全 文 ：［收稿日期］ 20130311(024)
［基金项目］ 广西自然科学基金项目(2012GXNSFAA053175)
［第一作者］ 成林，主管药师，从事医院药学研究，Tel:
13597118881，E-mail:809433745@ qq． com
［通讯作者］ * 刘吉成，硕士，主管药师，从事食品药品分析与
药品质量标准研究，Tel:13877502503，E-mail:
liujichenggood@ 126． com
HPLC测定小槐花药材中山柰酚的含量
成林1，刘吉成2* ，卢森华2，卢文杰3，蒋受军2
( 1. 广西南宁市红十字会医院，南宁 530012; 2. 广西玉林食品药品检验所，广西 玉林 537000;
3. 广西中医药研究院，南宁 530022)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱法测定小槐花药材中山柰酚的含量的方法。方法:样品用甲醇-25%盐酸(4∶ 1)混合溶
液回流提取 1. 5 h，用 Thermo BDS Hyperl C18柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)色谱柱分离，以乙腈-0. 2%磷酸溶液(30∶ 70)为流动
相，流速 1. 0 mL·min －1，柱温 30 ℃，检测波长 368 nm，进样量 10 μL，以外标法定量。结果:山奈酚进样量在 18. 94 ～ 189. 4 ng
与峰面积值呈现良好的线性关系(r = 0. 999 6) ，平均回收率为 105. 5%，RSD 1. 2%(n = 6)。结论:该法操作简便，结果准确可
靠，重复性及稳定性良好，可作为控制小槐花药材质量的方法。
［关键词］ 小槐花;山柰酚;高效液相色谱;含量测定
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)15-0092-03
［doi］ 10． 11653 /syfj2013150092
Determination of Kaempferol in Desmodium caudatum by HPLC
CHENG Lin1，LIU Ji-cheng2* ，LU Sen-hua2，LU Wen-jie3，JIANG Shou-jun2
(1. Guangxi Nanning Red Cross Hospital，Nanning 530012，China;
2. Guangxi Yulin Institute for Food and Drug Control，Yulin 537000，China;
3. Guangxi Institute of Chinese Medicine and Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method for determination of kaempferol in D． caudatum．
Method:D． caudatum was extracted by reflux with the mixed solution of methanol 25% hydrochloric acid (4∶ 1)
for 1. 5 hours． The chromatographic column was ThermoBDS Hyperl C18 column (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，and
the mobile phase consisted of acetonitrile-0. 2% phosphoric acid (30∶ 70)with a flow rate of 1. 0 mL·min －1 ． The
detection wavelength was set at 368 nm，and the column temperature was kept at 30 ℃;the inject volume was 10
μL． The content of kaempferol in D． caudatum was determined by external standard method． Result:Kaempferol
was linear in the concentration range of 18. 94-189. 4 ng (r = 0. 999 6) ，and the average recovery of kaempferol
was 105. 5% (RSD 1. 2%)． Conclusion:The method is simple，accurate and reproducible with good stability，
which can be used as quality control method for D． caudatum．
［Key words］ Desmodium caudatum;kaempferol;HPLC;determination
小槐花为豆科山蚂蝗属植物小槐花的全株，又
名清酒缸、草鞋板、味噌草、拿身草等［1］，分布于广
西、广东、浙江、湖北等地［1-2］。全株均可作药用，具
有清热利湿、消积散瘀功效，主治劳伤咳嗽、吐血、水
肿、小儿疳积、痈疮溃疡、跌打损伤等症［1-2］，为广西
民间常用中草药［3］。吴瑶等［4］已经从该药材的
60%乙醇提取物中分离得到 15 个化合物，其中有豆
甾醇、柠檬酚、黄槿酮 D、山柰酚等化合物。为了有
效控制小槐花药材的质量，本文建立 HPLC 测定小
槐花药材中山柰酚含量的方法，为小槐花药材的深
度开发提供科学依据。
·29·
第 19 卷第 15 期
2013 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 15
Aug．，2013
1 材料
Agilent 1260 型高效液相色谱议(美国安捷伦科
技有限公司) ，HH-S6 型数显恒温水浴锅(金坛市医
疗仪器厂) ，Millipore Simplicity-UV 型超纯水机(美
国密里博公司) ，SB2200-T型超声波清洗器(上海必
能信公司) ，XS-205Du 型电子分析天平(瑞士梅特
勒公司)。
小槐花药材采集于广西来宾、南宁、鹿寨、南丹、
平南、宁明、钟山、平果、马山等地，经广西中医药研
究院卢文杰教授鉴定为豆科山蚂蝗属植物小槐花
Desmodium caudatum(Thunb．)DC． 的地上部分的茎
和枝，使用前粉碎过 2 号筛。
山柰酚对照品(批号 110861-200304，供含量测
定用，中国药品生物制品检定所提供) ，甲醇、乙腈
均为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件与系统适应性试验 ThermoBDS
Hyperl C18色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，流动相
乙腈-0. 2%磷酸溶液(30∶ 70) ，流速 1. 0 mL·min －1，
柱温 30 ℃，检测波长 368 nm，进样量 10 μL。在此
条件下，理论塔板数以山奈酚峰计算不低于5 000。
见图 1。
A．对照品;B．样品;Ⅰ. 山柰酚
图 1 对照品及小槐花药材的 HPLC
2. 2 对照品溶液制备 精密取干燥至恒重的山柰
酚对照品，称定质量为 9. 47 mg，置 25 mL 量瓶中，
加适量甲醇超声使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，
摇匀，作为对照品贮备液。精密量取 5 mL贮备液置
100 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
(山奈酚对照品溶液质量浓度 18. 94 mg·L －1)。
2. 3 供试品溶液制备 取粉碎的小槐花药材约
5 g，精密称定，置于锥形瓶中，精密加入甲醇-25%
盐酸(4∶ 1)混合溶液［5］25 mL，称定质量，加热回流
1. 5 h，放冷，用甲醇-25%盐酸(4 ∶ 1)混合溶液补足
损失质量，过滤，取续滤液，即得。
2. 4 测定方法 分别精密吸取上述对照品溶液和
供试品溶液各 10 μL，在 2. 1 项下的色谱条件下，供
试品中山柰酚色谱峰与对照品色谱峰保留时间一
致，并与其他共存成分分离度 ＞ 1. 5。见图 1。
2. 5 线性关系考察 分别精密吸取上述山柰酚对
照品溶液(18. 94 mg·L －1)1，2，3，4，5，10 mL 置
10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别取上
述 6 个不同浓度的对照品溶液 10 μL，注入高效液
相色谱仪，以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵
坐标绘制标准曲线，得山奈酚的线性方程为 Y =
4. 838 5X + 2. 181 7(r = 0. 999 6)。结果表明山柰酚
对照品溶液在质量为 18. 94 ～ 189. 4 ng 与峰面积值
呈现良好的线性关系。
2. 6 精密度试验 精密吸取山柰酚对照品溶液
(18. 94 mg·L －1)10 μL，注入高效液相色谱仪，按
2. 1 项下色谱条件连续进样 6 次，测定峰面积，结果
山奈酚平均峰面积 RSD 1. 2%，表明所用液相色谱
仪精密度良好。
2. 7 重复性试验 取同一批小槐花粗粉 6 份(产地
为来宾) ，每份约 5 g，精密称定，按 2. 3 项方法制备，
精密吸取 10 μL，注入高效液相色谱仪，按 2. 1 项下
色谱条件测定其峰面积并计算山柰酚含量，结果平
均值为 0. 050 mg·g －1，RSD 1. 6%。表明本法重复
性良好。
2. 8 稳定性试验 取一份上述供试品溶液，每次精
密吸取 10 μL，注入高效液相色谱仪，按 2. 1 项下色
谱条件，分别于 1，2，4，6，12，24 h 进样，测定其峰面
积值，RSD 0. 9%，表明供试品溶液在 24 h 内保持
稳定。
2. 9 加样回收试验 取已知含量(产地为来宾，
0. 050 mg·g －1)的粉碎的小槐花药材 6 份，每份约
2. 5 g，精密称定，分别加入一定量的山柰酚对照品，
按 2. 3 项方法处理，精密吸取 10 μL，注入高效液相
色谱仪，按 2. 1 项下色谱条件测定山柰酚含量，计算
回收率，平均回收率为 105. 5%，RSD 1. 2%，表明该
方法准确性高。结果见表 1。
2. 10 样品含量测定 分别取不同产地小槐花药
材，粉碎，取粉末约 5 g，精密称定，按 2. 3 项方法制
备，精密吸取 10 μL，注入高效液相色谱仪，按 2. 1
项下色谱条件测定峰面积，计算山奈酚的含量。结
果见表 2。
·39·
成林，等:HPLC测定小槐花药材中山柰酚的含量
表 1 小槐花药材山柰酚加样回收试验
No．
样品量
/ g
测得量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /%
RSD
/%
1 2. 529 4 0. 259 106. 48
2 2. 500 1 0. 253 103. 16
3 2. 514 4 0. 258 106. 11
105. 5 1. 2
4 2. 501 4 0. 257 106. 05
5 2. 529 8 0. 259 106. 21
6 2. 510 1 0. 256 105. 24
注:加入量均为 0. 124 mg。
表 2 各产地小槐花药材山柰酚的含量 mg·g － 1
No． 产地 山柰酚含量
1 来宾 0. 050
2 南宁Ⅰ 0. 050
3 鹿寨 0. 049
4 南丹 0. 036
5 平南 0. 054
6 宁明 0. 052
7 钟山 0. 045
8 苹果 0. 050
9 马山 0. 047
10 南宁Ⅱ 0. 051
3 讨论
采用水、甲醇、甲醇-25% 盐酸(4 ∶ 1)混合溶
液［5］等溶剂进行加热回流提取，发现只有用甲醇-
25%盐酸(4∶ 1)混合溶液回流提取测得是山柰酚，
用甲醇、水等其他溶剂提取测定的是山奈酚的糖苷
化合物;还比较了回流提取与超声提取的效率，发现
回流提取比超声提取测的山柰酚含量要高;对加热
回流提取时间(0. 5，1，1. 5，2 h)进行考察，以回流
提取 1. 5 h 测得的山奈酚含量最高，故选择甲醇-
25%盐酸(4∶ 1)混合溶液回流提取 1. 5 h。
曾考虑用甲醇-0. 1% 磷酸(65 ∶ 35)［6］、甲醇-
0. 2% 磷 酸 (60 ∶ 40 )［7］、甲 醇-0. 4% 磷 酸
(55∶ 45)［8-9］、甲醇-0. 6% 磷酸(52 ∶ 48)［10］、乙腈-
0. 2% 冰 乙 酸 (27 ∶ 73)［11］、乙 腈-0. 1% 磷 酸
(27∶ 73)［12］、乙腈-0. 2%磷酸(30 ∶ 70)等流动相，发
现用甲醇与不同浓度的磷酸作为流动相时，样品杂
质太多，山柰酚与旁边的杂质分离的不是很好，而且
峰型较宽;用乙腈-0. 2%磷酸(30 ∶ 70)作为流动相
时，样品分离好，峰型很好，故选择了乙腈-0. 2%磷
酸(30∶ 70)作为流动相。
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［责任编辑 顾雪竹］
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2013 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 15
Aug．，2013