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秦岭终南山白鲜皮梣酮、黄柏酮和白鲜碱含量的测定



全 文 :研究报告
Research Report
秦岭终南山白鲜皮梣酮、黄柏酮和白鲜碱含量的测定
周亚福 1,2* 王宇超 1,2 黎斌 1,2 卢元 1,2 张燕 1,2 李为民 1,2
1陕西省西安植物园,陕西省植物研究所,西安, 710061; 2陕西省植物资源保护与利用工程技术研究中心,西安, 710061
*通讯作者, zyf820207@126.com
摘 要 采用高效液相色谱法(HPLC) (色谱柱: Sun fire TM C18 (150 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相:甲醇-水(60:
40, 52:48),流速 1.0 mL/min,检测波长分别为 236 nm和 220 nm,室温),对秦岭终南山产中药白鲜皮中主要
药用成分梣酮、黄柏酮和白鲜碱的含量进行测定,以东北鸡西产白鲜皮为对照组,依据中国药典对秦岭终南
山产中药白鲜皮的质量进行初步评估。结果表明:秦岭终南山产白鲜皮中梣酮和黄柏酮的含量均符合中国药
典(2015)标准,且秦岭终南山产白鲜皮中梣酮、黄柏酮和白鲜碱的含量均远高于东北主产区白鲜皮的含量。
秦岭终南山产白鲜皮质量优良,具有潜在的开发利用价值。
关键词 白鲜皮,秦岭,梣酮,黄柏酮,白鲜碱
Determination of the Contents of Fraxinellone, Obacunone and Dictamnine
in Dictamni Cortex of Qinling Mountains
Zhou Yafu 1,2* Wang Yuchao 1,2 Li Bin 1,2 Lu Yuan 1,2 Zhang Yan 1,2 Li Weimin 1,2
1 Xian Botanical Garden of Shaanxi Province, Institute of Botany of Shaanxi Province, Xian, 710061; 2 Shaanxi Engineering Research Centre for Con-
servation and Utilization of Botanical Resources, Xian, 710061
* Corresponding author, zyf820207@126.com
DOI: 10.13417/j.gab.035.000457
Abstract Based on high performance liquid chromatography (HPLC) technique (the chromatographic column was
performed on a Sun fire TM C18 (150 mm×4.6 mm, 5 μm) column, the mobile phase was methanol and water (60:
40, 52: 48), the flow rate was 1.0 mL/min, the detection wavelength was 236 nm and 220 separately and the column
was at room temperature), we determined the contents of fraxinellone, obacunone, dictamnine in dictamni cortex of
Qinling Mountains of China, while used the dictamni cortex in Jixi of southeastern area as control group, we then
preliminary evaluated the quality of dictamni cortex of Qinling Mountains according to Chinese Pharmacopeia.
The results showed that the contents of fraxinellone and obacunone in dictamni cortex of Qinling Mountains were
consistent with the standard of Chinese Pharmacopeia (2015) and the contents of fraxinellone, obacunone and
dictamnine in dictamni cortex from Qinling Mountains were higher than that from the main producing district of
northeast in China. It was suggested that dictamni cortex of Qinling Mountains was good in quality which had
potential value of exploration and utilization.
Keywords Dictamni cortex, Qinling Mountains, Fraxinellone, Obacunone, Dictamnine
基金项目:本研究由国家自然科学基金项目(31200152),陕西省青年科技新星项目(2015KJXX-90)和陕西省科学院科技计划项目
(2014K-23)共同资助
基因组学与应用生物学,2016年,第 35卷,第 2期,第 457-461页
Genomics and Applied Biology, 2016, Vol.35, No.2, 457-461
中药白鲜皮为芸香科(Rutaceae)白鲜属(Dictam-
nus L.)植物白鲜(Dictamnus dasycarpus Turcz.)的干燥
根皮,又称八股牛、羊蹄草、臭根皮和北鲜皮等,为我
国常用中药,为历代本草及《中国药典》2015版收载
(国家药典委员会,主编, 2015,中国医药科技出版社,
pp.110-111),主要指标和药效成分为梣酮、黄柏酮和
白鲜碱等。现代药理研究表明,中药白鲜皮具具祛
风、燥湿、清热、解毒等功效,主治风热湿毒所致的风
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
疹、湿疹、疥癣、黄疸、湿热痹、皮肤痒疹等症(中国植
物志编委会,主编, 1997,科学出版社, pp.91)。另外,
白鲜皮对皮肤化脓性溃疡、结核性脓胸和晚期肺癌
的治疗有一定效果(樊宪伟等, 2003)。中药白鲜皮的
应用范围广泛,市场需求量连年增长。在实践中,东
北各省为白鲜皮的主要产区,其质量优良,总产量占
全国总量的 80%以上,多年来一直倍受国内外市场
的青睐,而其它地区白鲜皮应用较少。
目前中药白鲜皮仅靠野生资源满足市场需求,
且连年无序的滥采滥挖,造成东北主产区野生白鲜
皮蕴藏量连年大幅度下降。秦岭是陕西药用植物的
主产区,秦岭药用植物的蕴藏量极为丰富,素有“秦
地无闲草”之说。为了进一步开拓白鲜皮药源,缓解
市场供应,本研究以秦岭终南山为主要研究对象,并
以东北鸡西产白鲜皮作为对照,依据中国药典(2015)
标准和相关文献(李艳园等, 2006; 马光等, 2009; 吴
颖等, 2009;杨晓娟等, 2010),对秦岭终南山产中药
白鲜皮中主要药用成分含量进行测定,并对秦岭产
白鲜皮药材的质量进行初步评估,以期为进一步合
理开发利用秦岭产中药白鲜皮提供科学依据。
1结果与分析
1.1药效成分测定
依据供试品溶液的制备方法和色谱条件,对秦
岭终南山和东北鸡西产白鲜皮中梣酮和黄柏酮进行
提取测定,得到黄柏酮和梣酮混合标准品及样品的
HPLC图谱(图 1)。结果显示,在 3.3.1色谱条件下进
行检测,供试品溶液中黄柏酮和梣酮的分离效果、稳
定性、重现性和加样回收率表现均较理想。
依照供试品溶液的制备和色谱条件,对秦岭终
南山和东北鸡西产白鲜皮中白鲜碱进行提取测定。
得到白鲜碱标准品及白鲜皮的 HPLC图谱(图 2)。结
图 1黄柏酮和梣酮混合对照品(a)和白鲜皮药材样品(b) HPLC
分析
Figure 1 HPLC analysis of mixture control substance of oba-
cunone and fraxinellone (a) and the sample of dictamni cortex (b)
图 2白鲜碱标准品(a)和白鲜皮样品(b) HPLC分析
Figure 2 HPLC analysis of standard substance of dictamnine (a)
and the sample of dictamni cortex (b)
果显示,在 3.4.1色谱条件下进行检测,供试品溶液
中白鲜碱的分离效果、稳定性、重现性和加样回收率
表现均较好。
1.2线性关系考察
梣酮标准品浓度(单位 mg/mL)对峰面积标准
曲线的线性方程为:Y=3×10 000 000X-29 433 (R2=
0.997, n=9) (表 1),表明梣酮浓度与进样量在 0.000 05~
0.8 mg/mL范围有良好的线形关系;黄柏酮标准曲线
的线性方程(表 1):Y=4×1 000 000X+9 027 (R2=0.992,
n=9),表明黄柏酮浓度与进样量在 0.000 065~
1.04 mg/mL范围有良好的线形关系。白鲜碱的标准
曲线的线性方程(表 1):Y=7×10 000 000X-21 183 (R2=
0.996, n=10),表明白鲜碱浓度与进样量在 0.000 5~
0.5 mg/mL范围有良好的线性关系。结果显示,该方
法准确率较高,可分别用于中药白鲜皮中梣酮、黄柏
酮和白鲜碱含量的测定。
1.3药效成分含量
依据中国药典标准(2015 版),中药白鲜皮中梣
酮的含量不低于 0.05%,黄柏酮的含量不低于 0.15%。
本研究对秦岭终南山产白鲜皮中梣酮、黄柏酮和白
标准品
Standard
梣酮
Fraxinellone
黄柏酮
Obacunone
白鲜碱
Dictamnine
线性方程
Linear equation
Y=3×10 000 000X-
29 433 (n=9)
Y=4×1 000 000X+
9 027 (n=9)
Y=7×10 000 000X-
21 183 (n=10)
R2
0.997
0.992
0.996
线性范围(mg/mL)
Linear range (mg/mL)
0.000 05~0.80
0.000 065~1.04
0.000 5~0.50
表 1梣酮,黄柏酮和白鲜碱线性关系
Table 1 Linear relationship of fraxinellone, obacunone and dic-
tamnine
458
鲜碱含量进行测定,并以东北鸡西白鲜皮为对照,结
果显示,秦岭终南山产白鲜皮中梣酮和黄柏酮的含
量分别为 0.18%和 0.59%,东北主产区鸡西产白鲜皮
中梣酮和黄柏酮的含量分别为 0.08%和 0.49% (表 2),
其各组分含量均高于中国药典规定最低含量标准,
故秦岭终南山和东北鸡西产白鲜皮质量均符合中国
药典(2015版)标准。
此外,秦岭终南山产白鲜皮中梣酮、黄柏酮、白
鲜碱的含量均远高于东北鸡西产白鲜皮的含量(表 2)。
其中,秦岭终南山产白鲜皮中梣酮的含量为 0.18%,
是东北鸡西产白鲜皮梣酮含量(0.08%)的两倍多;秦
岭终南山产白鲜皮中黄柏酮的含量为 0.59%,约为东
北鸡西产白鲜皮黄柏酮含量(0.49 %)的 1.2倍;秦岭
终南山产白鲜皮中白鲜碱含量为 0.03%,为东北鸡西
产白鲜皮白鲜碱含量(0.02%)的 1.5倍。从有效成分
含量来看,同一时期采收的白鲜皮药材,秦岭终南山
的质量较东北鸡西的质量优。
2讨论
在实践中,东北产白鲜皮占市场的主流且质优,
而秦岭产白鲜皮市场份额极小,且关于秦岭产白鲜
皮药材质量的研究则鲜见报道。本研究显示,秦岭终
南山产白鲜皮中梣酮和黄柏酮的含量均远高于东北
主产区鸡西及其它部分地区产白鲜皮中梣酮(李翔
等, 2007)和黄柏酮(吴颖等, 2009)的含量。此外,白鲜
碱作为白鲜皮的主要药效成分之一,秦岭终南山产
白鲜皮中白鲜碱的含量(0.03%)也远高于东北鸡西
(0.02%)及其它多数地区产白鲜皮中白鲜碱的含量
(李艳园等, 2006; 马光等, 2009)。综合药典标准表
明,秦岭终南山产白鲜皮药材质量优良。因此,在白
鲜市场需求量大且东北主产区野生资源蕴藏量不断
减少的情况下,很有必要对秦岭终南山产白鲜皮进
行进一步开发利用,并积极开展秦岭地区白鲜的人
工繁殖、规范化栽培等研究,以缓解市场对中药白鲜
皮的需求。
3材料与方法
3.1实验材料
本研究秦岭终南山产白鲜皮采自终南山 (33°
5931 N, 108°5813.6 E)野生植株(2013年 10月),对
照样品白鲜皮购自黑龙江省鸡西市药材公司(2013
年秋季收购),经鉴定为芸香科白鲜属植物白鲜的根
皮。所取样品于室温阴干,经粉碎机粉碎,过 60目筛
后备用。
3.2仪器与试药
仪器设备为Waters 2487高效液相,超声波(KQ
2200DB, 昆山),旋转蒸发仪(IKA RV 10),水浴锅(I-
KA HB 10),真空泵(SHB-Ⅲ,郑州长城科工),粉碎机
(ZN-02型),电子天平(FA1004B),Eppendorf移液器。
试验用药为甲醇,乙醇,白鲜碱(纯度 98%,来自
中国药品生物制品检定所),梣酮(纯度 98%,来自中
国药品生物制品检定所),黄柏酮(纯度 98%,来自中
国药品生物制品检定所)。
3.3黄柏酮和梣酮的测定
3.3.1色谱条件
流动相:甲醇-水(60: 40);色谱柱为 Sun fire TM
C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm);检测波长:236 nm (杨
晓娟等, 2010);流速1.0 mL/min;室温。
3.3.2对照品溶液制备及线性关系
精密称取梣酮和黄柏酮标准品 3.0 mg和 3.9 mg,
置 5 mL离心管中,用 Eppendorf移液器精密吸取甲
醇 3 mL溶解,摇匀,得混合标准品母液,混合标准品
中梣酮最终浓度为 1.0 mg/mL,黄柏酮最终浓度为
1.3 mg/mL。
产地 /中国药典
Producing area/Chinese pharmacopeia
秦岭终南山
Qinling mountains
鸡西(东北)
Jixi city (Northeast of China)
中国药典(2015)
Chinese pharmacopeia (2015)
梣酮(%)
Fraxinellone (%)
0.18
0.08
≥0.05
黄柏酮(%)
Obacunone (%)
0.59
0.49
≥0.15
白鲜碱(%)
Dictamnine (%)
0.03
0.02
-
表 2秦岭终南山及鸡西(东北)产白鲜皮中梣酮,黄柏酮及白鲜碱含量(%)
Table 2Contents of fraxinellone, obacunone and dictamnine in Cortex dictamni ofQinlingMountains and Jixi city (northeast) ofChina (%)
秦岭终南山白鲜皮梣酮、黄柏酮和白鲜碱含量的测定
Determination of the Contents of Fraxinellone, Obacunone and Dictamnine in dictamni cortex of Qinling Mountains 459
基因组学与应用生物学
Genomics and Applied Biology
逐步稀释混合标准品,得不同浓度混合标准
品。其中混合标准品溶液中梣酮浓度为:0.8 mg/mL、
0.4 mg/mL、0.2 mg/mL、0.1 mg/mL、0.06 mg/mL、
0.02mg/mL、0.01mg/mL、0.0005mg/mL、0.00005mg/mL。
黄柏酮浓度为:1.04 mg/mL、0.52 mg/mL、0.26 mg/mL、
0.13mg/mL、0.078mg/mL、0.026mg/mL、0.013 mg/mL、
0.000 65 mg/mL、0.000 065 mg/mL。吸取各混合标品
10 μL,在上述色谱条件下进行测试,以标准品浓度
(单位 mg/mL)为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),绘
制标准曲线并进行回归计算。
3.3.3供试品溶液的制备
供试品溶液的制备参照上述(3.3.2)制备方法。
3.3.4稳定性实验
分别取同一供试品溶液,按供试品的测定方法分
别于 0 h、4 h、8 h、12 h、16 h、24 h进行测定,其 RSD
分别为 2.13%和 1.95 %,表明供试品溶液在 24 h内
保持稳定。
3.3.5重现性实验
分别准确称取同一供试品粉末 5份,每份 2 g,
依照供试品溶液制备方法进行提取并测定。其 RSD
值分别为 1.98%和2.20%。
3.3.6加样回收率
取已知含量供试品 3份,加入对照品适量,依上
述方法提取并测定,回收率分别为 97.30% (RSD=
2.63%)和 98.80% (RSD=2.25%)。
3.4白鲜碱的测定
3.4.1色谱条件
流动相:甲醇-水(52: 48);色谱柱为 C18柱(Sun
fire TM150 mm×4.6 mm, 5μm);检测波长:220 nm (李艳
园等, 2006;毛少利等, 2015);流速 1.0 mL/min;室温。
3.4.2对照品溶液制备及线性关系
用电子天平精密称取 3.0 mg 白鲜碱标准品,
置 5 mL离心管中,用 Eppendorf移液器精密吸取
甲醇 3 mL溶解,震荡摇匀,得浓度为 1.0 mg/mL白鲜
碱标准品母液。逐步稀释得浓度为 0.50 mg/mL、
0.25 mg/mL、0.05 mg/mL、0.04 mg/mL、0.03 mg/mL、
0.02 mg/mL、0.01 mg/mL、0.005 mg/mL、0.001 mg/mL
和 0.000 5 mg/mL 白鲜碱标准品溶液。精密吸取
10 μL标准品溶液,在上述(3.4.1)色谱条件下进行
测试,以标准品的浓度(单位 mg/mL)为横坐标(X),
峰面积为纵坐标(Y),得标准曲线的线形方程。
3.4.3供试品溶液的制备
白鲜皮中白鲜碱的提取制备同文献(毛少利等,
2015)。
作者贡献
周亚福主要负责样品的测试和文章撰写;王宇
超主要负责数据的统计分析;黎斌和卢元主要负责
实验样品的采集鉴定;张燕和李为民主要负责样品
的提取和文稿的校对。
致谢
本研究由国家自然科学基金项目(31200152)、陕
西省青年科技新星项目(2015KJXX-90)和陕西省科
学院科技计划项目(2014K-23)共同资助。
参考文献
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秦岭终南山白鲜皮梣酮、黄柏酮和白鲜碱含量的测定
Determination of the Contents of Fraxinellone, Obacunone and Dictamnine in dictamni cortex of Qinling Mountains
Bioscience Methods (BM)
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