全 文 ：收稿日期:2008-07-24;　修订日期:2008-10-20
基金项目:国家 “十五 ”科技攻关专题(No.2001BA535C-8)
作者简介:黎继烈(1959-),女(汉族),湖南华容人 ,现任中南林业科技大
学教授 ,博士学位 ,主要从事农产品生物加工方面研究工作.
金橘黄酮对小鼠抗氧化作用的研究
黎继烈 ,崔培梧 ,吴耀辉 ,曾超珍 ,刘宗敏
(中南林业科技大学 ,湖南 长沙　410004)
摘要:目的 探讨金橘黄酮的抗氧化效果。 方法 以小鼠为实验对象 , 研究不同产地与不同剂量金橘黄酮对小鼠血清
SOD、GSH-Px活性 、MDA含量和小鼠平均寿命的影响。结果 与对照组相比 , 金橘黄酮 80 mg/kg· bw剂量时 , 两地产的
金橘黄酮对小鼠血清 SOD活性 、MDA含量和小鼠平均寿命的影响具有显著性(P< 0.05), 浏阳组可显著提高小鼠血清
GSH-Px活性(P<0.05),遂川组可极显著提高小鼠血清 GSH-Px活性(P<0.01);金橘黄酮 160 mg/kg· bw剂量对全
部试验参数的影响具有极显著性(P<0.01)。结论 金橘黄酮有明显抗氧化作用。
关键词:金橘;　黄酮;　抗氧化
中图分类号:R962　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)05-1031-02
EffectofKumquatFlavonoidsontheAnti-oxidationinMice
LIJi-lie, CUIPei-wu, WUYao-hui, ZENGChao-zhen, LIUZong-min
(CentralSouthUniversityofForestrialTechnology, Changsha410004 , China)
Abstract:ObjectiveTostudytheantioxidanteffectofkumquatflavonoids.MethodsUsingmouseastheexperimentalobject,
westudiedtheefectofkumquatflavonoidsfromdiferentproducingareaonSOD, GSH-PxactivitiesandMDAcontentinmouse
serumwithdiferentdoses, andalsotheeffectontheaveragelife-spanofmicewasstudied.ResultsComparedwiththecontrol
group, bothofHunanLiuyangkumquatflavonoidandJiangxiSuichuankumquatflavonoidcouldobviouslyimproveSODactivity
andMDAcontentinmouseserum(P<0.05), prolongthelife-spanofmiceobviously(P<0.05)atdoseof80mg/kg· bw,
HunanLiuyangkumquatflavonoidhadsignificantefect(P<0.05)onimprovingtheGSH-Pxactivityinmouseserumwhile
JiangxiSuichuankumquatflavonoidhadverysignificantefect(P<0.01).Atdoseof160 mg/kgobw, bothofthetwokumquat
flavonoidshadanti-oxidativeextremelysignificanteffect(P<0.01)onallexperimentalparameters.ConclusionKumquatfla-
vonoidshasobviousanti-oxidativeeffect.
Keywords:Kumquat;　Flavonoids;　Anti-oxidation
　　金橘 , 系芸香科柑橘属常绿小乔木 , 是热带 、亚热带常绿果
树 , 在我国长江以南地区广泛种植 ,果实富含挥发油 、黄酮等生物
活性成分 , 具有抑菌 、降脂及防治心脑血管疾病等多种功效 [ 1～ 3] ;
《中国药植图鉴》也认为金橘可 “治胸脘痞闷作痛 , 心悸亢进 , 饮
食不佳百日咳” ,可见金橘是一种具有很大开发潜力药用保健资
源。近年来对植物类黄酮药用保健功能研究是一个热点 ,对柑橘
类黄酮 [ 4, 5] 、大豆异黄酮 [ 6] 、沙棘叶黄酮 [ 7] 、银杏黄酮 [ 8]等药用机
理方面的相关报道较多 ,但是对金橘黄酮的药理研究相对较少 ,
在动物体内抗氧化的研究尚末见报道。 为了更好地开发利用金
橘资源 , 本实验以湖南浏阳和江西遂川金橘鲜果为原料 , 提取黄
酮作为受试物 , 以小鼠为实验对象 , 测定小鼠血清超氧化歧化酶
(superoxidedismutase, SOD)活性 、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathi-
oneperioxidase, GSH-Px)活性 、丙二醛(malondialdehyde, MDA)
含量和小鼠平均寿命 , 探讨金橘黄酮在小鼠体内的抗氧化作用 ,
旨在为金橘的产业化开发提供实验基础。
1　材料与仪器
1.1　药物 [ 1] 金橘于 2005-11采自湖南浏阳和江西遂川 , 品种
为金弹 FortunellacrassifoliaSwingle。取新鲜金橘皮 , 进行真空冷
冻干燥 , 将干燥后的金橘皮粉碎过 40目筛 , 用石油醚脱脂回流 2
h,脱脂后按金橘粉∶酒精(80%)=1∶20(W/W)物料比 ,用 MDS
-6压力自控密闭微波萃取系统 60 ℃萃取 30 min, 过滤 , 滤液用
大孔树脂吸附 , 洗脱液经真空浓缩即为金橘黄酮提取物 , 测定总
黄酮含量分别为 32.58%和 33.82%,使用时配制成所需浓度。
1.2　动物 单一性别昆明种 20月龄小鼠 , 体重为 40 ～ 50 g,湖
南中医药大学实验动物中心购买 ,实验动物合格房号为 026号。
1.3　药品及仪器 超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒 、谷胱甘
肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒 、丙二醛(MDA)测定试剂
盒由南京建成生物工程研究所提供。压力自控密闭微波萃取系
统(MDS-6, 上海新仪微波辅助化学科技有限公司), 分光光度
计(7200, 尤尼柯仪器有限公司)。
2　方法
2.1　对小鼠 SOD, GSH-Px, MDA影响的实验 [ 9] 将小鼠按每组
10只分为空白对照组 , 浏阳金橘黄酮高 、中 、低剂量组和遂川金
橘黄酮高 、中 、低剂量组。实验前适应环境 7 d, 自正式实验开始
各组动物依然以基础饲料喂养。空白对照组灌胃以等量的蒸馏
水 , 其余各组灌胃以不同剂量的金橘黄酮提物溶液 , 灌胃量为 0.1
ml/10g· bw,灌胃 30 d后 , 禁食 12 h, 摘眼球取空腹血 , 4 000 r/
min离心 15 min, 分离血清 , 测定 SOD、GSH-Px活性及 MDA含
量。 GSH-Px活性以分光光度比色法进行常规测定 , SOD活性
采用 NTB法测定 , MDA含量采用改良的 TBA微量法测定。
2.2　对小鼠平均寿命影响的实验 将小鼠按每组 20只分组 , 分
组情况同 “ 2.1”项下。各组动物依然以基础饲料喂养。 空白对
照组灌胃以等量的蒸馏水 ,其余各组每天灌胃不同剂量的金橘黄
酮溶液 ,灌胃量为 0.1 ml/10 g· bw,记录小鼠自然死亡的时间。
2.3　数据处理 实验数据以 x±s表示。正态分布的两组的均数
比较用 t检验 ,统计分析采用 SPSS13.0软件处理 ,显著性界值 P
=0.05。
3　结果
3.1　金橘黄酮对小鼠血清 SOD的影响 SOD是生物体内的一种
重要的酶类自由基清除剂 , 具有维持活性氧代谢平衡 , 保护膜结
构的功能。空白对照组中 SOD为 90.26 U/ml, 经过灌胃金橘黄
酮溶液 30d后 ,与对照组相比 ,各组小鼠血清 SOD活性均有所升
高 , 与剂量呈正相关的关系。其中 , 浏阳金橘低 、中 、高剂量组分
别升高 1.5%, 5.8%, 12.2%;遂川金橘低 、中 、高剂量组分别升
高了 3.6%, 9.3%, 14.7%。经 t检验 , 当摄入量为 80mg/kg· bw
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期
时 , 两产地金橘黄酮可显著提高小鼠血清 SOD活性(P<0.05),
当摄入量为 160 mg/kg· bw时 , 两产地金橘黄酮可极显著地提高
小鼠血清 SOD活性(P< 0.01)。这说明金橘黄酮可在一定程度
上提高机体的抗氧化能力。见表 1。
表 1　金橘黄酮对小鼠 SOD活性的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· (kg· bw)-1 SOD/U· ml-1
空白对照 0 90.26±2.58
浏阳金橘高剂量 160 101.29±2.40＊＊
浏阳金橘中剂量 80 95.49±3.21＊
浏阳金橘低剂量 20 90.26±3.15
遂川金橘高剂量 160 103.62±2.15＊＊
遂川金橘中剂量 80 98.69±2.59＊
遂川金橘低剂量 20 90.53±3.18
　　与空白对照组比较 , ＊＊ P< 0.01, ＊ P< 0.05;n=10
3.2　金橘黄酮对小鼠血清 GSH-Px的影响 GSH-Px是机体内
广泛存在的一种重要的过氧化物分解酶 ,能使有毒的过氧化物还
原成无毒的羟基化合物 , 促进 H
2
O
2
的分解 , 减轻细胞膜多不饱
和脂肪酸的过氧化作用 ,保护细胞膜的结构和功能不受过氧化物
的干扰及损害 , GSH-Px酶的活性高低可影响小鼠体内抗氧化
能力的强弱。金橘黄酮可以提高血清 GSH-Px活性 , 与金橘黄
酮的剂量呈正相关的关系。与空白对照组相比 ,浏阳金橘低 、中 、
高剂量组分别提高了 3.99%, 11.59%, 22.91 %;遂川金橘低 、
中 、高 3个剂量组分别提高了 7.12%, 19.08%, 22.91%。经 t检
验 , 浏阳中剂量组可显著提高小鼠血清 GSH-Px活性 (P<
0.05), 高剂量组可极显著提高小鼠血清 GSH-Px活性(P<
0.01);遂川中 、高剂量组均可极显著提高小鼠血清 GSH-Px活
性(P<0.05)。见表 2。
表 2　金橘黄酮对小鼠 GSH-Px活性的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· (kg· bw)-1 GSH-Px/U· ml-1
空白对照 0 29.76±1.57
浏阳金橘高剂量 160 36.58±3.05＊＊
浏阳金橘中剂量 80 33.21±3.21＊
浏阳金橘低剂量 20 30.95±1.8 5
遂川金橘高剂量 160 38.24±3.45＊＊
遂川金橘中剂量 80 35.44±3.01＊＊
遂川金橘低剂量 20 31.88±2.12
　　与空白对照组比较 , ＊＊ P< 0.01, ＊ P< 0.05;n=10
3.3　金橘黄酮对小鼠血清 MDA的影响 MDA是超氧自由基作
用生物体后引起膜系统脂质过氧化的产物 ,它能与蛋白质氨基酸
残基或核酸反应生成 Shif碱 , 降低膜的稳定性 , 促进膜的渗漏;
MDA会降低 SOD的活性 , 加剧膜脂质过氧化作用, 其含量的高低
是衡量生物体氧化衰老程度的一个指标。金橘黄酮可以降低血清
MDA的含量, 与金橘黄酮的剂量呈负相关的关系 ,这和上面金橘
黄酮可以提高 SOD含量的试验结果相吻合 ,进一步说明金橘黄酮
可以起到抗氧化作用。和对照组相比, 浏阳金橘低 、中 、高剂量组
分别降低了 5.8%, 9.4%, 17.5%;遂川金橘低 、中 、高 3个剂量组
分别下降了 8.4%, 11.9%, 20.2%。经 t检验 , 两个中剂量组可显
著降低小鼠血清 MDA值(P< 0.05),两个高剂量组可极显著降低
小鼠血清 MDA值(P<0.01)。这说明金橘黄酮在一定程度上具
有减缓小鼠的膜脂质过氧化进程的作用。见表 3。
表 3　金橘黄酮对小鼠 MDA含量的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· (kg· bw)-1 MDA/nmol· ml-1
空白对照 0 14.41±0.98
浏阳金橘高剂量 160 11.89±1.40＊＊
浏阳金橘中剂量 80 13.05±1.30＊
浏阳金橘低剂量 20 11.89±1.05
遂川金橘高剂量 160 11.50±1.33＊＊
遂川金橘中剂量 80 12.70±1.00＊
遂川金橘低剂量 20 13.20±1.02
　　与空白对照组比较 , ＊＊ P< 0.01, ＊ P< 0.05;n=10
3.4　金橘黄酮对小鼠平均寿命的影响 在灌胃金橘黄酮溶液 30
d后 , 各组小鼠平均寿命均有不同程度的延长。空白对照组平均
寿命为 660 d, 遂川金橘组小鼠的平均寿命分别为:730, 715, 690
d,浏阳金橘组小鼠的平均寿命分别为:725 , 706, 680 d, 与空白对
照组相比 ,两中剂量组可显著延长小鼠平均寿命(P< 0.05), 两
高剂量组可极显著延长小鼠平均寿命(P< 0.01)。这主要是因
为金橘黄酮具有抗氧化性 , 减少自由基对机体的损害 , 从而起到
了延长寿命的作用。见表 4。
表 4　金橘黄酮对小鼠平均寿命的影响( x±s)
组别 剂量 C/mg· (kg· bw)-1 时间 t/d
空白对照 0 　　　660±10
浏阳金橘高剂量 160 　　　725±12＊＊
浏阳金橘中剂量 80 　　　706±15＊
浏阳金橘低剂量 20 　　　680±14
遂川金橘高剂量 160 　　　730±13＊＊
遂川金橘中剂量 80 　　　715±12＊
遂川金橘低剂量 20 　　　690±16
　　与空白对照组比较 , ＊＊ P< 0.01, ＊ P< 0.05;n=20
4　结论
衰老是机体在细胞水平上受自由基损害的结果 ,是自由基干
扰细胞的新陈代谢过程。血清中活性氧自由基导致脂质过氧化
而产生大量的 MDA;SOD、GSH-Px是体内生物防护体系中最重
要的抗氧化酶 , 是体内自由基清除剂 ,在机体抗自由基损伤中起
着重要作用。
本实验结果表明 ,金橘黄酮可以提高小鼠血清 SOD、GSH-
Px活性 ,延长小鼠的平均寿命 , 这说明金橘黄酮可直接淬灭自由
基 , 清除自由基对机体的损害 , 从而恢复老年机体自由基代谢的
平衡。它还可能络合有催化作用的金属离子 , 抑制自由基形成 ,
减少自由基对不饱和脂肪酸的氧化 , 从而降低血清 MDA含量。
金橘黄酮还可能减少自由基对机体的蛋白质和 DNA等的损害和
对机体新陈代谢的干扰 ,并通过抗氧化作用保护线粒体内过氧化
氢酶的活性 ,起到了延长小鼠平均寿命的作用。
实验药物金橘提取物中黄酮含量只有 33.82%,还有很多的
未知成分 , 除黄酮类起抗氧化作用外 ,究竟金橘提取物中还有哪
些成分在起作用 ,有待于进一步研究。
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