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鬼箭羽多糖分析方法研究



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药材进行浸泡,这样更有利于溶剂穿透药材细胞,充
分溶出药材的有效成分。
参考文献:
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(收稿日期:2012-05-23)
鬼箭羽多糖分析方法研究
柴 焱1,田振虎1,郭建芳1,陈 萍2*(1.陕西中医学院,咸阳 712046;2.陕西省中医药研究院,西安 710003)
摘要:目的 建立鬼箭羽多糖分析方法。方法 采用L9(34)正交实验法考察样品提取方法,通过单因素实验优选多糖显色条
件,用紫外-可见分光光度法测定多糖含量。结果 多糖提取方法:以75和100mL水提取2次,第1次煎煮2h,第2次煎煮1
h;显色条件:取供试溶液1.0mL,加入0.05g·mL-1苯酚液1mL,混匀,再加浓硫酸7.0mL,摇匀,于20℃水浴中反应30min,
冰水浴冷却5min,在482nm波长处测定吸光度;葡萄糖质量浓度在0.012~0.18mg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 7),
平均回收率为100.4%,RSD=1.2%。结论 建立的鬼箭羽多糖分析方法可行、准确、简便。
关键词:鬼箭羽;多糖;提取方法;苯酚-硫酸法
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2013.01.006
中图分类号:R284   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2013)01-0015-03
Study on the analytical method of polysaccharides in Euonymus alatus (Thunb.)
Sieb.
CHAI Yan1,TIAN Zhenhu1,GUO Jianfang1,CHEN Ping2*(1.Shaanxi University of Chinese Medicine,Xianyang 712046,China;
2.Shaanxi institute of Chinese Medicine,Xi′an 710003,China)
Abstract:Objective To optimize the analytical method of polysaccharides in Euonymus alatus(Thunb.)Sieb..Methods The or-
thogonal experiment design was used to select the method of extraction,a single factor was used to select the way of coloration,and
the contents of the polysaccharides were determined by spectrophotometric method.Results The extraction method was adding 75
and 100mL water,extraction twice,the first time 2h,the second time 1h;the way of coloration was obtained as folows:1.0mL
0.05g·mL-1 phenol solution was added to 1mL testing solution and mixed.Then 7.0mL concentrated sulfuric acid was added
quickly drop by drop.After set at 20℃ water for 30min,set at cold water for 5min,the solution was detected at wavelength of
482nm.The standard curve was linear in the concentration range of 0.012-0.18mg·mL-1 with correlation coefficient of r=0.999 7.
The recovery rates was 100.4%,RSD=1.2%.Conclusion The established methods was proved to be stable,feasible and simple.
Key words:Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.;polysaccharides;method of extraction;phenol-sulfuric acid method
基金项目:陕西省中医药管理局中医药研究课题(JC94)
作者简介:柴焱,男,在读硕士研究生
*通信作者:陈萍,女,研究员,硕士生导师
  鬼箭羽系卫矛科植物卫矛 Euonymus alatus
(Thunb.)Sieb.具翅状物的枝条或翅状附属物和嫩
枝,分布于我国北部、中部、华东以及西南各地,陕西
资源丰富[1];其味酸甘涩,性微寒;具有破血、通经、杀
虫、散瘀、止痛等功效[2]。药理研究表明,其具有降血
糖、调血脂及延缓动脉粥样硬化等作用[3]。鬼箭羽主
要含有黄酮和黄酮苷、生物碱、强心苷、甾体、多糖类
等化学成分[4],其中含有大量多糖类成分。近年来,
植物多糖在抗肿瘤、抗衰老、抗病毒、抗炎及提高免疫
功能等方面的药理作用受到了人们的高度关注,但鬼
箭羽多糖的分析研究未见报道。本实验采用苯酚-硫
酸法研究了鬼箭羽多糖的含量测定方法,为鬼箭羽的
开发应用提供依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 UV1700-1800紫外-可见分光光度计(上
海凤凰光学科学仪器有限公司);PB211D型电子分
析天平(德国赛多利斯);TDL-60B台式离心机(上海
安亭科学仪器厂);FOEA26810D型纯水机(Mili-
pore公司);HH-S4型电热恒温水浴锅(北京科伟永
兴仪器有限公司)。
1.2 试药 苯酚、硫酸、无水乙醇等均为国产分析
纯;葡萄糖(上海化学试剂有限公司);水为超纯水。
1.3 样品 鬼箭羽(市售,陕西),经鉴定为卫矛科植
物卫矛Euonymus alatus(Thunb.)Sieb.具翅状物
的枝条或翅状附属物和嫩枝。
2 方法与结果
2.1 苯酚溶液的配制 取苯酚适量,加热蒸馏,收集
馏分。精密称取该馏分5g,置100mL棕色量瓶中,
加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即配得0.05g·mL-1
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的苯酚溶液,避光密封保存,备用。
2.2 对照品溶液制备 精密称取105℃干燥至恒质
量的无水葡萄糖60.5mg,置100mL量瓶中,加水溶
解并稀释至刻度,摇匀,即配得0.605mg·mL-1的
葡萄糖溶液,备用。
2.3 吸收波长确定 精密量取对照品溶液1.0mL
于10mL的量瓶中,加入0.05g·mL-1的苯酚溶液
1.0mL,旋涡混匀,加入7.0mL浓硫酸,迅速振摇混
匀,于30℃水浴下放置30min,在紫外-可见分光光
度计上扫描波长在400~600nm之间的吸光度,检
测最大吸收波长。结果:对照品溶液在482nm波长
处有最大吸收,故选择482nm为测定波长。
2.4 显色条件优选
2.4.1 苯酚用量的确定 精密量取对照品溶液1.0
mL,6份,分别置于10mL量瓶中,各加入0.05g·mL-1
的苯酚溶液0.5,0.8,1.0,1.2,1.5和2.0mL,分别加
水至3.0mL,旋涡混匀;再加7.0mL的浓硫酸,迅速
振摇混匀,于30℃水浴下放置30min,取出,冰水浴冷
却5min。取2.0mL水加入1.0mL 0.05g·mL-1的
苯酚溶液,再加入7mL浓硫酸作为空白液,在482nm
波长处测定吸光度。结果0.05g·mL-1苯酚溶液用量
为0.5,0.8,1.0,1.2,1.5和2.0mL时,对应的吸光度分
别为0.408,0.450,0.519,0.500,0.484和0.483。
2.4.2 硫酸用量的确定 精密量取对照品溶液1.0
mL,7份,分别置于10mL量瓶中,加0.05g·mL-1
的苯酚溶液1.0mL,分别加水至6.0,5.5,4.5,4.0,
3.0和2.0mL,旋涡混匀,分别加浓硫酸至10mL,迅
速振摇混匀,于30℃水浴下放置30min,取出,冰水浴
冷却5min。取2.0mL水加入1.0mL 0.05g·mL-1
的苯酚溶液,再加入7.0mL浓硫酸作为空白液,在
482nm波长处测定吸光度。结果浓硫酸用量为4.0,
4.5,5.0,5.5,6.0,7.0和8.0mL时,对应的吸光度分
别为0.054,0.086,0.157,0.194,0.282,0.530和0.481。
2.4.3 反应温度的确定 精密量取对照品溶液1.0mL,
5份,分别置于10mL量瓶中,分别加0.05g· mL-1
的苯酚溶液1mL,旋涡混匀,加浓硫酸7.0mL,迅速
振摇混匀,分别于20,30,40,50和60℃放置30min,
取出,冰水浴冷却5min,在482nm波长处测定吸光
度。结果反应温度为20,30,40,50和60℃时,对应的吸
光度分别为0.502,0.498,0.483,0.476和0.481。
2.4.4 反应时间的确定 精密量取对照品溶液1.0
mL,7份,分别置于10mL量瓶中,分别加0.05g·mL-1
的苯酚溶液1.0mL,旋涡混匀,加浓硫酸7.0mL,迅
速振摇混匀,于20℃水浴下放置30,40,50,60,70,
80和90min后,取出,冰水浴冷却5min,在482nm
波长处测定吸光度。结果反应时间为30,40,50,60,
70,80和90min时,对应的吸光度均为0.472。
2.5 供试品制备条件优选
2.5.1 因素水平确定 影响水提取的主要因素有提
取时间、加水量和提取次数,因素水平确定见表1。
表1 正交实验提取鬼箭羽多糖因素与水平
Tab.1Factors and level of polysaccharide of Euonymus alatus
by orthogonal experiment extraction
水平
因素
A,加水量/mL  B,提取时间/h  C,提取次数/次
1  100  1  1
2  75  1.5,1  2
3  50  2,1  2
 注:第2次加水量为100mL
2.5.2 正交实验 精密称取鬼箭羽粉末1g于烧瓶
中,分别按L9(34)表安排提取,滤过,滤液浓缩,定容
至50mL量瓶中。分别取续滤液2.0mL加入无水
乙醇8.0mL,静置24h,离心,取沉淀,加水溶解转移
至5mL量瓶中,即为1~9号鬼箭羽多糖样品液。
依上法测定。见表2。方差分析结果见表3。
表2 L9(34)正交实验设计与结果
Tab.2L9(34)Design and results of the orthogonal experiment
No. A  B  C 多糖含量/mg·g-1
1  1  1  1  10.85
2  1  2  2  14.84
3  1  3  3  19.85
4  2  1  2  14.90
5  2  2  3  19.37
6  2  3  1  13.28
7  3  1  3  17.41
8  3  2  1  11.53
9  3  3  2  18.57
K1 15.179  14.386  11.886
K2 15.849  15.247  16.102
K3 15.837  17.231  18.876
R  0.670  2.845  6.989
表3 方差分析结果
Tab.3Results of variance analysis
方差来源 SS  f  MS  F  P
A  0.927  2  0.414  1.00
B  13.080  2  6.540  14.11
C  73.602  2  36.801  79.39 <0.05
误差 0.93  2  0.465
  提取次数(C)对鬼箭羽多糖含量有显著影响,而
加水量(A)、提取时间(B)对鬼箭羽多糖含量无显著
影响。可以得出3个因素对糖含量影响的主次顺序
为C>B>A,最佳的提取方法为 A2B3C3,即75mL
和100mL水提取2次,第1次2h,第2次1h。
2.5.3 优选供试品制备 分别以75和100mL水
回流提取2次,第1次2h,第2次1h。滤过,滤液浓
缩,定容至50mL量瓶中。取续滤液2.0mL加入无
水乙醇8.0mL,静置24h,离心,取沉淀,加水溶解转
移至5mL量瓶中,即为鬼箭羽多糖样品液。
2.6 线性关系考察 精密量取对照品溶液0,1.0,
2.0,3.0,4.0,5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0,11.0,13.0
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和15.0mL,分别置于50mL量瓶中,加水至刻度,
摇匀。精密量取上述各溶液1.0mL,置10mL量瓶
中,分别加0.05g·mL-1的苯酚溶液1.0mL,加水
1.0mL,混匀,迅速加入浓硫酸7.0mL,摇匀,于20
℃水浴中放置30min,取出,冰水浴冷却5min,以第
1组为空白,在482nm的波长处测定吸光度,以吸光
度为纵坐标,以质量浓度为横坐标,得回归方程:Y=
0.071 9 X+0.005 4(r=0.999 7),葡萄糖在所试质
量浓度范围(0.012~0.18mg·mL-1)内线性关系
良好。
2.7 精密度实验 取供试品按标准曲线制备项下方
法操作,连续测定6次,RSD为0.1%(n=6)结果表
明,仪器精密度良好。
2.8 稳定性实验 取供试品按曲线制备项下方法,
每隔1h测定1次吸光度,连续18h考察其稳定性,
RSD为1.2%,结果表明,供试液在18h显色稳定。
2.9 重复性实验 取样品6份,精密称定,按2.5.3项
下制备样品,并按2.6项下方法测定吸光度,计算含量,
RSD为3.97%,结果表明,测定方法重复性好。见表4。
表4 鬼箭羽多糖重复性实验结果
Tab.4Results of reproducibility experiments of polysaccharide
of Euonymus alatus
编号 取样量/g
测量值
/mg
样品含量
/mg·g-1
平均含量
/mg·g-1
RSD
/%
1  1.002 7  15.74  15.70
2  1.000 2  15.11  15.11
3  1.000 7  15.41  15.40  15.13  3.97
4  1.002 1  14.10  14.08
5  1.001 3  15.62  15.60
6  1.002 9  14.90  14.86
2.10 加样回收率实验 精密称取已知含量的样品
粉末1g,6份,分别精密加入一定量的葡萄糖对照
品,按2.5.3项制备样品并按2.6项方法测定含量,
计算回收率,平均回收率为100.4%,RSD=1.2%。
结果见表5。
表5 鬼箭羽多糖加样回收率实验结果
Tab.5Results of recovery experiment of polysaccharide of Eu-
onymus alatus
编号 已知量/μg
加入量
/μg
测量值
/μg
回收率
/%
平均值
/%
RSD
/%
1  60.56  60.5  120.93  99.88
2  60.56  60.5  122.11  101.83
3  60.56  121.0  182.52  100.84  100.4  1.2
4  60.56  121.0  176.29  99.45
5  121.12  60.5  182.52  101.69
6  121.12  60.5  180.84  98.91
3 讨论
采用正交法优选出多糖的回流提取工艺,即75
mL和100mL水提取2次,第1次2h,第2次1h。
方法学研究也表明:该方法线性关系好,多糖含量测
定结果稳定,重复性好,回收率高,为鬼箭羽的开发应
用提供了理论依据。
参考文献:
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(收稿日期:2012-05-23)
养肝疏胆颗粒中挥发油包合工艺研究
庞来祥,郭 涛,王 博(解放军第四五一医院,西安 710054)
摘要:目的 优选养肝疏胆颗粒中挥发油的包合工艺。方法 采用正交实验,以挥发油与β-环糊精投料比、包合温度、搅拌时间
为考察因素,以挥发油利用率、包合物收得率为考察指标优选。结果 挥发油最佳包合工艺为:油与β-环糊精按1∶8的投料比,
在50℃搅拌包含120min。结论 该工艺稳定、可行,为挥发油工业化包合提供了依据。
关键词:β-环糊精;包合;养肝疏胆颗粒;挥发油
doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2013.01.007
中图分类号:R28   文献标志码:A   文章编号:1004-2407(2013)01-0017-03
Study on the volatile oil inclusion complex in Yangganshudan Granules
PANG Laixiang,GUO Tao,WANG Bo(The 451th Hospital of PLA,Xi′an 710054,China)
Abstract:Objective To optimize the volatile oil inclusion process of Yangganshudan Granules.Methods An orthogonal test was a-
dopted to optimize,the ratio of volatile oil andβ-cyclodextrin,inclusion temperature,and stirring time.The volatile oil utilization,
and the inclusion yield rate were used as the index.Results The results were as folows:the ratio of oil andβ-cyclodextrin 1∶8,in-
clusion temperature 50℃,stirred time 120minutes.Conclusion The process was proved to be stable,and easy practice.This study
provide a basis for industrialization.
Key words:β-cyclodextrin;inclusion;Yangganshudan Granules;volatile oil
基金项目:陕西省卫生厅科研基金(编号2010D61)
71西北药学杂志 2013年1月 第28卷 第1期