全 文 ：［收稿日期］ 20130626(001)
［基金项目］ 辽宁省教育厅项目(2009A498) ;校杏林青蓝工程杰出青年基金项目(115065)
［通讯作者］ * 尹海波，教授，硕士研究生导师，从事种质资源鉴定及中药的品质评价的研究，Tel:15998530628，0411-87586004，E-mail:
yhb0528@ sina． com
不同采收时期牻牛儿苗中 4 种酚酸类活性成分的动态分析
尹海波* ，赵晓雨，涂秀文，朱明慧，姜海燕
( 辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
［摘要］ 目的:测定不同采收时期牻牛儿苗中活性成分没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京及鞣花酸的含量，为最佳采收期的
确定提供依据。方法:采用 ＲP-HPLC，AgilentTC-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，0. 4%磷酸水溶液-甲醇为流动相梯度洗
脱，流速 0. 8 mL·min －1，检测波长 259 nm，柱温 30 ℃。结果:没食子酸，原儿茶酸，柯里拉京，鞣花酸的线性范围分别为
0. 492 ～ 4. 920 g·L －1(r = 0. 999 3) ，0. 497 ～ 4. 970 g·L －1(r = 0. 999 7) ，0. 995 ～ 9. 950 g·L －1(r = 0. 999 8) ，0. 989 ～ 9. 890 g·L －1
(r = 0. 999 7) ;平均回收率分别为 100. 46% (ＲSD 2. 1%) ，99. 78% (ＲSD 1. 3%) ，100. 18% (ＲSD 1. 0%) ，100. 21% (ＲSD
1. 4%)。结论:牻牛儿苗中没食子酸及原儿茶酸的含量在五月末达到最大值，柯里拉京及鞣花酸的含量在六月末达到最大
值。4 种酚酸活性成分总量在六月末达到最高。
［关键词］ 牻牛儿苗;没食子酸;原儿茶酸;柯里拉京;鞣花酸;采收期
［中图分类号］ Ｒ282 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)13-0121-04
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014130121
Dynamic Variation of 4 Active Component of Phenolic Acids in
Erodium stephanianum from Different Collection Time
YIN Hai-bo* ，ZHAO Xiao-yu，TU Xiu-wen，ZHU Ming-hui，JIANG Hai-yan
(Pharmacy Department，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)
［Abstract］ Objective:To determine the contents of the active components gallic acid，protocatechuic
acid，corilagin and ellagic acid in Erodium stephanianum from different collection time and to define the best
collection time for this herb． Method:The ＲP-HPLC method was applied and the separation was performed on an
Agilent TC-C18 analytical column (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)． The mobile phase was methanol (A)-water
containing 0. 4%H3PO4 (B)with gradient elution mode at the flow rate of 0. 8 mL·min
－1 ． The detection was set
at 259 nm，and the column temperature was 30 ℃ ． Ｒesult:The liner ranges of gallic acid，protocatechuic acid，
corilagin and ellagic acid were 0. 492-4. 920 g·L －1 (r = 0. 999 3) ，0. 497-4. 970 g·L －1 (r = 0. 999 7) ，0. 995-
9. 950 g·L －1 (r = 0. 999 8) ，0. 989-9. 890 g·L －1 (r = 0. 999 7) ，respectively． The average recoveries were
100. 46% (ＲSD 2. 1%) ，99. 78% (ＲSD 1. 3%) ，100. 18% (ＲSD 1. 0%) ，100. 21% (ＲSD 1. 4%) ，
respectively． Conclusion:The content of gallic acid and protocatechuic acid，in E． stephanianum increased to the
maximum value in late May，the content of corilagin and ellagic acid increased to the maximum value in late June．
Four acids active compounds increased to the maximum in late June．
［Key words］ Erodium stephanianum; gallic acid; protocatechuic acid; corilagin; ellagic acid;
collection time
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Vol． 20，No． 13
Jul．，2014
牻牛儿苗习称长嘴老鹳草［1］，为商品老鹳草的
主流商品［2］。牻牛儿苗的主要成分为鞣质、黄酮
类、有机酸及挥发油等［3］，具有广谱抗菌、抗病毒及
抗氧化等多种药理作用。在不同生长时期牻牛儿苗
生药中各成分含量不同。李克明等［4］曾采用 HPLC
法对不同采收月份牻牛儿苗中柯里拉京的含量进行
了测定比较。李丰文等［5］曾采用 HPLC法对不同采
收月份野老鹳草中没食子酸，鞣花酸的含量进行测
定比较。上述实验研究由于选取的评价指标较少，
因而无法全面评价药材的质量，所确定的最佳采收
季节也具有一定的片面性。因此本文以没食子酸，
原儿茶酸，柯里拉京，鞣花酸为指标，采用 HPLC 对
不同采收月份牻牛儿苗中 4 种活性成分的含量进行
测定，对全面评价药材的质量，确定最佳采收时期提
供一定的实验依据。
1 仪器与试药
1100 型高效液相色谱仪(美国 Agilent 公司) ，
SPD-10A型紫外检测器(日本岛津) ，CP225D 型电
子天平(德国 Sartorius公司)。
对照品:没食子酸(中国药品生物制品检定所，
批号 110831-200302) ，原儿茶酸(中国药品生物检
定所，批号 110809-200604) ，柯里拉京(上海融禾，
批号 100526) ，鞣花酸(上海融禾，批号 091227)。
甲醇和磷酸为色谱纯，水为重蒸水;其他均为分
析纯。
牻牛儿苗样品由本院药用植物教研室尹海波教
授 鉴 定 为 牻 牛 儿 苗 科 牻 牛 儿 苗 Erodium
stephanianum Willd．地上部分，凭证标本保存于本院
药用植物教研室。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件［7］ AgilentTC-C18色谱柱(4. 6 mm ×
250 mm，5 μm) ;流动相(A)甲醇-0. 4%磷酸水溶液
(B)梯度洗脱程序(0 ～ 15 min，16% ～ 35% A;15 ～
16 min，35% ～43%A;16 ～ 31 min，43% ～ 53. 5% A;
31 ～ 33 min，53. 5% ～ 53. 5% A) ，流速 0. 8 mL·
min －1，检测波长 259 nm，柱温 30 ℃，进样量 10 μL。
在此色谱条件下没食子酸，原儿茶酸，柯里拉京，鞣
花酸的分离度 ＞ 1. 5，拖尾因子在 0. 95 ～ 1. 05，分离
度良好。见图 1。
2. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取没食子酸，
原儿茶酸，柯里拉京适量，用甲醇定容至 10 mL棕色
量瓶中，制成每 1 mL分别含没食子酸 0. 492 mg、原
儿茶酸 0. 497 mg、柯里拉京 0. 995 mg的混合对照品
溶液，摇匀，即得。另取鞣花酸适量，置于 10 mL 棕
1. 没食子酸;2. 原儿茶酸;3. 柯里拉京;4. 鞣花酸
图 1 3 种混合对照品(A)，鞣花酸对照品(B)
和样品(C)HPLC
色量瓶中，用二甲基亚砜定容至刻度，制成每 1 mL
含 0. 989 mg的单一对照品溶液，摇匀，即得。
2. 3 供试品溶液的制备 精密称定牻牛儿苗药材
粉末 2 g，加石油醚脱脂 1 h，弃去石油醚，残渣加 30
倍 80%的乙醇，回流提取 3 次，每次 1 h，过滤，合并
滤液，浓缩并用甲醇定容至 25 mL量瓶中，作为供试
品溶液备用。
2. 4 线性关系考察 分别精密吸取各对照品储备
液 1，2，4，6，8，10 μL，按上述色谱条件连续进样，测
得峰面积积分值，以进样量(μg)为横坐标(X) ，色
谱峰面积为纵坐标(Y) ，进行线性回归，结果表明，
各组分在各自浓度范围内线性关系良好，线性方程、
线性范围及相关系数见表 1。
表 1 牻牛儿苗中 4 种酚酸类成分的线性范围及线性关系
对照品 线性方程 线性范围 /μg r
没食子酸 Y = 2 630. 3X － 192. 2 0. 492 ～ 4. 920 0. 999 3
原儿茶酸 Y = 6 465. 9X + 68. 7 0. 497 ～ 4. 970 0. 999 7
柯里拉京 Y = 5 256. 2X + 220. 8 0. 995 ～ 9. 950 0. 999 8
鞣花酸 Y = 5 512. 1X + 278. 1 0. 989 ～ 9. 890 0. 999 7
2. 5 精密度试验 精密吸取样品溶液 10 μL，连续
重复进样 6 次，记录峰面积，测得没食子酸、原儿茶
酸、柯里拉京、鞣花酸峰面积的 ＲSD 分别为 2. 1%，
2. 5%，1. 7%，1. 3%。表明仪器精密度良好。
2. 6 重复性试验 精密称取同一样品 6 份，按 2. 3
供试品溶液制备项下方法操作，在 2. 1 色谱条件下
进行测定，计算没食子酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花
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酸含量的 ＲSD 分别为 1. 6%，2. 4%，1. 1%，2. 3%，
表明该方法重复性良好。
2. 7 稳定性试验 取供试品溶液，室温下放置，分
别于 0，2，4，6，8，10，12，24 h 测定，记录峰面积，结
果表明，供试品溶液在 24 h 内稳定性良好，没食子
酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花酸峰面积的 ＲSD 分别
为 0. 7%，2. 1%，2. 7%，1. 5%。
2. 8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品
(100518)共 6 份，分别精确加入一定量的没食子
酸、原儿茶酸、柯里拉京、鞣花酸对照品，混匀后，按
2. 3 供试品溶液制备项下方法操作，在上述色谱条
件下进行分析，计算回收率，结果见表 2。
表 2 牻牛儿苗中 4 种对照品加样回收率试验
对照品
称样量
/ g
样品
中量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
没食子酸 1. 052 5 6. 48 6. 50 12. 92 99. 08 100. 72 2. 6
1. 038 2 6. 40 6. 50 13. 15 103. 85
1. 046 3 6. 45 6. 50 13. 12 102. 62
1. 021 5 6. 19 6. 50 12. 47 96. 62
0. 998 7 6. 15 6. 50 12. 71 100. 92
1. 061 2 6. 51 6. 50 13. 09 101. 23
原儿茶酸 1. 052 5 6. 03 6. 00 12. 15 102. 00 100. 14 2. 7
1. 038 2 5. 90 6. 00 11. 78 98. 00
1. 046 3 6. 06 6. 00 12. 23 102. 83
1. 021 5 6. 07 6. 00 11. 95 98. 00
0. 998 7 6. 00 6. 00 11. 82 97. 00
1. 061 2 6. 04 6. 00 12. 22 103. 00
柯里拉京 1. 052 5 11. 81 12. 00 23. 56 97. 92 100. 70 2. 0
1. 038 2 11. 82 12. 00 24. 02 101. 67
1. 046 3 11. 78 12. 00 23. 63 98. 75
1. 021 5 11. 80 12. 00 23. 86 100. 50
0. 998 7 11. 89 12. 00 24. 25 103. 00
1. 061 2 11. 99 12. 00 24. 27 102. 33
鞣花酸 1. 052 5 7. 02 7. 00 13. 81 97. 00 100. 29 2. 1
1. 038 2 7. 05 7. 00 13. 94 98. 43
1. 046 3 7. 06 7. 00 14. 13 101. 00
1. 021 5 6. 92 7. 00 14. 07 102. 14
0. 998 7 6. 95 7. 00 14. 11 102. 29
1. 061 2 6. 98 7. 00 14. 04 100. 86
2. 9 样品的测定 取 2010 年 5 月底至 10 月初于
河北省沽源县采集的 10 批牻牛儿苗药材，经干燥、
粉碎后，按 2. 3 供试品溶液制备项下操作，在上述色
谱条件下进行分析。测定结果见表 3 及图 2。
表 3 不同采收期牻牛儿苗 4 种成分的质量分数(n = 6) %
批号 采集时间 没食子酸 原儿茶酸 柯里拉京 鞣花酸
1 2010-05-18 0. 62 0. 60 1. 18 0. 69
2 2010-06-03 0. 45 0. 47 1. 01 0. 69
3 2010-06-18 0. 46 0. 27 1. 28 1. 15
4 2010-07-03 0. 28 0. 10 1. 00 0. 73
5 2010-07-18 0. 28 0. 08 0. 98 0. 80
6 2010-08-03 0. 21 0. 06 0. 62 0. 72
7 2010-08-18 0. 21 0. 07 0. 76 0. 75
8 2010-09-03 0. 26 0. 09 0. 74 0. 78
9 2010-09-18 0. 19 0. 10 0. 63 0. 76
10 2010-10-03 0. 16 0. 06 0. 34 0. 53
图 2 4 种酚酸总量在不同采收期的动态变化
3 讨论
3. 1 色谱条件的优化 本实验分别对 4 种待测成
分对照品溶液在紫外 200 ～ 400 nm 进行扫描，结果
表明没食子酸在 272 nm处有最大吸收波长，原儿茶
酸在 259 nm 处有最大吸收波长，柯里拉京在 274
nm处有最大吸收波长，鞣花酸在 255 nm 处有最大
吸收波长。综合考虑在 259 nm条件下进行测定，被
测各成分均能得到较好的响应，故确定 259 nm为检
测波长。同时在确定流动相系统时，分别比较了不
同梯度的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-磷酸盐缓冲体系，
经多次实验，最终确定了以甲醇-0. 4%磷酸水为流
动相进行梯度洗脱，可使得没食子酸、原儿茶酸、柯
里拉京、鞣花酸达到基线分离，峰形好，保留时间相
对适中，分离度较好，均 ＞ 1. 5，可作为该药材含量测
定的检测方法。
3. 2 提取方法的选择 通过对提取方式(甲醇超
声、乙醇热回流)的考察，发现热回流提取待测成
分的含量明显提高，故采取乙醇加热回流的方法。
通过采用正交设计法 L9(3
4)对乙醇加热回流的提
取工艺，进行优化，考察了提取溶剂量、提取时间
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尹海波，等:不同采收时期牻牛儿苗中 4 种酚酸类活性成分的动态分析
和提取次数的 3 个水平，测得结果表明，30 倍
80%乙醇热回流提取 3 次，每次 1 h 为最佳提取
方法。
3. 3 含量测定结果 鞣质类成分为牻牛儿苗药材
中的一类主要成分，其中最主要的为老鹳草素，可水
解为其他鞣质和有机酸，本文所测的 4 种成分为其
主要的水解产物，一定程度上代表了该药材的质量。
没食子酸具有抗炎、抗肿瘤的作用，且毒性很低，可
作为潜在的阻止肿瘤发生的化学预防剂［8］;原儿茶
酸具有祛痰、平喘、解蛇毒、抗血小板凝集的作
用［9］;柯里拉京具有抗肿瘤、抗氧化、抗动脉粥样硬
化、降血压、抑制病毒、抗菌、抗炎等广泛的生物活
性，具有很大的药用价值［10］;鞣花酸具有天然抗氧
化，清除体内自由基，保护低氧缺血所致的脑损伤等
作用［11］。本文以 4 种成分为指标对老鹳草药材的
主流品种牻牛儿苗中活性成分的动态变化进行了研
究，对确定该药材的最佳采收期具有一定的指导意
义。据实验结果可知，不同采收时期 4 种成分的含
量均呈现一定的动态变化，但规律不一致;六月底的
样品(从花期到果实近成熟期)中 4 种酚酸含量总
和达到最大值，因此可确定从花期到果实近成熟期
为该药材的最佳采收期，这与《中国药典》规定的采
收时期相一致。
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［责任编辑 邹晓翠
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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