全 文 ：[ 收稿日期] 　2009-03-12
[ 基金项目] 　黑龙江省科技攻关计划项目(GC06C324)
[ 通讯作者] 　＊王丽娜 , Tel:(0451)86386769;E-mail:wln710710
@sina.com
HPLC法测定白鲜皮中白鲜碱的含量
张　玲1 ,李云涛1 ,王丽娜1＊ ,栾　杰2
(1.哈药集团世一堂制药厂 ,黑龙江 哈尔滨　150088;
2.黑龙江大庆油田总医院集团龙南医院 ,黑龙江 大庆　1634537)
　　[ 摘要] 　目的:测定白鲜皮中白鲜碱的含量。方法:样品加甲醇回流提取 60 min ,提取液蒸干 , 定容于 25 mL容量瓶。采用
HPLC 法测定白鲜皮中白鲜碱的含量 , 使用 C18色谱柱 , 乙腈-水(37∶63)为流动相 , 检测波长 228 nm , 流速 1 mL·min-1 , 柱温 40
℃。结果:白鲜碱线性范围 0.05 ～ 1.2μg , r=0.999 7 ,平均回收率为 99.9 %。结论:样品处理方法合理 , 方法学考察符合定量
要求 ,结果准确 , 可用于白鲜皮中白鲜碱的含量测定。
[ 关键词] 　白鲜皮;白鲜碱;高效液相色谱
[ 中图分类号] 　R284.1　　[文献标识码] 　B　　[ 文章编号] 　1005-9903(2009)09-0008-02
　　白鲜皮为芸香科白鲜属植物白鲜 Dictamnus
dasycarpus Turcz的干燥根皮 ,具有清热燥湿 、祛风解
毒等功效 。白鲜皮中主要含有白鲜碱 、茵芋碱 、崖椒
碱等生物碱及 酮 、黄柏酮等内酯类化合物。近年
来文献报道白鲜皮中所含的白鲜碱为钙离子拮抗
剂 ,具有能抑制细胞外钙离子内流 ,松弛平滑肌舒张
血管 ,使血压下降的作用。本文用 HPLC 法对白鲜
皮中所含白鲜碱进行了含量测定 ,方法简单 ,易行 ,
准确率高 ,为控制和评价白鲜皮的质量提供科学依
据。
1　仪器与试药
1.1　仪器 　Agilent1100 高效液相色谱仪 , 包括
G1379A 脱气机 、G1311A 四元泵 、G1316A 柱温箱 、
G1314A 可变波长检测器 、G1329A 自动进样器 、
G2170AA色谱工作站 。
1.2　药品　白鲜碱对照品(中国药品生物制品检定
所 ,110851-200504);白鲜皮药材来自哈药集团世一
堂制药厂饮片分公司 。甲醇为色谱纯 ,水为蒸馏水 ,
其余试剂为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　Alltima-C18(4.6 mm ×250 mm , 5
μm);乙腈-水(37∶63)为流动相 ,检测波长 228 nm ,流
速 1 mL·min-1 ,柱温 40 ℃;理论板数按白鲜碱峰计
不低于5 000。
2.2　对照品溶液的制备　取白鲜碱对照品适量 ,精
密称定 ,加甲醇制成 50μg·mL-1的白鲜碱对照品溶
液 。
2.3　供试品溶液的制备　取本品细粉 ,约 1.5 g ,精
密称定 ,加甲醇适量 ,加热回流 60 min ,放冷 ,摇匀 ,
滤过 ,用甲醇少量多次洗涤容器与滤渣 ,滤液蒸干 ,
残渣加甲醇使溶解 ,定容于 5 mL 量瓶中 , 摇匀 , 即
得 。
2.4　测定方法　分别精密吸取对照品溶液与供试
品溶液各 10 μL ,注入高效液相色谱仪 ,如法测定 。
2.5　方法学考察[ 1]
2.5.1　标准曲线 　精密称取白鲜碱对照品 10.03
mg ,置 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇
匀 ,即得浓度为1.0 mg·mL-1的标准品贮备液 。精密
吸取浓度为 1.0 mg·mL-1的标准品贮备液 0.5 ,1.0 ,
2.0 ,3.0 mL ,分别置 25 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,分别制成含白鲜碱 0.02 , 0.04 , 0.08 , 0.12
mg·mL-1的标准品溶液 ,再从 1.0 mg·mL-1溶液中精
密吸取 0.5 mL ,置 100 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,制成含白鲜碱 0.005 mg·mL-1的标准品溶
液 。分别精密吸取上述溶液各 10μL ,注入液相色谱
仪 ,记录色谱图。以标准品浓度为横坐标 ,峰面积积
分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程为 Y =1.5
×105X -2.4×103(r =0.999 7)线性范围在 0.05 ～
1.2μg 间呈良好的线性关系。
·8·
第 15卷第 9 期
2009年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.15 , No.9
Sep., 2009
2.5.2　精密度试验　吸取浓度为 0.05 mg·mL-1的
对照品溶液 10μL注入液相色谱仪 ,重复进样 6次 ,
计算峰面积 RSD=0.9%。
2.5.3　重复性试验　取同一批号的白鲜皮 ,按 2.3
供试品溶液制备方法制备 6份样品 ,色谱条件如上
所述 ,计算 RSD=1.8 %,说明重复性较好 。
2.5.4　加样回收率试验　取已知含量的白鲜皮样
品(含量 0.22 mg·g-1),精密称取 0.75 g 6份样品 ,分
别加入白鲜碱对照品 0.17 , 0.18 , 0.17 , 0.15 , 0.16 ,
0.18 mg ,加甲醇适量 ,加热回流 60 min ,放冷 ,摇匀 ,
过滤 ,用甲醇少量多次洗涤容器与滤渣 ,滤液蒸干 ,
残渣加甲醇使溶解 ,定容于 5 mL 量瓶中 ,摇匀 ,即
得。分别精密吸取上述溶液各 10 μL ,注入液相色谱
仪 ,测定 ,即得。结果见表 1。
表 1　白鲜皮中白鲜碱含量测定加样回收率结果
样品称
样量(g)
样品中白鲜
碱含量(mg)
对照品加
入量(mg)
实测量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
0.755 9 0.166 3 0.17 0.334 9 99.17
0.773 2 0.170 1 0.18 0.361 1 100.55
0.770 0 0.169 4 0.17 0.338 7 99.58
99.6 1.0
0.735 0 0.161 7 0.15 0.309 4 98.45
0.752 3 0.165 5 0.16 0.323 4 98.69
0.778 2 0.171 2 0.18 0.353 1 101.04
2.5.5　稳定性试验　取白鲜皮药材 ,按供试品溶液
的制备方法配制成供试品溶液 ,分别于第 0 , 2 ,4 , 6 ,
8 ,10 h ,精密吸取供试品溶液 10μL注入液相色谱仪
中 ,记录色谱图 。结果由峰面积计算 RSD=1.0%,
表明本实验样品溶液在 10 h内稳定。
2.5.6　样品测定　按上述方法测定 3 批药材中白
鲜碱的含量 , 测定结果分别为 0.022%、0.021%、
0.022%。
3　讨论
3.1　检测波长的选择[ 2] 　白鲜碱对照品溶液在 190
～ 400 nm波长范围内 ,最大吸收波长为226.5 nm ,综
合参考资料最终采用与之相近的 228 nm 作为检测
波长。
3.2　流动相的确定[ 3 ～ 5] 　我们比较了流动相乙腈-
水(40∶60),乙腈-水(35∶65),乙腈-水(37∶63)3 个比
例对样品的分离 ,结果显示 ,当乙腈和水的比例达到
37∶63时可以使样品分离达到要求 ,且保留时间较
短 ,故最终选择乙腈-水(37∶63)作为流动相 。
3.3　提取方法的选择[ 6] 　我们分别考察了超声提
取 30 ,60 min 和加热回流提取 30 , 60 ,90 min几种提
取方法 ,结果显示 ,加热回流提取方法明显优于超声
提取方法 ,且加热回流 60 min 即可基本将白鲜碱提
取完全 ,因此最终采用加热回流 60 min作为样品提
取方法 。
[参考文献]
[ 1] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典[ S] .一部 , 北
京:化学工业出版社 , 2005:附录Ⅹ Ⅷ .
[ 2] 　李艳园 ,彭如习 , 陈　桦 , 等.HPLC 法测定白鲜皮中白
鲜碱的含量[ J] .中药材 , 2006 , 29(8):802.
[ 3] 　郑立行 , 王志伟 ,吴　钢 , 等.白鲜皮中白鲜碱薄层扫描
测定[ J] .上海医科大学学报 , 1996 , 23(4):303.
[ 4] 　冉启琼 , 罗　兰 , 朱丹妮.白鲜皮质量标准研究[ J] .中
医药学刊 , 2005 , 23(9):1585.
[ 5] 　朱丹妮 , 徐　强 , 邱南生.白鲜皮中白鲜碱含量测定
[ J] .植物资源与环境 , 1998 , 7(2):61.
[ 6] 　苏伟梁 , 靳丽梅.正交法优选白鲜皮的提取工艺[ J] .黑
龙江医药 , 2006 , 19(1):16.
《中医药通报》2010年征订启事
《中医药通报》是中华中医药学会主办的系列杂志之一 , 为国内外公开发行的综合性中医药学术期刊。 本刊的办刊方针和
任务是:全面报道我国中医 、中西医结合 、中药研究在临床 、预防 、科研 、教学等方面的最新进展 、成果和诊疗经验 , 探讨中医药
学术提高的思路和方法 ,介绍国内外中医药研究动态 ,开展学术争鸣 ,反映中医药市场现状与开拓前景 , 临床治疗新方法及新
药研究开发成果发布。《中医药通报》是国内唯一的通报类中医杂志。 2007 年获国家中医药管理局颁发的全国中医药优秀期
刊奖。
本刊为双月刊 ,大 16 开本 ,每期 66 页 , 逢双月 25日出版。国内刊号 CN35-1250 R, 国际刊号 ISSN1671-2749。国内定价每期
10.00元 , 全年定价 60.00 元。期刊邮发代号:34-95 , 订阅:全国各地邮政局(所)欢迎新老订户订阅。
·9·
第 15卷第 9 期
2009年 9 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.15 , No.9
Sep., 2009