全 文 ：收稿日期:2013-08-19 接受日期:2013-12-12
基金项目:广西自然科学基金项目(2012GXNSFAA053175);广西
中药质量标准研究重点实验室主任基金项目(201101);广
西科技研究与技术开发计划项目子课题项目(1355001-4-8)
* 通讯作者 Tel:86-013978679458;E-mail:yong-ye@ 163． com
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2014，26:1450-1453
文章编号:1001-6880(2014)9-1450-04
壮、瑶药小槐花中异柠檬酚的分离鉴定及含量测定研究
陆国寿1，叶 勇2* ，卢文杰1，3，黄周锋1，蓝艳妮2，曾繁强2，黄伟城2
1广西中医药研究院，南宁 530022;2 广西医科大学，南宁 530021;3 广西中药质量标准研究重点实验室，南宁 530022
摘 要:采用硅胶色谱柱分离纯化的方法从小槐花药材中分离得到一种黄酮类化合物，根据理化性质及光谱数
据鉴定其为异柠檬酚。采用 HPLC法对异柠檬酚的含量进行测定，HPLC分析条件如下:色谱柱为 Agilent ZOＲ-
BAX SB-C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-0． 2%磷酸水溶液(70∶ 30)，流速为 1． 0 mL /min，检测波
长为 270 nm，柱温为 35 ℃。实验结果表明异柠檬酚在 0． 011 ～ 0． 242 μg范围与其峰面积呈良好的线性关系;平
均回收率为 99． 76%，ＲSD为 1． 42%(n = 6)，不同采集地的小槐花药材中异柠檬酚的含量存在一定差异。
关键词:小槐花;异柠檬酚;分离纯化;HPLC
中图分类号:Ｒ284. 2 文献标识码:A
Isolation，Purification and Determination of Yukovanol
in Desmodium caudatum (Thunb．)DC
LU Guo-shou1，YE Yong2* ，LU Wen-jie1，3，HUANG Zhou-feng1，
LAN Yan-ni2，ZENG Fan-qiang2，HUANG Wei-cheng2
1Guangxi Institute of Traditional Medical and Pharmaceutical Sciences，Nanning 530022，China;2Guangxi Medical University，
Nanning 530021，China;3Guangxi Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Quality Standards，Nanning 530022，China
Abstract:A flavonoid was isolated from Desmodium caudatum (Thunb．)DC by silica gel column chromatography． The
structure of the isolated compound was elucidated on the basis of spectral characteristics and identified as yukovanol． The
content of yukovanol in D． caudatum was determined by HPLC． The chromatographic separation were carried out using
the following condition:Agilent ZOＲBAX SB-Cl8 column (250 mm × 4． 6 mm，5 μm)was used with methanol-0． 2%
phosphoric acid (70∶ 30)as mobile phases． The flow rate was 1． 0 mL /min． The UV detection wavelength was 270 nm
and the column temperature was 35 oC． The results showed that the linear range of yukovanol were 0． 011-0． 242 μg，the
yukovanol average recovery as 99． 76%，ＲSD = 1． 42% (n = 6)． Distinct differences were found among D． caudatum
samples produced in different places．
Key words:Desmodium caudatum (Thunb．)DC;yukovanol;isolation and purification;HPLC
小槐花［Desmodium caudatum (Thunb．)DC．］
为豆科山蚂蝗属植物，为广西壮族、瑶族常用药材，
广西中药材标准［1］、广西壮族自治区壮药质量标
准［2］、中国瑶药学［3］均将其收载，壮药名为棵文沾、
瑶药名为握麻红，其分布于广西、安徽、浙江、江西等
省。壮医认为其味甜、苦，平，调龙路，通气道谷道，
清热毒，止血，用于心头痛(胃痛)，白冻(泄泻)，月
经不调，喯疳(疳积)，贫痧(感冒)，北嘻(乳痈)，狠
尹(疖肿)。瑶药认为其味苦，性凉，清热解毒，消
积，散瘀利水，健脾开胃，用于治咳嗽、吐血、水肿、胃
脘痛、小儿疳积、跌打损伤、痈疮溃疡、烧烫伤溃烂。
为了探明小槐花的化学物质基础及其含量，本实验
从小槐花药材分离鉴定得到了异柠檬酚，并采用高
效液相色谱法对其含量进行了测定。
1 仪器与材料
1． 1 仪器
IＲ-470 红外光谱仪(日本岛津公司)，DＲX-500
MHz超导核磁共振仪(瑞士布鲁克公司)，岛津高效
液相色谱仪 LC-20A，色谱工作站 LC SOLUTION，分
析天平 XS205(海特勒托利多有限公司)，ZDM-83-1
型电热熔点仪(江苏科教玻璃仪器厂)，数控超声波
清洗器 KQ-500DB(昆明市超声仪器有限公司)，数显恒
温水浴锅HH-S2(金坛市医疗仪器厂)，循环水式多用
真空泵 SHB-III(郑州长城科工贸有限公司)。
1． 2 材料与试剂
小槐花药材采于广西鹿寨县等地，由广西中医
药研究院何开家主任中药师鉴定为小槐花［Desmo-
dium caudatum (Thunb．)DC．］。异柠檬酚对照品
为从小槐花中提取分离获得，经结构鉴定并采用
HPLC归一化法测定含量大于 98%后使用;HPLC用
试剂为色谱纯;其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 提取分离
小槐花药材 13． 0 kg，粉碎后采用 10 倍量 95%
乙醇回流提取 4 次，每次 2 h，合并提取液，减压回收
乙醇，得浸膏，浸膏加水混悬，依次用石油醚(60 ～
90 ℃)，乙酸乙酯萃取，回收溶剂后分别得到石油醚
部位及乙酸乙酯部位。取石油醚部位进行柱层析硅
胶色谱分离，用石油醚-乙酸乙酯(100∶ 0→70∶ 30)梯
度洗脱，共收集得到 159 个流份。采用薄层鉴别将
各流份分别合并，第 137 ～ 139 流份合并后经反复柱
层析及重结晶得黄色针状结晶(42 mg)。
2． 2 结构鉴定
黄色针状结晶(石油醚-乙酸乙酯)。mp． ＞ 250
℃。IＲ (KBr)cm-1:3444，3058，2979，2867，1630，
834。1H NMＲ (500 MHz，MeOD)δ:7． 36 (2H，d，J
= 8． 5 Hz，H-2，6)，6． 84 (2H，d，J = 8． 5 Hz，H-3，
5 )，6 ． 4 2(1 H，d，J = 10 ． 1 Hz，H-1 )，5 ． 9 1
(1H，s，H-6)，5． 51 (1H，d，J = 10． 1 Hz，H-2)，
5. 02 (1H，d，J = 11． 7 Hz，H-2)，4． 56 (1H，d，J =
11． 7 Hz，H-3)，1． 39 (6H，d，J = 10． 8 Hz，H-4，
5);13C NMＲ (125 MHz，MeOD)δ:198． 94 (C-4)，
164． 62 (C-5)，163． 70 (C-7)，159． 29 (C-4)，
158. 21 (C-9)，130． 35 (C-2，6)，129． 09 (C-1)，
127． 83 (C-2)，116． 24 (C-3，5)，116． 21 (C-
1)，103． 24 (C-8)，102． 42 (C-10)，98． 26 (C-6)，
85． 05 (C-2)，79． 36 (C-3)，73． 59 (C-3)，28． 71
(C-4)，28． 45 (C-5)。以上数据与文献［4］对照基
本一致，故鉴定该化合物为异柠檬酚(Yukovanol)。
异柠檬酚化学结构图见图 1。
图 1 异柠檬酚的化学结构
Fig. 1 Chemical structure of yukovanol
2． 3 含量测定
2． 3． 1 色谱条件与系统适应性
采用 Agilent ZOＲBAX SB-C18(250 mm × 4． 6
mm，5 μm)色谱柱;流动相为甲醇-0． 2%磷酸水溶液
(70∶ 30);流速为 1． 0 mL /min;检测波长为 270 nm;
柱温为 35 ℃;理论塔板数按异柠檬酚计不低于
3000。对照品及样品色谱图见图 2。
70
60
50
40
30
20
10
0
0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 7% 8% 9 10% 11% 12 min 0% 1% 2% 3% 4% 5% 6% 7% 8% 9 10% 11% 12 min
A B70
60
50
40
30
20
10
0
mV mV
图 2 异柠檬酚对照品(A)与小槐花样品(B)的 HPLC色谱图
Fig. 2 HPLC chromatograms of yukovanol standard (A)and D． caudatum sample (B)
2． 3． 2 对照品溶液的制备
称取异柠檬酚对照品约 5 mg，精密称定，置 10
mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得
浓度为 0． 55 mg /mL的对照品储备液，备用;精密量
取 0． 55 mg /mL 的对照品储备液 1． 0 mL 置 50 mL
棕色量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为
0． 011 mg /mL的对照品溶液。
2． 3． 3 供试品溶液的制备
将小槐花药材适量，粉碎，过 40 目筛，称取药材
粉末约 1 g，精密称定，置 25 mL具塞锥形瓶中，精密
加入 55%甲醇 25 mL，称重，超声(350 W，50 kHz)
提取 50 min，放冷，甲醇补足重量，摇匀，静置，微孔
滤膜(0． 45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
2． 3． 4 线性关系的考察
取浓度为 0． 011 mg /mL 的异柠檬酚溶液，按
“2． 3． 1”色谱条件和测定方法，分别以不同的体积
(1、4、8、12、16、20 μL)进样。以对照品进样量(μg)
为横坐标 X，色谱峰面积为纵坐标 Y，绘制得标准曲
1541Vol. 26 陆国寿等:壮、瑶药小槐花中异柠檬酚的分离鉴定及含量测定研究
线并进行线性回归，计算得回归方程为 Y =
3400000X-1248． 1，Ｒ = 1． 0000。结果表明，在线性范
围 0． 011 ～ 0． 242 μg 内，异柠檬酚进样量与峰面积
均呈良好线性关系。
2． 3． 5 精密度实验
精密吸取浓度为 0． 011 mg /mL 异柠檬酚对照
品溶液 10 μL，按“2． 3． 1”色谱条件连续进样 6 次，
测定峰面积，以异柠檬酸峰面积积分值计算，ＲSD
为 0． 16%，结果表明仪器精密度良好。
2． 3． 6 稳定性实验
精密吸取同一供试品溶液 10 μL，按“2． 3． 1”色
谱条件分别于 0、2、4、8、10、12 h 进样，测定峰面积，
以异柠檬酸峰面积积分值计算，ＲSD 为 1． 26%。结
果表明，供试品溶液在 12 h内基本稳定。
2． 3． 7 重复性实验
取同一批小槐花药材粉末，称取 6 份，每份约 1
g，精密称定，按“2． 3． 3”项下样品溶液制备方法制
备得供试品溶液，按“2． 3． 1”色谱条件下进样，测定
峰面积，以外标法计算。经测定，样品中异柠檬酚的
平均含量为 0． 036%，ＲSD为 1． 58%。结果表明，该
方法重复性较好。
2． 3． 8 加样回收率试验
取已知含量(含量为 0． 036%)的小槐花药材粉
末 6 份，每份约 0． 5 g，精密称定，分别精密加入异柠
檬酚对照品溶液(0． 55 mg /mL，0． 4 mL)，按“2． 3．
3”项下样品溶液制备方法制备，按“2． 3． 1”色谱条
件进样，进样量为 10 μL，测定，计算得加样回收率
平均值为 99． 76%，ＲSD为 1． 42%(n = 6)(表 1)。
表 1 异柠檬酚的加样回收率试验结果(n = 6)
Table 1 Sample recovery test of yukovanol (n = 6)
编号
No．
样品中量
Original
amount (mg)
加入量
Added amount
(mg)
测得量
Detected
amount (mg)
回收率
Ｒecovery
(%)
平均回收率
Average recovery
(%)
ＲSD
(%)
1 0． 1805 0． 2200 0． 3969 98． 36
2 0． 1817 0． 2200 0． 4044 101． 23
3 0． 1805 0． 2200 0． 3994 99． 50
4 0． 1811 0． 2200 0． 4031 100． 91 99． 76 1． 42
5 0． 1810 0． 2200 0． 4026 100． 71
6 0． 1802 0． 2200 0． 3955 97． 86
2． 3． 9 样品含量测定
取不同采集地点的小槐花药材，分别按“2． 3．
3”项下方法制备供试品溶液，按照“2． 3． 1”色谱条
件测定，记录峰面积，外标法计算含量，结果见表 2。
表 2 不同采集地的小槐花药材中异柠檬酚的含量(n = 3)
Table 2 Content of yukovanol detected in D． caudatum samples from different places (n = 3)
采集地
Acquisition place 1 2 3
平均值
Average (%)
鹿寨 0． 036 0． 037 0． 038 0． 037
宜州 0． 023 0． 024 0． 024 0． 024
融水 0． 028 0． 030 0． 031 0． 030
3 讨论
小槐花 Desmodium caudatum (Thunb．)DC． 为
豆科山蚂蝗属植物，为广西壮、瑶民族常用药材，分
布于广西、安徽、浙江、江西等省。目前，小槐花的相
关药材质量标准比较落后，广西中药材标准［1］、广
西壮族自治区壮药质量标准［2］中收载的小槐花药
材项下均没有薄层鉴别和含量测定项目。鉴于此，
本实验拟通过对其中化学成分进行分离鉴定及含量
测定研究，为提高小槐花药材及其制剂的质量标准
提供参考方法，亦希望借此促进小槐花药材的深入
开发和应用。
异柠檬酚(Yukovanol)为从小槐花药材中分离
得到的一个黄酮类化合物。目前，异柠檬酚的相关
研究文献较为罕见［5，6］，主要集中在化学分离纯化、
抗肿瘤活性方面，但尚未见异柠檬酚含量测定方法
2541 天然产物研究与开发 Vol. 26
研究的相关文献报道，本文属首次对异柠檬酚的含
量测定方法进行研究，为异柠檬酚的研究开发提供
了依据。
异柠檬酚溶于甲醇，故本实验采用甲醇为提取
溶剂，对甲醇浓度，甲醇用量，提取时间进行了考察。
结果表明，采用 55%甲醇为提取溶剂，溶剂量为 25
mL /1 g样品，超声(350 W，50 kHz)提取 50 min 可
获得较好的提取效果。实验结果表明，本实验采用
的 HPLC法测定小槐花中的异柠檬酚的含量，方法
简单方便，操作性强，具有较好的稳定性、重现，为小
槐花质量控制方法提供了参考，为异柠檬酚含量测
定方法的研究提供了重要依据。
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