全 文 ：第 16 期
收稿日期：2010－12－27
作者简介：曲芬霞（1977－），女，甘肃陇西人，讲师，硕士，主要从事种苗培育栽培、生物技术研究，（电话）0774-5271906（电子信箱）qufenxia＠126．com。
砂生槐（Sophra moorcroftiana）又称 “西藏狼牙
刺”、“刺柴”， 豆科豆属多年生矮而多枝的灌木，生
于干燥的山坡、沙滩，为西藏特有植物［1］。 其主根发
达，具有防风固沙作用；嫩枝叶和干叶富含蛋白质
等营养成分，有较高的饲用和食用价值［2］；藏医学认
为其种实性寒味苦，能消炎解毒，治湿热黄疸、白喉
等疾病；研究表明，砂生槐含有丰富的苦参类生物
碱，它具有抗癌、升血、平喘和抗心律不齐等方面的
药用效果，此外还能抑制植物致病细菌和真菌的生
长繁殖，是天然药物和生物农药的主要原料，具有
广阔的应用前景［3］。
长期以来，当地群众利用其植株进行牲畜放牧
或用作生活燃料，不仅对当地脆弱的生态环境造成
了极大破坏，而且野生分布数量急剧减少。 对西藏
砂生槐人工种植可以一次种植，多次利用，但用种
子和根蘖繁殖苗木生长周期长， 且繁殖系数低，极
大地限制了砂生槐规模化种植和产业化发展。 与其
他无性繁殖相比，组培苗不仅能保持原有品种的优
良性状，而且繁殖速度快、繁殖系数大，还具有提前
开花结果等优点，可进行周年工厂化生产，经济效
益高。 我国目前对砂生槐的组织培养技术研究尚属
空白， 为了保护开发和利用这一珍贵的植物资源，
试验利用野生砂生槐种子进行无菌培养，选用不同
的植物生长调节剂种类和浓度配比，诱导芽苗增殖
培养，以期为砂生槐的工厂化育苗提供依据。
1 材料与方法
1．1 试验材料
西藏砂生槐种子于 2003 年 9 月采自西藏自治
区米林县， 自然通风晾晒后用普通干藏法贮存，选
取饱满无病虫害的种子， 用自来水冲洗 30 min 后，
用体积分数为 75％的酒精浸泡 30 s， 再用质量分数
为 0．2％的高锰酸钾消毒 20 min，然后用无菌水冲洗
3 次，把经过以上处理的种子用刀片轻轻划破种皮，
田口方法在西藏砂生槐种子组培诱导试验中的应用
曲芬霞
（广西贺州学院化学与生物工程系，贺州 542800）
摘要：采用 L9（34）正交设计，用西藏砂生槐（Sophra moorcroftiana）种子幼苗为外植体，研究 NAA、6-BA 和
IBA 不同浓度配比对组培增殖系数的影响，采用田口方法对试验的 3 个因素及各水平进行 S ／ N 值分析。
结果表明，用 MS＋2．0 mg ／ L 6－BA＋0．4 mg ／ L IBA 培养基时，西藏砂生槐种子幼苗接种可获得最佳的增殖
系数。
关键词：西藏砂生槐种子；组培；增殖系数；田口方法
中图分类号：S792．26 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2011）16－3421-02
Application of Taguchi Method in Tissue Culture and Induction of
Sophra moorcroftiana Seed
QU Fen－xia
（Department of Chemistry and Biology，Hezhou College，Hezhou 542800，China）
Abstract： L9（34） orthogonal design was applied to study the effect of NAA， 6－BA and IBA concentrations on the propagation
coefficient of tissue culture using the bud of Sophra moorcroftiana seed as explants． The optimal experimental craft was
obtained according to S ／ N analysis accomplished by Taguchi method． The highest propagation coefficient could be achieved if
inoculating the Sophra moorcroftiana seed in culture medium with MS＋2．0 mg ／ L 6－BA＋0．4 mg ／ L IBA．
Key words： Sophra moorcroftiana seed； tissue culture； propagation coefficient； Taguchi method
第 50卷第 16期
2011年 8 月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 50 No.16
Aug．，2011
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2011.16.061
湖 北 农 业 科 学 2011 年
接种在 MS＋50 mg ／ L 活性炭的培养基上， 浅层液体
培养 50 d。
1．2 试验设计
试验的因素与水平设计见表 1，采用 L9（34）正
交设计 ［4］（表 2），把无菌萌发的西藏砂生槐幼苗切
去下胚胚轴和根， 将茎苗接种在以上 9 种培养基
中，每瓶接 2 个芽苗，每个处理接 10 瓶，重复 3 次。
基本培养基为 MS 培养基，蔗糖为 30 g ／ L，琼脂粉为
3 g ／ L （广东环凯微生物科技有限公司 ），pH 值为
6．0；光照时间为 16 h ／ d，光照强度为 2 000 lx 左右，
培养室温度控制在（23±2）℃，培养周期为 40 d。
1.3 统计分析
调查增殖系数，对调查数据取其平均值，采用
田口方法的静态望大特性 S ／ N 值进行试验分析和
试验优化设计。 增殖率＝再生芽苗数 ／接种芽苗总
数×100％。
2 结果与分析
田口方法使用信噪比 S ／ N 值代替平均数作为
分析反应的特性值，达到改善并寻求点的最佳优化
设计目标，S ／ N＝平均数 ／变异数，因此 S ／ N 值能够同
时反映每一次试验的平均值和偏差。S ／ N值越大，则
表示一个系统的安定性，也就是代表该处理为最佳
参数设计。 田口方法中的静态特性可分为望小特
性、望大特性和望目特性，在试验中，对于用西藏砂
生槐种子幼苗诱导培养不定芽数目，采用静态望大
特性，其计算公式为：S ／ N＝10×lg（ 1
n
n
i=1
Σy2i），其中 i
是试验号（这里 i＝3），n是指样数，y是观察值。
对于望大特性，从试验结果表 2 可见，S ／ N 值越
大，代表此因素在该水平处理效果最佳，极差最大
的对试验结果的影响也最大，可知重要因素排序依
次为 B、C、A，也就是说，6－BA 对试验结果也就是西
藏砂生槐芽苗增殖影响最大，其次是 IBA、NAA。 从
S ／ N 值趋势图（图 1、图 2、图 3）可以看出，在试验的
三因素三水平中，最佳处理组合为 A1B3C2，即MS 为
基本培养基， 加入 2．0 mg ／ L 6－BA和 0．4 mg ／ L IBA
为最佳增殖培养基。
3 结论与讨论
田口方法目前主要应用于机械、管理等领域 ［5］，
而在组培快繁技术领域鲜有使用的相关报道。 而利
用种子幼苗作为组培快繁的外植体， 国内研究较
多，如雪莲、罗麻布、普通狗牙根等［6－8］用种子组织培
养，获得了理想的效果，试验以西藏砂生槐种子为
表 1 因素与水平
水平
1
2
3
NAA（A）//mg/L
0.0
0.4
0.8
6-BA（B）//mg/L
1.0
1.5
2.0
IBA（C）//mg/L
0.0
0.4
0.8
因素
表 2 正交试验结果
试验号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
x1
x2
x3
R
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
7.0
5.7
4.4
2.6
B
1
2
3
1
2
3
1
2
3
2.4
6.2
8.5
6.1
C
1
2
3
2
3
1
3
1
2
4.8
8.3
4.0
4.3
空列
1
2
3
3
1
2
2
3
1
Ⅰ
1.1
3.5
2.2
1.8
1.9
2.5
1.0
1.6
2.9
Ⅲ
1.4
3.7
2.5
1.9
1.4
2.7
1.1
1.3
2.8
Ⅱ
1.2
3.6
2.9
1.6
1.1
2.9
1.0
1.8
2.6
S/N 值
1.9
11.1
8.1
5.0
3.5
8.6
0.3
4.0
8.8
增殖系数
图 3 C 因素三水平 S/N 平均值
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
S/
N
平
均
值
C1 C2 C3
8
7
6
5
4
3
2
1
0
S/
N
平
均
值
A1 A2 A3
图 1 A 因素三水平 S/N 平均值
9
8
7
6
5
4
3
2
1
0
S/
N
平
均
值
B1 B2 B3
图 2 B 因素三水平 S/N 平均值
（下转第 3425 页）
3422
第 16 期
3 讨论
根据动物组织、细胞中普遍含有受遗传基因控
制的蛋白组分且具有种的特异性和稳定性的特点
推断，不同物种的蛋白质电泳指纹图谱必定存在差
异，以蛋白质为指标，可以从蛋白水平上进行分类［10］。
聚丙烯酰胺凝胶电泳技术作为一种蛋白分析技术，
具有操作简单、快速准确、成本低且直观性强的优
点，适合普及推广应用［11］。
研究通过聚丙烯酰胺凝胶电泳技术比较不同
种或同种不同地理分布的水蛭间活体组织细胞可
溶性蛋白组成的差异，结果表明 SDS－PAGE 能初步
反映不同种类、不同食性水蛭组织细胞可溶性蛋白
质的表达差异。 蛋白质既是由基因决定的，也是基
因的产物， 作为遗传特征是可靠的 ［10］。 因此应用
SDS－PAGE 分离不同水蛭可溶性蛋白质的方法对于
其分类和药材鉴别具有参考价值，尤其对在形态上
不易区分的种间鉴别具有重要作用。
有学者认为应用电泳和薄层色谱等生化和分
子生物学技术于动物分类学中，可为其形态分类增
加客观标准［12］。 研究中分析的 3种不同地域分布的
菲牛蛭电泳图谱无明显差异，而相同食性的日本医
蛭和 3 种菲牛蛭则有明显差异，这一结果支持了形
态分类确定的 3 种菲牛蛭为同一个种而菲牛蛭与
日本医蛭非同种的见解［7］。 同时结果表明吸血蛭类
和非吸血蛭类的蛋白组分差异大，而 3 种非吸血蛭
类间差异略有减少，这与传统的形态学分类是相一
致的，也说明采用蛋白电泳来探讨种间在进化上的
亲缘关系是一个很有效的手段 ［12］。 可见，采用电泳
技术分离 7 种水蛭活体组织细胞可溶性蛋白组分，
不仅有助于了解其蛋白组分及含量， 而且在生化分
类学上也有一定的参考价值［9，12］，在以后的研究中可
采用更为精确和客观的二维蛋白电泳技术对所获
得的差异蛋白质更细致深入地分析［13］。
参考文献：
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（责任编辑 田宇曦）
外植体，采用田口方法的试验设计并对试验结果进
行了 S ／ N 值分析， 研究了植物生长调节剂种类和
浓度对西藏砂生槐不定芽增殖系数的影响，分裂素
6－BA 对其影响最大，其次是生长素 IBA，砂生槐对
NAA 诱导最不敏感。 最佳处理为 A1B3C2，即最佳的
增殖培养基是 MS＋2．0 mg ／ L 6－BA＋0．4mg ／ L IBA。
在组培快繁技术中，从生芽的诱导受到很多因
素的限制，诱导过程中还会发生褐化及玻璃化等问
题，常常会影响增殖芽苗质量。 在西藏砂生槐幼苗
组培苗的诱导试验中，就碰到玻璃化的问题，引起
这个现象发生的原因很多，比如 6－BA 浓度过高、温
度过高或者光照不足等，对这些问题的解决，还有
待深入细致地研究。
参考文献：
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（责任编辑 田宇曦）
（上接第 3422页）
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汪 波等：七种水蛭组织细胞可溶性蛋白 SDS－PAGE 电泳分析 3425