喷雾开始到腹肌
收缩张嘴(“咳嗽”反应)的时间，以时间在 90 s以内
的小鼠为合格动物。将合格小鼠随机分为 5 组，即
模型对照组、阳性对照组、山橘叶低(1． 50 g·kg －1，
以生药计)、中(3． 00 g·kg －1，以生药计)、高(6． 00
g·kg －1，以生药计)剂量组，每组 10 只。灌胃给药，
模型对照组灌胃蒸馏水，阳性对照组灌胃枸橼酸喷
托维林片混悬液(0． 01 g·kg －1) ，山橘叶低、中、高
剂量组给药山橘叶水提液(0． 075、0． 150、0． 300 g·
ml －1，以生药计) ，灌胃体积均为 20 ml·kg －1，灌胃
时间为 09:00 ～ 10:00，连续灌胃 7 d。
Hartley豚鼠适应性饲养 1 周后，进行初筛实
验。将豚鼠置于封闭的喷雾玻璃容器内，恒压恒速
喷入 2 %磷酸组胺 15 s，观察豚鼠自喷雾开始到哮
喘发作、呼吸困难、抽搐甚至跌倒的时间(“哮喘”反
应时间) ，以“哮喘”反应时间在 120 s以内的豚鼠为
合格动物。将合格豚鼠随机分为 5 组，即模型对照
组、阳性对照组、山橘叶低(1． 00 g·kg －1，以生药
计)、中(2． 00 g· kg －1，以生药计)、高(4． 00 g·
kg －1，以生药计)剂量组，每组 10 只。灌胃给药，模
型对照组灌胃蒸馏水，阳性对照组给药氨茶碱片混
悬液(0． 05 g·kg －1) ，山橘叶低、中、高剂量组给药
山橘叶水提液(0． 100，0． 200，0． 400 g·ml －1，以生
药计) ，灌胃体积均为 10 ml·kg －1，灌胃时间为 09:
00 ～ 10:00，连续灌胃 7 d。
1． 5 镇咳实验［6 ～ 9］
采用氨水诱咳法考察山橘叶对小鼠的镇咳作
用，各组小鼠末次灌胃 1 h 后，将小鼠放入容积约
500 ml的密闭玻璃钟罩内，以 25 % 浓氨水定量喷
雾引咳 10 s。记录各组小鼠咳嗽潜伏期，即喷雾开
始到小鼠腹肌收缩张嘴(“咳嗽”反应)的时间以及
3 min内的咳嗽次数，比较各给药组与模型对照组
镇咳作用的差异。
1． 6 祛痰实验［6 ～ 9］
采用酚红排泌法考察山橘叶对小鼠的祛痰作
用。以酚红浓度为横坐标(X，μg·ml －1)、546 nm
处吸光度(Y)为纵坐标绘制酚红吸光度(OD)曲线，
得回归方程:Y = 0． 130 9 X － 0． 006 2 (r =
0． 999 8)。
各组小鼠末次灌胃 1 h后，腹腔注射0． 5 %酚红
20 ml·kg －1，注射酚红后 30 min后，脱颈处死小鼠，
固定于蛙板上分离气管(剥离周围组织) ，剪下自甲
状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有 2 ml
生理盐水的试管中，再加0． 1 ml 5 % NaHCO3溶液，
448 × g 离心 30 min，取上清液，用可见分光光度计
于波长 546 nm 处测定吸光度(A)值，计算酚红浓
度。
1． 7 平喘实验［10，11］
采用磷酸组胺喷雾法考察山橘叶对豚鼠的平喘
作用。各组豚鼠末次灌胃 1 h 后，置于封闭的喷雾
玻璃容器内，恒压恒速喷入 2 %磷酸组胺 15 s，记录
豚鼠引喘潜伏期(自喷雾开始到哮喘发作、呼吸困
难、抽搐甚至跌倒的时间)。
1． 8 统计学分析
数据以 珋x ± s 表示，采用 SPSS 17． 0软件进行数
据处理，组间比较采用两独立样本 t检验，多组间比
较采用方差分析，以 P ＜ 0． 05为差异具有统计学意
义。
2 结果
2． 1 山橘叶对氨水诱发的小鼠咳嗽的影响
氨水溶液定量喷雾后，各组小鼠在不同时间均
出现咳嗽反应。实验结果显示，与模型对照组比较，
阳性对照组与山橘叶各剂量组小鼠咳嗽潜伏期均不
同程度地延长，小鼠咳嗽次数亦明显减少，差异有统
计学意义(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01) ，说明山橘叶具有
显著的镇咳作用。与阳性对照组比较，山橘叶低、中
剂量组均有显著差异(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01) ，高剂
量组差异无统计学意义(P ＞ 0． 05) ，说明山橘叶高
剂量对小鼠咳嗽潜伏期与咳嗽次数的改善作用与阳
性药枸橼酸喷托维林片相当，镇咳作用效果最好。
观察山橘叶对小鼠镇咳作用的量效关系，可知山橘
叶的镇咳作用与给药剂量呈现明显的正相关。比较
山橘叶 3 个不同的剂量组，可知随着给药剂量的增
加，镇咳作用增强，且中、高剂量与低剂量组差异有
统计学意义(P ＜ 0． 05或 P ＜ 0． 01)。见表 1。
表 1 山橘叶对小鼠的镇咳作用(珋x ± s，n =10)
组别
给药量
(g·kg －1) 潜伏期(s) 咳嗽次数(次)
模型对照组 － 21． 31 ± 4． 53 48． 66 ± 3． 17
阳性对照组 0． 01 58． 76 ± 3． 96b 17． 73 ± 4． 04b
山橘叶低剂量组 1． 50 37． 63 ± 6． 55a，d 31． 92 ± 4． 65a，d
山橘叶中剂量组 3． 00 45． 75 ± 5． 91b，c，e 23． 21 ± 3． 54b，c，e
山橘叶高剂量组 6． 00 55． 80 ± 5． 07b，f 19． 36 ± 3． 31b，f
注:与模型对照组比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01;与阳性对照组比较，c
P ＜ 0． 05，dP ＜ 0． 01;与山橘叶低剂量组比较，eP ＜ 0． 05，fP ＜ 0． 01。
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中国药师 2017 年第 20 卷第 2 期 China Pharmacist 2017，Vol． 20 No． 2
2． 2 山橘叶对小鼠气管段酚红排泌量的影响
在祛痰实验中，酚红排泌量的多少以 A 值大小
表示，即 A值与酚红排泌量呈正相关。实验结果显
示，与模型对照组比较，阳性对照组与山橘叶高剂量
组小鼠气管酚红排泌量显著增加(P ＜ 0． 05或 P ＜
0． 01) ;山橘叶中、低剂量组小鼠气管段酚红排泌量
虽有一定的升高，但差异无统计学意义(P ＞ 0． 05)。
与阳性对照组比较，山橘叶的 3 个不同剂量组均有
显著差异(P ＜ 0． 01) ，可知山橘叶虽有一定的祛痰
作用，但是作用效果显著弱于阳性药枸橼酸喷托维
林片。与山橘叶低剂量组比较，高剂量组祛痰作用
差异有统计学意义(P ＜ 0． 05) ，中剂量组差异无统
计学意义(P ＞ 0． 05) ，可知山橘叶祛痰作用与给药
剂量具有一定的量效关系。上述结果表明，山橘叶
高剂量具有一定的祛痰作用，而中、低剂量祛痰作用
不明显。见表 2。
表 2 山橘叶对小鼠的祛痰作用(珋x ± s，n =10)
组别 给药量(g·kg －1) A值
模型对照组 － 0． 15 ± 0． 10
阳性对照组 0． 01 0． 53 ± 0． 19b
山橘叶低剂量组 1． 50 0． 16 ± 0． 13c
山橘叶中剂量组 3． 00 0． 19 ± 0． 14c
山橘叶高剂量组 6． 00 0． 28 ± 0． 09a，c，d
注:与模型对照组相比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01;与阳性对照组比
较，cP ＜ 0． 01;与山橘叶低剂量组比较，dP ＜ 0． 05。
2． 3 山橘叶对磷酸组胺诱发的豚鼠哮喘的影响
磷酸组胺定量喷雾后，各组豚鼠在不同时间均出
现哮喘反应。实验结果显示，与模型对照组比较，阳
性对照组和山橘叶各剂量组豚鼠哮喘潜伏期均有不
同程度地延长，且山橘叶高、中剂量组差异显著(P ＜
0． 05或 P ＜ 0． 01) ;山橘叶低剂量虽也能延长豚鼠哮
喘潜伏期，但差异无统计学意义(P ＞ 0． 05)。与阳性
对照组比较，可知山橘叶高剂量平喘作用与氨茶碱片
相当，中、低剂量平喘作用效果与氨茶碱片差异显著
(P ＜0． 05或 P ＜0． 01)。观察山橘叶对豚鼠平喘作用
的量效关系，可知山橘叶的平喘作用与给药剂量呈现
明显的正相关，且中、高剂量与低剂量组有显著性差
异(P ＜0． 05或 P ＜ 0． 01) ，表明山橘叶的平喘作用随
着给药剂量的增大而增强。见表 3。
表 3 山橘叶对豚鼠的平喘作用(珋x ± s，n =10)
组别 给药量(g·kg －1) 潜伏期
模型对照组 － 62． 79 ± 12． 43
阳性对照组 0． 05 112． 96 ± 18． 69b
山橘叶低剂量组 1． 00 71． 08 ± 17． 89d
山橘叶中剂量组 2． 00 87． 05 ± 19． 65a，c，e
山橘叶高剂量组 4． 00 102． 32 ± 20． 47b，f
注:与模型对照组相比较，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01;与阳性对照组比
较，cP ＜ 0． 05，dP ＜ 0． 01;与山橘叶低剂量组比较，e P ＜ 0． 05，f P ＜
0． 01。
3 讨论
3． 1 山橘叶给药剂量的确定
山橘叶的临床用量为 6 ～ 12 g，本实验按 10 g
的常用量设置动物实验给药的高、中、低剂量，并按
照比表面积法分别换算小鼠与豚鼠的给药量。
3． 2 山橘叶镇咳、化痰、平喘的作用
山橘叶资源分布广泛，在广东、广西以及福建为
常用中药，临床上主要用于治疗感冒咳嗽与跌打损
伤，具有很好的疗效。然而，关于山橘叶药理作用的
研究报道却鲜见，笔者通过动物实验证明，山橘叶具
有明显的镇咳、化痰、平喘作用，且镇咳、平喘作用具
有一定的量效关系。
中医认为哮喘的发生为宿痰内伏于肺，复加外
感、体虚、饮食不当等因素，以致痰阻气道、肺气上逆
所致。本研究中山橘叶对氨水诱咳法与磷酸组胺喷
雾法分别建立咳嗽与哮喘模型均有显著的拮抗作
用，推测其作用机理，可能与直接抑制气管平滑肌的
收缩相关，其作用靶点之一可能在 β 肾上腺素受体
上。
本研究从药效学角度，初步研究山橘叶对不同
模型动物在镇咳、化痰、平喘方面的作用效果，推测
其作用机理，为进一步探索奠定实验依据，为今后合
理开发山橘叶的药用资源，研制新的治疗感冒药物
提供数据支撑，具有重要意义。
参 考 文 献
1 黄新忠，陈小明，韦晓霞，等．福建山橘、金豆野生资源调查与分析
［J］．植物遗传资源学报，2010，11(4) :509-513
2 沈小玲，曾惠芳，陈珍，等．山橘的化学成分研究．中国药学杂志，
2002，37(1) :14-17
3 冉先德，徐扣根，任超，等．中华药海［M］．哈尔滨:哈尔滨出版社，
1998:153
4 陈伟鸿，张媛燕，卢丽平，等．山橘果皮及叶片挥发油成分的分析
比较［J］．福建师范大学学报(自然科学版) ，2016，32(2) :69-75
5 陈安山，刘志超，夏婷，等．地枇杷水煎液对小鼠镇咳作用的实验
研究［J］．右江民族医学院学报，2009，31(5) :784-785
6 陈奇．中药药理研究方法学［M］． 北京:人民卫生出版社，2006:
623-643
7 何晓燕，李倩，周颖，等．暖木条荚蒾抗炎镇咳祛痰作用的实验研
究［J］．时珍国医国药，2015，26(2) :306-308
8 陆翠芬，郭美仙，柳斌，等．毛大丁草叶对小鼠镇咳祛痰作用的研
究［J］．云南中医中药杂 志，2012，33(10) :57-58
9 贺润丽，王晓英，韩毅丽，等．款冬花不同部位提取物镇咳祛痰作
用研究［J］．时珍国医国药，2015，27(1) :77-79
10 陈会丛，杨海润，钟雨秋，等． 同仁堂儿童清肺口服液的镇咳、祛
痰、平喘作用的实验研究［J］．中医药导报，2016，22(6) :37-39
11 章红，黄萍，羊波，等．小春花镇咳平喘有效部位活性筛选［J］．中
华中医药学刊，2016，34(3) :700-704
(2016-08-25 收稿 2016-10-18 修回)
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