全 文 ：第 23卷 ,第 4期 光　谱　实　验　室 Vo l . 2 3 , No . 4
2 0 0 6年 7月 Chinese Journal of Spectroscopy Laboratory July , 2 0 0 6
瓯柑果皮中总黄酮的提取及含量的测定①
① 温州市科技局科研基金项目 ,编号: Y2004A020
② 联系人 ,电话: ( 0577) 86689984; E-mai l: yangxiaofeng1965@ yah oo. com. cn
③ 2005届本科毕业生
作者简介:杨小凤 ( 1965— ) ,女 ,浙江省平阳县人 ,副教授 ,主要从事天然产物化学与生物电分析的研究工作。
收稿日期: 2006-03-16;接受日期: 2006-04-10
杨小凤②　朱一力③　戴歌心③
(温州医学院药学院化学教研室　浙江省温州市　 325035)
摘　要　为了进一步开发利用瓯柑的资源 ,研究了瓯柑果皮中总黄酮的提取条件及含量测定。结果表
明 ,总黄酮提取的最佳条件是: 用 80%乙醇在 60℃下超声波提取 1h、固液比为 1∶ 18、提取 3次。瓯柑果皮中
总黄酮的含量为 2. 143% ,平均回收率为 99. 80% , RSD= 0. 88% (n= 6)。 此结果为瓯柑药效功能的进一步
研究和资源开发利用提供科学依据。
关键词　瓯柑 ,总黄酮 ,提取 ,分光光度法。
中图分类号: O657. 32　　　文献标识码: B　　　文章编号: 1004-8138( 2006) 04-0810-05
1　前言
瓯柑 Citrus Suavissina Hort . et Tanaka是芸香科柑桔属的一个栽培变种 ,是浙江温州的传统
特产 ,为浙南佳果之一。瓯柑果皮黄色 ,清甜汁多 ,略带苦味 ,营养价值较高 ,并具有祛热生津 ,化痰
止咳 ,清凉解毒等功效。唐代以来曾列为贡品 ,成为温州最具代表性的水果。在温州民间素有“端午
瓯柑似羚羊”之说 ,并广泛流传瓯柑可退烧、治咽喉炎、头痛等热性疾病。目前 ,瓯柑的肉汁供食用和食
品工业外 ,果皮一般遗弃成为污染环境的废物。我们在对瓯柑的研究中发现:皮中的微量元素含量普遍
高于果肉中的微量元素的含量 [1 ] ,为了有效利用废弃的瓯柑果皮和搞清瓯柑药效的物质基础 ,为瓯柑综
合开发利用提供科学依据 ,我们对瓯柑果皮中总黄酮的提取条件及含量测定进行研究。
2　实验部分
2. 1　仪器
UV-7502PC紫外可见分光光度计 (上海欣茂仪器有限公司 ) ; BS110S电子天平 (北京赛多利斯
天平有限公司 ) ; KQ-250DE型医用数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ;回流装置。
2. 2　试剂
芦丁 (中国药品生物制品检定所 ) ;其他试剂均为分析纯 (上海试剂一厂 ) ;实验用水为二次蒸馏
水。
2. 3　样品
瓯柑于 2005年 3月购于温州茶山丁岙 ,由温州师范学院生物与环境科学系陈贤兴高级实验师
鉴定 ,取皮、晒干、粉碎。准确称取样品 ,以 1∶ 20(g∶m L)固液比加入石油醚 ,回流 1h进行脱色脱脂
处理 ,过滤 ,将滤渣中石油醚挥发干 ,备用。
3　结果与讨论
3. 1　最佳提取条件的选择
3. 1. 1　提取方法的选择
准确称取处理过的样品 4. 0g ,加入 80mL 70%乙醇溶液 ,分别用回流提取 ,索氏提取 ,超声波提
取等方法提取 1h,过滤 ,滤液定容至 100. 00mL,得供试品。再按 3. 2. 6项操作 ,分别测定总黄酮的含
量。结果表明 ,超声波提取总黄酮含量最高 ,索氏提取总黄酮含量最低 ,且超声波提取设备简易 ,易
操作和便于控制。 因此 ,本实验选择超声提取方法。
3. 1. 2　提取溶剂的选择
分别用乙醇、甲醇、丙酮、水作提取溶剂 ,进行超声波提取 ,按 3. 1. 1项操作得供试品并测定总
黄酮的含量。 结果表明 ,甲醇提取效果最佳 ,乙醇次之 ,丙酮最差。 综合考虑毒性和提取效率 ,本实
验选择乙醇作提取溶剂。
3. 1. 3　提取温度的选择
用乙醇作提取溶剂 ,分别在 30、 40、 50、 60、 70、 80℃等进行超声波提取 ,按 3. 1. 1项操作得供试
品并测定总黄酮的含量 ,结果见图 1。结果表明 ,温度在 30— 70℃总黄酮含量随着温度的升高显著增
加 ,当温度大于 70℃时 ,总黄酮含量又下降 ,这是由于温度越高 ,分子运动越剧烈 ,渗透、扩散、溶解
速度加快 ,使黄酮类化合物容易转移到溶剂中 ,因此 ,随着温度的升高 ,总黄酮提取率越高 ;但温度
过高可能引起黄酮类化合物结构被氧化破坏导致总黄酮提取效率下降。 故为了使总黄酮有较高的
提取效率 ,并且保证活性成分不被破坏 ,本实验选择 60℃作为提取温度。
3. 1. 4　正交设计优化提取条件 [2 ]
　　按L 9 ( 34 )正交设计表
对提取的 4个因素和 3个
水平进行试验 ,各因素和
水平见表 1,分析结果见
表 2。 表 2的分析结果
表明 ,影响超声波提取瓯
表 1　考察的因素及水平
因素水平 乙醇浓度 (% )
A
提取时间 ( h )
B
固液比 ( g∶mL)
C
提取次数 (次 )
D
1 60 0. 5 1∶ 14 1
2 70 1. 0 1∶ 16 2
3 80 1. 5 1∶ 18 3
柑果皮中总黄酮的主次因素为D-A-C-B (因 R4R1R3R2 ) ,即提取次数 , 乙醇浓度 ,固液比 ,提取时间。
最佳的提取条件组合为 A3B2C3D3 (据最大 K值 ) ,即 80%乙醇在 60℃下超声波提取 1. 0h、固液比 1∶
18、提取 3次。
表 2　试验方案及分析结果
序号 A B C D 吸光度 ( A ) 总黄酮含量 (% )
1 1( 60) 1( 0. 5) 1( 1∶ 14) 1( 1) 0. 409 1. 745
2 1( 60) 2( 1. 0) 2( 1∶ 16) 2( 2) 0. 286 1. 803
3 1( 60) 3( 1. 5) 3( 1∶ 18) 3( 3) 0. 391 2. 090
4 2( 70) 1( 0. 5) 2( 1∶ 16) 3( 3) 0. 312 2. 050
5 2( 70) 2( 1. 0) 3( 1∶ 18) 1( 1) 0. 436 1. 958
6 2( 70) 3( 1. 5) 1( 1∶ 14) 2( 2) 0. 494 1. 890
7 3( 80) 1( 0. 5) 3( 1∶ 18) 2( 2) 0. 360 1. 960
8 3( 80) 2( 1. 0) 1( 1∶ 14) 3( 3) 0. 440 2. 035
9 3( 80) 3( 1. 5) 2( 1∶ 16) 1( 1) 0. 429 1. 995
K 1 5. 638 5. 755 5. 670 5. 698
K 2 5. 898 6. 066 5. 848 5. 653
K 3 5. 990 5. 975 6. 008 6. 175
K 1 1. 879 1. 918 1. 890 1. 899
K 2 1. 966 2. 022 1. 949 1. 884
K 3 1. 997 1. 992 2. 003 2. 058
R 0. 118 0. 104 0. 113 0. 174
811第 4期 杨小凤等:瓯柑果皮中总黄酮的提取及含量的测定
3. 2　总黄酮含量测定 [3 ]
3. 2. 1　供试品溶液的制备
按正交试验得到的最佳提取方案 ,准确称取经脱色脱脂处理过的样品 4. 0g (相当于原试样
5. 0g ) ,加入 72mL 80%乙醇溶液 ,在 60℃下超声波提取 1. 0h、提取 3次。过滤 ,适当浓缩 ,再用 80%
乙醇定容至 100mL容量瓶中 ,备用。
3. 2. 2　标准品溶液的制备
准确称取芦丁标准品 26. 4mg于小烧杯中 ,加少量 80%乙醇 ,超声溶解后 ,定容至 100m L容量
瓶中 ,摇匀 ,得芦丁标准溶液 ,浓度为 26. 4mg /100mL。
图 1　芦丁标准品的吸收曲线
图 2　瓯柑果皮的吸收曲线
812 光谱实验室 第 23卷
3. 2. 3　测定波长的选择
分别精密量取芦丁标准溶液及供试品溶液 0. 5mL于 10mL刻度试管中 ,用水稀释至 4. 0mL,各
加入 5%的亚硝酸钠溶液 0. 4mL,摇匀 ,放置 6min,加 10%的硝酸铝溶液 0. 4m L,摇匀 ,放置 6min后 ,
加 4%的氢氧化钠溶液 4mL,最后用水稀释至刻度 ,摇匀 ,放置 15min。按波长扫描的操作方法分别对
芦丁标准品及供试品进行波长扫描 ,波长范围为 200— 700nm,扫描结果见图 1,图 2。 二者均在
500nm处有最大吸收峰 ,故选择 500nm为测定波长。
3. 2. 4　校准曲线的制备
准确量取芦丁标准溶液 0. 0、 0. 4、 0. 8、 1. 2、 1. 6、 2. 0、 2. 4、 2. 8、 3. 0mL分别置于 10mL刻度试管
中 ,均用水稀释至 4. 0mL,按 3. 2. 3项操作 ,配制各溶液。以 0号试剂空白作参比 ,在 500nm处分别
测定吸收值 ( A ) ,以吸收值 A为纵坐标 ,浓度 C为横坐标绘制标准曲线 ,得回归方程 A= 0. 1167C-
0. 0144, r= 0. 9998(n= 8)。结果表明芦丁含量在 1. 056— 7. 920mg /100mL范围内与吸收值线性关
系良好。
3. 2. 5　稳定性试验
　　准 确量取芦丁 标准溶液
2. 0mL,其余操作按 3. 2. 3项操作 ,
配制溶液 ,以试剂空白作参比 ,在
500nm处测定吸收值 ( A ) ,按时间
扫描的操作方法对时间进行扫描 ,
结果表明在 5min— 4h内吸收值稳
定。
3. 2. 6　样品测定
表 3　总黄酮含量的测定结果
序号 吸光度
( A )
总黄酮含量
(% )
平均含量
(% )
RSD
(% )
1 0. 481 2. 123
2 0. 479 2. 114
3 0. 490 2. 161 2. 143 0. 875
4 0. 485 2. 140
5 0. 491 2. 165
6 0. 488 2. 153
　　准确量取供试品 0. 4mL, 6份 ,按 3. 2. 3
项操作 ,配制各溶液。以试样空白作参比 ,在
500nm处测定各吸收值 ,并计算含量 ,结果
见表 3。
3. 2. 7　回收率试验
分别准确量取瓯柑果皮供试品 0. 2mL 6
份 ,分别加入 26. 4mg /100mL芦丁标准 0. 5、
0. 6、 0. 7、 0. 8、 0. 9、 1. 0mL,按 3. 2. 6项操作 ,
表 4　加标回收率
样品量
( mg)
加入量
( mg )
测得值
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
0. 214 0. 132 0. 349 102. 3
0. 214 0. 158 0. 371 99. 37
0. 214 0. 185 0. 395 97. 84 99. 80
0. 214 0. 211 0. 426 100. 51
0. 214 0. 238 0. 450 99. 16
0. 214 0. 264 0. 477 99. 62
测定各吸收值 A ,得样品的平均回收率 99. 80% ,结果见表 4。
4　结论
黄酮类化合物具有活血化淤、保肝抗炎、抗菌、抗病毒及泻下、解痉的多种药理作用。因此 ,瓯柑
果皮总黄酮的有效提取及含量测定 ,是了解其药理作用和综合开发利用的重要基础工作。试验结果
表明 ,总黄酮提取的最佳条件是:用 80%乙醇在 60℃下超声波提取 1h、固液比为 1∶ 18、提取 3次。瓯
柑果皮中总黄酮的含量为 2. 143% ,平均回收率为 99. 80% , RSD= 0. 88% (n= 6)。此结果为瓯柑果
皮总黄酮的提取方法、药效功能的进一步研究及资源开发利用提供科学依据。
813第 4期 杨小凤等:瓯柑果皮中总黄酮的提取及含量的测定
参考文献
[1 ]杨小凤 ,仇佩虹 ,叶筱琴 .瓯柑中微量元素的测定 [ J ].广东微量元素科学 , 2004, 11( 9): 41— 43.
[2 ]孙荣恒 .应用数理统计 [M ] .北京:科学出版社 , 1998. 218— 227.
[3 ]杨小凤 ,仇佩虹 ,叶筱琴 .马蹄金中黄酮成分分析 [ J ].光谱实验室 , 2005, 22( 6): 1211— 1215.
Extraction and Determination of Total Flavone
inCitrus Suavissina Hort . et Tanaka
YAN G Xiao-Feng　 ZHU Yi-Li　 DAI Ge-Xin
(Depar tment of Chem istry , Pharmaceu tical Col lege of Wenzhou Med ical College, Wenzhou , Zhej iang 325027,P . R. China )
Abstract　 The flavonoid in Citrus Suavissina Hort . et Tanaka was ex t racted wi th 80%
ethanol at 60℃ under supersonic w ave for 1. 0h in so lid-liquid ratio 1∶ 18 fo r th ree times, and
determined by spect ropho tometry as 2. 143% w ith average recovery o f 99. 80% and the relativ e
standa rd deviation of 0. 88% (n= 6) , w hich of fers a scientific evidence fo r the further studies of
medicinal efficiency and comprehensiv e utili za tion o f Citrus Suavissina Hort . et Tanaka.
Key words 　 Citrus Suav issina Hort. et Tanaka, Total Flav onoids, Ex t raction,
Spect ropho tometry.
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2006年 1月 1日
814 光谱实验室 第 23卷