全 文 ：网络出版时间:2014 － 2 － 24 13:43 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． Ｒ． 20140224． 1343． 015． html
白鲜皮水提物对 ApoE- /-小鼠动脉粥样硬化晚期病变形成的影响
王丽丽1，吕新勇2，李 琳1，李志强1，2，李彦林1，萧 伟2，许 扬1
(1．中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193;2．江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222002)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2014． 03． 015
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2014)03 － 0360 － 06
中国图书分类号:Ｒ-332;Ｒ284． 1;Ｒ322． 74;Ｒ329． 24;Ｒ543. 502. 2
摘要:目的 研究白鲜皮水提物(cortex dictamni aqueous ex-
tract，CDAE)对载脂蛋白 E基因缺损小鼠主动脉弓粥样硬化
晚期病变形成的影响及其机制。方法 将 40 只 ApoE-/-小
鼠随机分成空白对照组和 CDAE 高、中、低 3 剂量组(CDAE
3. 2、1. 6、0. 8 g·kg －1)，每组 10 只。从第 12 周龄开始给药
至 18 周龄。实验结束时测定给药前后总胆固醇、甘油三酯、
高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平。取各组小
鼠主动脉弓，OCT 包埋，每只小鼠制作 80 张病理切片(厚 6
μm)，计算各组主动脉弓粥样硬化病变的面积。体外实验测
定 CDAE给药后平滑肌细胞的增殖和迁移能力。结果
CDAE给药后可明显减少动脉粥样硬化斑块面积，CDAE中、
高剂量组给药后 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变面积均小于
对照组(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，各给药组血脂水平均有不同程
度的下降。体外实验表明，CDAE可明显抑制大鼠血管平滑
肌细胞的增殖和 PDGF 诱导的平滑肌细胞迁移。结论
CDAE对 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化晚期病变形成具有明显
的抑制作用，其作用机制可能与降低血脂水平，抑制平滑肌
细胞的增殖和迁移能力有关。
关键词:白鲜皮;ApoE基因缺损小鼠;动脉粥样硬化;平滑肌
细胞;增殖;迁移
收稿日期:2013 － 11 － 12，修回日期:2013 － 12 － 06
基金项目:国家“重大新药创制”科技重大专项“十一五”及“十二
五”计划课题(No 2011ZX09401-014，2012ZX09103201-
012)
作者简介:王丽丽(1985 －)，女，硕士，研究方向:心血管疾病药理学
及创新中药研究开发，E-mail:wanglizhi0917@ 163． com;
许 扬(1965 －)，男，博士，研究员，硕士生导师，研究方
向:心血管疾病药理学及创新中药研究开发，通讯作者，
E-mail:vascular888@ 126． com
白鲜皮为芸香科植物白鲜(Dictamnus dascarpus
Turcz)的干燥根皮。因其具有清热燥湿、祛风解毒
的功效，在传统中药学上归为清热燥湿类。临床主
要用于皮肤病如湿热疮毒、皮肤瘙痒、湿疹、风疹、疥
癣、疮癞、风湿热痹、黄疸尿赤等的治疗［1］，但其在
心血管疾病中是否具有治疗作用的研究甚少。笔
者［2］的前期研究中，发现白鲜皮水提物(cortex dict-
amni aqueous extract，CDAE)可明显抑制载脂蛋白 E
基因缺损(ApoE-/-)小鼠早期动脉粥样硬化病变的
形成，显示了白鲜皮对于干预心血管疾病具有初步
作用。在此基础上，笔者进一步研究了 CDAE 对
ApoE-/-晚期动脉粥样硬化的影响，并探讨了相关的
作用机制。
1 材料
1． 1 实验材料
1． 1． 1 动物 ApoE-/-小鼠，♀，6 周龄，体质量 15
～ 16 g。购于北京大学医学部实验动物中心［SCXK
(京)2006 － 0008］。饲养于中国医学科学院药用植
物研究所 SPF 级动物房内［SCXK(京)2008 －
0019］。20℃，12 h 昼夜交替。
1． 1． 2 药材 白鲜皮(分别购于河北安国药材市
场及北京仟草中药饮片有限公司，产地辽宁，由本研
究所 邹 忠 梅 教 授 鉴 定，样 品 保 存 号:NO．
010001850001)生药 100 g。利用 2 L 蒸馏水 4℃冷
浸 24 h，超声波提取 25 min过滤，再重复 2 次加入 2
L蒸馏水超声波提取 25 min 过滤，合并提取液，于
旋转蒸发仪上 80℃浓缩至 100 ml，即得含生药量 1
000 g·L －1的白鲜皮水提物。
1． 1． 3 仪器 上海亚荣 ＲE52AA旋转蒸发仪，日立
7060 全自动生化分析仪，美国 Beckman XL-90 超速
离心机，美国 Beckman Coulter 离心管切割机，美国
Hamilton MicroLab 500 稀释器，德国 Leica 1900 冰冻
切片机，德国 Leica DM4000M正置显微镜，美国 Bio-
Tek酶标仪，上海仪器有限公司 UV-2102C /PC /PCS
型分光光度计。
1． 1． 4 试剂 血清总胆固醇(TC)、甘油三酯
(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白
(HDL-C)试剂盒(中生北控生物科技股份有公司，
北京)，油红 O染料(Sigma，USA)，PBS(中杉金桥生
物技术有限公司，北京)，OCT 包埋剂(日本樱花精
机株式会社，东京)，胶原蛋白酶Ⅰ、胰蛋白酶(Sig-
ma，USA)。HPLC检测所用标准品为白鲜碱(批号:
111654 －200301)、黄柏酮(批号:111923 －201102)、梣
酮(批号:111700 － 200602)(中国食品药品检定研
·063· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Mar;30(3):360 ～ 5
究院，北京)。
2 方法
2． 1 HPLC分析 色谱条件为:Waters 色谱仪，色
谱分析柱 Thermo Synronis aQ Dim C18 柱(5 μm，250
mm ×4. 6 mm)，流动相为甲醇 ∶ 水(60 ∶ 40，V /V)，
流速为 1 ml·min －1，检测波长为 236 nm，进样量为
20 μl，柱温设置为 30℃(Fig 1)。
0.12
0.10
0.08
0.06
0.04
0.02
0.00
0.00 10.00 20.00 30.00 40.00
Time/min
A
U
Dictamnine
Obacunone
Fraxinellone
Fig 1 CDAE analyzed by HPLC
2． 2 动物分组 60 只 6 周龄的 ApoE-/-♀小鼠，所
有小鼠均以高脂饲科(含 0. 3%胆固醇，20%脂肪，
其余成分与普通饲料相同，购于中国医学科学院动
物研究所)喂养，自由摄食和饮水。喂养高脂饲料
至 12 周，测定各组小鼠的血脂 4 项，对 TC 高于 10
mmol·L －1的小鼠作为研究对象，随机分成 CDAE
高、中、低剂量组和对照组 4 组，每组 10 只。
2． 3 给药方法 CDAE 1000 g·L －1分别稀释成
高、中、低 3 个浓度，每组按每只每天 3. 2、1. 6、0. 8 g
·kg －1剂量灌胃，空白对照组按相同剂量给予稀释
药物用的灭菌纯净水。每两周称重 1 次，调整给药
量，连续给药 6 周(Fig 2)。
2． 4 血脂测定 每组给药前后测定血脂各项指标，
包括 TC、TG、LDL-C、HDL-C。各组小鼠于给药前后
禁食 12 h，眼眶取血，5 000 r·min －1离心 10 min，分
离上层血清，－ 80℃保存。实验结束后，用日立全自
动生化仪一次全部测定完毕。
2． 5 主动脉粥样硬化病变面积定量 各组给药结
束后，小鼠经乙醚麻醉后开胸，以灭菌 PBS 液(0. 01
mol·L －1，pH =7. 2)经心室灌流 5 min后，分离主动
脉根部和升主动脉，OCT包埋，制作厚 6 μm 冰冻切
片。从第 1 张血管腔及主动脉瓣可见处开始留取切
Fig 2 Protocol for feeding and administration of CDAE
Experiments were designed to study advanced stages of atherogene-
sis． In the protocol，mice were fed a high fat diet from 6th week to 18th
week． All mice were orally administrated three dose of CDAE every day
from 12th to 18th week，respectively． For control experiment，sterile pu-
rified water was used
片，每只鼠连续切 80 张。每 5 张抽取 1 张切片(共
16 张)作油红 O 染色，苏木精复染细胞核。组织切
片在 40 倍显微镜下摄取图像，参照文献［3 － 4］的方法
作病变面积定量分析，用 Image Pro Plus 6． 0(Media
Cybernetics，USA)软件分析斑块面积，计算斑块面积
占血管总面积之比。
2． 6 平滑肌细胞增殖和迁移的测定
2． 6． 1 原代平滑肌细胞的培养 大鼠胸主动脉平
滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的培
养参照文献报道的方法［4］，取 180 ～ 200 g ♂ SD 大
鼠，脱臼处死后浸泡在 75%酒精中消毒片刻，无菌
条件下迅速取出胸主动脉，放入 D-Hanks液中冲洗，
去除血管周围结缔组织，刮除血管内膜，剥离出中
膜，在青霉素小瓶中剪成约 1 mm ×1 mm碎块，加入
0. 25%胶原蛋白酶 I，置入 37℃摇床中，消化过夜。
将消化好的组织块 1 000 r·min －1离心 10 min，倒去
上清液，加入 20% FCS 的 DMEM 培养基，吹打混匀
后，转入培养瓶中，于 37℃、5% CO2 培养箱中静置
培养，每 3 d换液 1 次。选用 4 ～ 6 代的细胞，平滑
肌细胞通过形态学及 α-SM actin免疫组织化学方法
鉴定。
2． 6． 2 VSMC增殖反应的测定 采用 MTT 法。取
96 孔细胞培养板，每孔加入 0. 1 ml含大鼠 VSMC的
培养液(细胞数 1. 0 × 108·L －1)，在 37℃、5% CO2
培养箱中培养 24 h 后，换为含 CDAE 的培养液，使
其终浓度为 12. 5、6. 25、3. 125、1. 56 g·L －1，继续培
养至 24、48、72 h，分别于每孔加入 20 μl MTT(5 g·
L －1，PBS)，继续孵育 4 h。弃上清，晾干后加入 100
·163·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Mar;30(3)
μl DMSO，震荡 15 min 后用酶标仪检测(波长 570
nm)，按文献方法［5］计算抑制率。
2． 6． 3 VSMC 迁移能力的测定 采用 Transwell 小
室法［6 － 7］。在 Boyden 小室中下层加入 200 μl 含有
趋化因子 PDGF-BB 的 DMEM 培养基，给药组为
PDGF-BB加不同浓度的 CDAE，阴性对照组为单纯
DMEM培养基。VSMC 经胰酶消化后计数，配制成
1． 0 × 108·L －1。将 200 μl细胞悬液加入 Boyden小
室上层中，中间置以孔径 8 μm 的聚碳酸酯膜，37℃
孵育 4 h后，吸弃多余培养液，使用棉棒仔细去除聚
碳酸酯膜上的未迁移细胞，D-hanks 液清洗 2 次，用
无水乙醇固定 10 min，苏木精染色 10 min，蒸馏水冲
洗。将滤膜置载玻片(下室面朝上)，以中性树胶封
片，在显微镜下(200 ×)随机计数 5 个视野中的细
胞数，实验重复 3 次。
2． 7 统计学分析 应用 SPSS 16. 0 软件，根据资料
要求进行方差分析。
3 结果
3． 1 给药前后对动物体重的影响 各组给药前后
均称量体重，对照组、CDAE低、中、高剂量组的体重
分别为(20. 64 ± 1. 14)g、(21. 04 ± 0. 95)g、(21. 65
± 0. 60)g、(21. 38 ± 1. 40)g，经统计学处理各组间
差异无显著性(P ＞ 0. 05)，说明 CDAE 给药后对小
鼠体重无明显影响。同时，对各组小鼠的摄食情况
观察表明，对照组和 3 个给药组小鼠摄食和饮水均
正常，活泼程度亦未见明显差异。
3． 2 给药前后血脂各项指标的变化 实验结束后
采集小鼠血液，离心分离血清，测定各组小鼠血清脂
质水平(Tab 1)。结果表明，与对照组比较，3 个给
药组血清中 TC、TG、LDL-C 含量均有一定下降(Tab
1)，TC 值 CDAE 中剂量组差异有显著性(P ＜
0. 01)，TG含量在 CDAE 低、中剂量组下降较明显
(P ＜ 0. 01)，LDL-C 值 CDAE 低、中、高剂量组均有
明显下降(低、高剂量组，P ＜ 0. 05;中剂量组 P ＜
0. 01)，HDL-C 值中剂量组差异有显著性(P ＜
0. 01)。
3． 3 给药后对动脉粥样硬化病变面积的影响
ApoE-/-小鼠于 6 周龄开始给予高脂负荷饲料至 18
周龄，诱导晚期动脉粥样硬化病变的形成。从第 12
周龄起，分别给予低、中、高剂量的 CDAE，空白对照
组给予溶剂，至第 18 周时处死小鼠，取主动脉弓组
织制作病理切片，计算病变面积比率。实验结果表
明，CDAE低、中、高剂量组与空白对照组相比较，动
脉粥样硬化斑块面积均见减少(Fig 3)。定量分析
表明，CDAE低、中、高剂量组的病变面积比率分别
(24. 2 ± 2. 4)%、(20. 1 ± 2. 9)%、(17. 3 ± 4. 3)%，
对照组为(25. 8 ± 3. 7)%。经统计学处理，CDAE
中、高剂量组病变面积与对照组比较差异有显著性
(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，而低剂量组与对照组比较则
无明显差异(P ＞ 0. 05)。
Fig 3 Cortex dictamni aqueous extracts inhibit advanced
atherosclerosis in ApoE-deficient mice(n = 8)
Compared with the control group (A)，the mid (C)and high (D)
dose groups have distinct reducing effects on the advanced atherosclerotic
formation． LD: low dose，MD:mid dose，HD:high dose． * P ＜
0. 05，＊＊P ＜ 0. 01(E)vs control
3． 4 CDAE对大鼠 VSMC增殖影响 实验结果表
明，与空白对照组比较，CDAE 在给药浓度为 12. 5 g
·L －1时，对 VSMC的增殖呈现出明显的抑制作用，
当 CDAE浓度达 50 g·L －1时，细胞的抑制率分别达
到 89%，97%和 82%。可以看出，随着 CDAE 浓度
的增高，对 VSMC 增殖的抑制作用不断增强(Tab
2)。
3． 5 CDAE 对大鼠 VSMC 迁移的影响 考察了在
PDGF诱导下，大鼠 VSMC平滑肌迁移的情况，设阴
·263· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Mar;30(3)
Tab 1 Comparison of serum lipid contents in mice of 4 groups (珋x ± s，n = 8)
Group
Serum lipid contents
TC /mmol·L －1
BA AA
TG /mmol·L －1
BA AA
HDL-C /mmol·L －1
BA AA
LDL-C /mmol·L －1
BA AA
Control 18． 53 ± 2． 96 27． 96 ± 4． 16 9． 25 ± 0． 54 19． 88 ± 1． 82 11． 52 ± 1． 28 6． 74 ± 0． 82 7． 53 ± 2． 78 11． 02 ± 3． 51
HD 19． 03 ± 4． 67 24． 45 ± 3． 52 8． 63 ± 2． 63 18． 9 ± 2． 30 10． 97 ± 6． 48 7． 77 ± 0． 68 8． 72 ± 0． 73 7． 02 ± 0． 88*
MD 18． 09 ± 7． 23 20． 84 ± 2． 60＊＊ 8． 81 ± 0． 39 9． 82 ± 1． 04＊＊ 10． 85 ± 1． 61 8． 48 ± 0． 89＊＊ 7． 95 ± 1． 27 6． 53 ± 0． 68＊＊
LD 17． 55 ± 4． 31 24． 99 ± 3． 13 9． 07 ± 0． 38 9． 84 ± 0． 74＊＊ 10． 73 ± 0． 93 6． 97 ± 0． 99 7． 93 ± 0． 81 8． 14 ± 1． 69*
BA:Before administration;AA:After administration;HD:High dose;MD:Mid dose;LD:Low dose． * P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs control
Tab 2 Absorbing value of various groups
Group
Absorbance
24 h 48 h 72 h
Control 0． 255 ± 0． 02 0． 331 ± 0． 06 0． 324 ± 0． 02
3． 125g·L －1 0． 251 ± 0． 03 0． 318 ± 0． 03 0． 304 ± 0． 02
6． 250 g·L －1 0． 239 ± 0． 02 0． 289 ± 0． 03 0． 304 ± 0． 02
12． 500 g·L －1 0． 200 ± 0． 03* 0． 244 ± 0． 02＊＊ 0． 272 ± 0． 02*
25． 000 g·L －1 0． 195 ± 0． 02＊＊ 0． 168 ± 0． 05＊＊ 0． 154 ± 0． 03＊＊
50． 000 g·L －1 0． 028 ± 0． 01＊＊ 0． 011 ± 0． 01＊＊ 0． 057 ± 0． 06＊＊
* P ＜ 0． 05，＊＊P ＜ 0． 01 vs control
性对照组、PDGF 诱导组和 CDAE 组进行观察。结
果表明，PDGF 能明显诱导平滑肌细胞的迁移，
PDGF诱导组与阴性对照组比较，细胞迁移数从
(25. 6 ± 6. 3)个增加为(44. 8 ± 9. 4)个，含 12. 5 g·
L －1 CDAE培养基的细胞迁移数为(28. 1 ± 7. 1)个。
CDAE 组与 PDGF 诱导组间差异有显著性(P ＜
0. 01)，说明 CDAE 在体外条件下对平滑肌细胞迁
移有明显的抑制作用。
4 讨论
迄今的研究表明，白鲜皮具有明显的抗心肌缺
血［8］、抗炎［9 － 10］、抑制免疫反应［11 － 12］的作用，这一
系列的作用与动脉粥样硬化的发病机制具有密切的
关联 性［13］。笔 者 前 期 研 究 表 明［2］，CDAE 对
ApoE-/-小鼠早期动脉粥样硬化的形成具有明显的
抑制作用。与其他干预动脉粥样硬化的药物不同的
是，CDAE在抑制早期动脉粥样硬化病变形成的同
时，对血脂水平并无明显的影响，而明显升高血清抗
氧化酶的活性，并降低人血清 LDL的氧化易感性。
本实验继续观察了 CDAE 对 ApoE-/-小鼠晚期
动脉粥样硬化病变的影响。实验结果表明，CDAE
对晚期动脉粥样硬化斑块的形成同样具有较强的抑
制作用，并具有量效关系。与 CDAE 干预 ApoE-/-
小鼠早期动脉粥样硬化病变形成机制不同的是，
CDAE连续给药后，血脂水平明显下降，显示 CDAE
可通过降低血脂水平而抑制晚期动脉粥样硬化复杂
病变的形成和发展。从给药后对血脂各成分的抑制
效果分析，CDAE连续给药后，不仅对 TC、TG、LDL-
C具有明显的降低作用，而且提升了 HDL-C 水平，
促进了机体本身对于血中脂质的代谢和利用。本实
验给药仍采用前期研究中的小鼠给药剂量(根据人
用剂量换算)，从抑制动脉粥样硬化斑块面积的效
果上看体现了量效关系，但在降低血脂水平方面
CDAE中剂量组效果非常明显(P ＜ 0. 01)，而高剂
量组效果仅 LDL-C 有明显下降，这与笔者在研究
CDAE的长期毒性实验中，大剂量给药后肝脏 ALT、
Alkaline phosphatase指标有所上升具有一定的关联
性(数据待发表)，表明 CDAE 大剂量给药后可能对
肝脏功能有所影响。
研究表明，在动脉粥样硬化晚期复杂病变形成
机制中，血管平滑肌细胞(VSMC)的增殖和迁移是
病变过程中起着重要的作用因素。当血管受损时，
血管中膜的 VSMC 发生表型转换，由合成型转变成
收缩型，相对稳定的细胞开始增生，从中膜迁移到内
膜，从而形成新生内膜和动脉粥样硬化斑块病变。
而内膜损伤后，黏附、聚集的血小板释放的血小板衍
生生长因子 (platelet derived growth factor，PDGF)
已被确认与 VSMC 增殖有关［14］。为了研究 CDAE
对晚期动脉粥样硬化的作用机制，我们分离了大鼠
主动脉弓的平滑肌细胞，探讨了给药对大鼠 VSMC
增殖和迁移的影响。结果表明，CDAE 不同剂量对
VSMC的增殖有一定的抑制作用，在不同时间节点
上，给药浓度和细胞生长的抑制率具有量效关系;同
时，CDAE可以明显降低平滑肌细胞的迁移数量。
表明 CDAE可能直接阻断平滑肌细胞增殖和迁移的
信号传导通路，从而减少 ApoE-/-小鼠动脉粥样硬
化晚期复杂病变的形成。有关分子机制需进一步深
入研究。
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Cortex dictamni inhibits formation of advanced atherosclerotic
lesions in ApoE-deficient mice
WANG Li-li1，L Xin-yong1，2，LI Lin1，LI Zhi-qiang1，2，LI Yan-lin1，XIAO Wei2，XU Yang1
(1． Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College，
Beijing 100193，China;2． Kanion Pharmaceutical Co． Ltd．，Lianyungang Jiangsu 222002，China)
Abstract:Aim To determine whether Cortex dictam-
ni aqueous extract(CDAE)has any effect on the for-
mation of advanced aortic atherosclerotic lesions in
ApoE-/-mice and to explore the possible mechanisms
involved． Methods 40 female ApoE-/- mice were
randomly divided into four groups(n = 10):the control
group，high dose CDAE group，medium dose CDAE
group and low dose CDAE group． All animals were fed
a high fat diet and the three CDAE groups were orally
administered with CDAE at different doses (3． 2 mg·
g －1，1. 6 mg·g －1，0. 8 mg·g －1)for 6 weeks from
1 2 th to 1 8 th week while the control group got the same
·463· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Mar;30(3)
volume of distilled water． At the end of the experi-
ment，the serum levels of lipids including total choles-
terol (TC)，triglyceride (TG)，high-density lipopro-
tein cholesterol (HDL-C)，low-density lipoprotein
cholesterol (LDL-C)were determined． The heart and
proximal aorta were removed from the mice and then
cut directly under and parallel to the aortic cusps and
the upper portions were embedded in OCT compound．
The samples were cut into a total of 80 sections (6μm)
and the size of the atherosclerotic lesion in each aortic
section was evaluated． In vivo experiment，MTT assay
was used to view proliferation of VSMCs． Cell migra-
tion was determined by Transwell assay． Ｒesults
CDAE administration could distinctly reduce the ad-
vanced atherosclerotic lesion size in ApoE-/- mice．
Compared with the control group，the atherosclerotic
lesions of mid dose and high dose administration groups
were significantly reduced (P ＜ 0． 05，P ＜ 0. 01)． The
blood lipids levels had reduced to some degree in each
CDAE administration group． In vivo experiment，
CDAE significantly inhibited proliferation and migration
capabilities of vascular smooth muscle cells． Conclu-
sions CDAE administration may obviously reduce the
advanced lesion size in ApoE-/-mice by reducing the
serum lipid levels and inhibiting the proliferation and
migration of VSMCs．
Key words:cortex dictamni;ApoE-/- mice;athero-
sclerosis;vascular smooth muscle cells;proliferation;
migration
网络出版时间:2014 － 2 － 24 13:43 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． Ｒ． 20140224． 1343． 016． html
新生霉素通过诱导 DNA损伤抑制慢粒白血病细胞增殖
黄立森1，2，陈显凌5，6，柯 方3，许建文1，2，郑 鸣4，许建华1，2，吴丽贤1，2
(1．福建医科大学药学院药理系，福建 福州 350004;2．福建省天然药物药理学重点实验室，福建 福州 350004;
3．福建医科大学药学院药化系，福建 福州 350108;4． 福建医科大学解剖系，福建 福州 350108;
5．福建医科大学附属协和医院血液科，福建 福州 350001;6．福建省血液病研究所，福建 福州，350001)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2014． 03． 016
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2014)03 － 0365 － 08
中国图书分类号:Ｒ329． 24;Ｒ329． 28;Ｒ342． 3;Ｒ733． 720． 22;
Ｒ979. 1
摘要:目的 研究新生霉素(novobiocin，Nov)在体外抑制慢
粒白血病(CML)细胞增殖作用与诱导 DNA损伤的关系。方
法 MTT及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)染色
法检测 Nov对 CML细胞增殖的影响;流式细胞术检测 CML
细胞反应性氧自由基(ＲOS)含量、DNA 损伤数量、细胞周期
阻滞情况和细胞凋亡的比例;Western blot 探讨 Nov 对 DNA
损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。
收稿日期:2013 － 11 － 19，修回日期:2013 － 12 － 05
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 30901824，81173096);
福建省自然科学基金杰出青年项目(No 2011J06013);福
建省高校跨世纪优秀人才项目(No JA11101)
作者简介:黄立森(1983 －)，男，硕士生，研究方向:肿瘤药理学，E-
mail:83427584@ qq． com;
陈显凌(1980 －)，男，博士，主治医师，研究方向:血液学，
共同第一作者;E-mail:315561399@ qq． com;
吴丽贤(1975 －)，女，博士，副教授，博士生导师，研究方
向:肿瘤药理学，通讯作者，E-mail:18259000966 @ 126．
com
结果 Nov明显抑制 CML细胞增殖，半数抑制率(IC50)分别
为(232. 50 ± 0. 22)μmol· L －1和(237. 10 ± 0. 13)μmol·
L －1，减少 CML细胞的增殖分裂代数;Nov 增加细胞 ＲOS 水
平，诱导细胞阻滞在 G2 /M 期并增加凋亡率，呈剂量依赖关
系;Nov 增加 H2AX、ATM、P53 的磷酸化水平以及 Parp 和
Caspase-3 的切割，而减少 CDC25A和 CDC25C的表达。结论
Nov通过激活 ＲOS产生，诱导 CML细胞 DNA的损伤和线
粒体途径激活的细胞凋亡。
关键词:新生霉素;ＲOS;DNA 损伤;r-H2AX;细胞周期检测
点，细胞周期阻滞;凋亡
慢性粒细胞白血病(CML)［1］，是一种骨髓造血
功能紊乱的克隆异常增生性疾病，以嵌合染色体
BCＲ-ABL［2］阳性为主要特点，该基因产物为分子质
量 210 ku的具有酪氨酸酶活性的 p210 蛋白。伊马
替尼(IM)是 p210 蛋白的竞争性抑制剂，能够竞争
抑制 p210 蛋白的酪氨酸酶活性，发挥抗 CML 的作
用，对 BCＲ-ABL阳性初始治疗的慢性期 CML 患者
疗效明显，随着临床的长期广泛使用，暴露出越来越
多的问题，其一、IM 对急性期、急变期以及 BCＲ-
·563·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2014 Mar;30(3):365 ～ 72