全 文 ：银合欢含羞草素测定技术的研究 `
华南热带作物科学研究院热作所 ’ 陈秀兰 陈金燕 洪 丽峨
银合欢是一种优良的 热带 豆科 饲料 植
物 。 它不仅嫩茎叶产量 高 , 对 牲畜适口 性
好 , 且含有丰富的蛋白质 。 但由于它的叶 、
枝 、 种子都在不同程度 _ L含有有毒的含羞草
素 , 牲畜食量过多 , 会 引起 脱毛和 生长停
滞 。 为了进一步了解含羞草素的含量 , 我们
从 1 9 8 3一 1 9 8 4年对含羞草素的测定技术进行
了研究 。
一 、 测定方法 一 厂 .
含羞草素的测定方法 , 国外早在 1 9 5 1年
就开始研究 , 至今 方法 甚多 , 有 氯化铁 法
(M a t s u m o t o a n d S h e r m a n 1 9 5 1
,
M e g a r r i t y
1 9 7 8 )
, 液相色谱分析法等 。 近来又 发展 用
自动化离子交换 色层诱析 ( I E c 法 ) 来 测
定 , 据报导 , 该法是一种快速 , 准确的测定
方法。 国内 , 中国农科院雷攻所最近报导 ,
用高效液相色谱仪测定含羞草素 。 其它方法
尚未见报导 。
最近 , 我们 采 用 氯化铁 法 ( 改 良 的
M e g a r r s t :
· 法 , l , 7 8年 ) , 经过 几个月的摸
索试测 , 此法较为简便 、 快速 、 准确 。 现将
方法简介如下 :
( 一 ) 材料与方法
1
。 主要试剂及仪器 :
( 1 ) 提取剂 : 1 升 O . I N 盐酸 中加入
1
.
5克活性炭 , 搅拌成悬浮液 。
( 2 ) 氯化铁试剂 : 将 4克F e C一。 . 6H : O
溶干 l 升 O . 05 N盐酸 。
( 3 ) 稀释剂 : 将 1克 N a ZE D T A . ZH : 0
( 乙二胺四乙酸二钠 ) 溶于 4 升水 。
( 4 ) 标准液制备 : 用 O。 I N 盐酸 溶液
配成 1 %浓度的含羞草素 。
( 5 ) 7 2型光电分光光度计 。
2
. 样品侧定 :
( 1 ) 绘制标准曲线图 : 吸 1 %浓度的
标准液 , 分别制备含量为 0 . 0 2 5%、 0 . 0 50 % 、
0
.
0 7 5%
、 0
。
1 0 0%
、
0
。
1 5 0%
、
0
.
2 0 0 %的标
准液 ( 用 0 . I N 盐酸溶液定容 ) , 吸取各种浓
度的标准液万毫升 , 分别注入 6个 5 0 毫升的
三角瓶中 , 加入 10 毫升混合显色液 ( 使用前 ,
按 Fo C 1 3 , N a ZE D T A “ 1 , 4 混合 ) , 在阴
暗处 放置 幼分钟 , 然后 用 72 型光 电分光光
度计 , 选取 弱 o毫微米 波长进行比色 , 绘 制
标准曲线图 。
( 2 ) 样品测定步骤 :
①样品采集及处理 : 1 9 8 3年采 自木院银
合欢品种比较试验 地 、 一年 生 的新 银合欢
( L o u
e a e n a l e u e o e e P h a l a C V
.
E l
.
S a飞v a d o r )
及肯 宁汉姆 银 合欢 ( L 。 l o u e o e e仲 a xa
C v
· 叨 n in hg a m 。 在 树冠 中 上部 处 取 ,
主茎上的第一分 枝 ( 侧枝 ) , 把侧枝分 为
顶部 、 中部 、 基部三部分的枝及 叶 分 别 剪
碎。
②含羞草素的提取 : 称取已剪碎的鲜样
l 克于 1 0 毫升的三角瓶中加入 ” 毫升 提取
剂 , 搅拌 2 分钟 , 盖紧瓶 口 , 置于沸水的水
浴锅中搅动 15 玲一钟 , 取下冷却后 , 用定是滤
纸过滤 , 此液就为待测液 。
③含羞草素的测定 : 吸取 4 毫升待测液
· 本文经金作栋教授 , 江式邦和蒋候明同志审阅 , 谢谢 。
肠含
注入 50 毫升的三角瓶中 , 以下步骤与绘制的
标准曲线操作程序相同 , 同时每个样品都要
做空 白测定 ( 空白侧定方法 : 吸取待测液 4
毫升 , 加入 8 毫升稀释液及 2 毫升水 ) , 用样
品测定值减去空白值为样品净值 。
④计算公式 、
,
, 。 、 , , 。 二 , 、 。 5 0
` “ 一 “ . 2 ` 、 工口 , 二 , 八万含羞草素% “ K薇豪不薛而获诵萍育董了石了 . x 1 0
E 。一空白液的光密度 .
E一待测液的光密度 。
l一样品重量 ( 克 ) .,
19 一开始加入提取剂的毫升数。
K 二最高标准浓度光密度
( 二 ) 浦定结果
采用上法测定样品结果列于表 1 。
表 1 样品含羞草素含里测定结果 ( % )
” 一 ’一…万咨开二孤味硫 ,厂属雨蕃一邵 位 }— 卜一二 , 下一 , , 一— }上吐一 }进一…二生仁生一侧枝顶部 {` ” · “ }廷· ” 3 !` 7 · “ 3 1“ · ” 3`则终宁严{ ” · 0` {“ · “ 8 } 6· 2` }` · ` 4侧枝基 ,slp 2· 2` l”书 .lf 魂“ {。 · s`
从表 1看出 : 含羞草素在银合欢植株体
内的分布是不均匀的 。 顶部 ` 或枝 )含量最
高 , 中部次之 , 基部最低 。 同时看出品种之
间也有差异 , 新银合欢比肯宁汉姆银合欢含
量高 。
( 三 ) 注意事项
( 1 ) 在提取液中 , 每 50 毫克鲜样重 ,
使用 10 ~ 1 5 %毫克活性炭的量必须控制好 ,
用量过多或过少都直接影响测定结果 。
( 2 ) 每一个样品都必须进行空白测定
( 可消除在活性炭的净化过程中 , 一些非酚
色素逃逸了净化的干扰值 ) , 否则将引起结
果偏高 。
( 3 ) 测定干物质 ( 水分 ) 的称样必须
与分析鲜样同时进行 , 否则将会造成计算结
果不准确。
二 、 取样部位
银合欢的叶 、 枝及 种 子 都 含有 含羞草
素 , 但其含量因老嫩程度和部位不同而异 .
据我们分析结果 : 叶比枝含量高 , 嫩叶 ( 或
枝 ) 比老叶 ( 或枝 ) 含量高 , 种了比老仆含
量高 , 而比嫩叶含量低 。 含羞草素在银合欢
植株体内分布是这样地不均匀 , 究竞要采用
哪个部位的叶片才能代表某个品种的正确含
量 f 为此 , 我们进行了取样部位的研究 。
( 一 ) 试验材料与方法
1
. 试验材料 : 1 9 8 3年采自我院银合欢
品种比较试验地的 14 个月龄的肯宁汉姆银合
欢及新银合欢 , 每个品种采 5 次样品分析 。
之。 测定方法 : 采用改良 的 M ge ar irt y
法。
3
, 采样方法 .
,
( 1 ) 同一侧枝上的不同叶龄的叶片测
定 : 在树冠中上部处 , 取主茎上的第一分枝
( 侧枝 ) , 把该侧枝分别取心叶 、 嫩叶及稳
定叶第 1 、 2 、 3 、 4 、 5 、 6 、 7 、 8 、
g
、
1 0片 ( 由上而下顺序排列 ) , 并把各龄
叶片 , 剪下两端小叶测定干物质 , 取中间两
对小叶作为分析样品 。
( 2 ) 同一片羽叶上的不同部位的小叶
侧定 : 另取一侧校 , 取稳定叶的正中间叶片 ,
分别测定其上 、 中 、 下三部分的小叶 , 同时
取该叶片相邻的上 、 下叶片 , 同样 取 上 、
中 、 下小叶测定其干物质 。
( 二 ) 浏定结果
肠
一 … 、
.1
气耳 , 例枝不同叶岭的熟琴草素含量变化: 从表 2看出 , 同一侧枝的不同叶龄的
叶片 , 含羞草素含量差异甚大 , 顶部的心叶
含量最高 , 其次为嫩叶 , 基部的老叶含量最
低 。 还可看出 , 含羞草素含量与叶龄关系很
密切 。 含羞草素的含量 , 是履着 叶 龄 的 增
加而有规律 地递减。 其中由心叶、 嫩 叶至
第一片稳定朴 , 含量急剧递减 ( 平 均每 片
叶 递减 2 . 2% ) , 第一片稳定叶 往后 的 叶
片 , 含量递减幅度较小 ( 平均每片 叶递 减
0
。
4 5% )
。
衰 2 同一侧枝不同叶盼的含狡草索
含脸处花,一 气 ’乏干童% )
虽然 , 在同一侧枝的不同叶龄的叶片 , 含
羞草素的含量变化很大 , 但第四片稳定叶的
含量却最接近于稳定叶的平均值 。 如肯宁汉
姆银合欢稳定叶的含羞草素平均值为 4 . 32 %,
第四片稳定叶含量为 4 . 46 % ; 新银合欢的结
果也一 样 , 稳 定 叶 的 含羞草素 平均 值 为
5
。
6 2%
, 第四片稳定叶含量为 5 。 8 % 。
2
. 同一片叶的不同部位的含羞草素含
量比较 : 从表 3 看出 , 在 同一 片叶 的 上 、
中、 下三部分的小叶 , 含羞草素的含量也有
差异 , 上部小叶比中部小叶含量高 , 中部又
比基部小叶含量高 , 中部小叶的含量也是最
接近于三部分的平均值 。
衰 3 同一片叶不同部位的含羞草分含且
比较衰 ( 干重% )
项 目 }肯宁汉姆银合欢 新银合欢
5
。 弓0
5
。
1 2
4
。
6 9
5
。
1 4
月勺OUn叭J皿qUnlt内1,`
.…Od内JJon乃
叶 龄 肯宁.砰姆银今欢 新银合欢
心 叶 1 4 . . 4 6 1 6 。 69
嫩 叶 . 9 ·乒5 . ` 1 3 。 5 9
稳定叶第 1 7 。 4 7 1 0 一 0 7
2 已` 3压 ’弓. _ 又之; 7 。 滩2
3 5
. 肠3二 6 。 1 9
4 4
.
4 6
, 「
5
。
8 8
5 4 ` 0 3 - 5 。 2 9
6 … 3 . 7 0 ;
.
4
。
9 8
7 3
。
4 7 4
一
7 1
8 2
。
9 5
·
; ` 。 ` 9
9 2
. 习… 3 。 8 1l 0 2 。 3了二 3 。 3 9
平均值 ` 3 2 、 5 。 6 2
顶端 小叶
中部小叶
基部小叶
平 均 值
注 : ①心叶是指刚萌发的小叶。
②嫩叶是指未稳定的叶片。
③德定叶 “ 1一 110 ” 是按稳定 叶 由
上 而下的 不同老嫩程度而排的。
( 三 ) 小结
( 1 ) 含羞草素的 含量与 叶龄 成负相
关 , 叶龄 越嫩 ( 小 ) , 含量越高 , 叶龄 越
老 (大 ) , 含量越低 。
( 2 ) 稳定叶之间的含羞草素含量也有
差异 , 但差异很小 。
( 3 ) 树冠中部位的侧枝中部的稳定叶
含羞草素的含量约等于全 侧枝 含量 的 平均
值 , 因此 , 采样宜采枝条中部的稳定叶 。
( 参考文献一篇从略 )