全 文 ：第 25卷 第 7期
2 0 0 7年 7月
中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 25 No. 7
Ju.l 2 0 0 7
中华中医药
1441
学刊
RP -HPLC法测定鬼箭羽中 3种活性成分的含量
高 媛,方宪康,朱丹妮
(中国药科大学中药复方研究室,江苏 南京 210038)
摘 要:目的: 建立同时测定鬼箭羽中降糖活性成分山柰酚、柚皮素及槲皮素含量测定的方法。方法: 采用反
相高效液相色谱法, 以 A lltim a C18 ( 4. 6mm @ 250mm, 5Lm )为色谱柱, 乙腈 - 0. 1%甲酸 ( 38: 62)为流动相, 检测波
长 258nm,流速 0. 8m L /m in, 柱温 30e 。结果: 山柰酚、柚皮素及槲皮素的线性范围分别为 0. 02064~ 0. 2580Lg ( r
= 0. 9996), 0. 05592~ 0. 699Lg ( r = 0. 9997), 0. 01656~ 0. 207Lg( r = 0. 9998) ;加样回收率分别为 100. 6% ( RSD
= 2. 5% ), 96. 4% ( RSD= 1. 1% ) , 101. 9% ( RSD = 1. 7% )。结论: 本法简便、准确、重现性好, 适用于鬼箭羽中 3
种活性成分的同时测定, 可用于鬼箭羽药材的质量控制。
关键词:鬼箭羽;山柰酚; 柚皮素;槲皮素; 高效液相
中图分类号: R284. 1 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2007) 07 -1441 - 03
RP -HPLC Determ ination of 3 Active Componentsin ofEuonymus alatus ( Thunb. ) S ieb
GAO Yuan, FANG X ian-kang, ZHU Dan-ni
( Dep artm en t of Ch ineseM ed icial Prescrip tion, Ch ina Pharmaceu tical Un iversi ty, Nan jing 210038, Jiangsu, Ch ina)
Abstrac t: Ob jective: To estab ilish an RP - HPLC me thod for the de term ination of kaem pfero ,l na ringen in and
querce tin inEuonym us a la tus ( Thunb. ) S ieb. M ethods : The samp les w ere separated on aA lltim aC18 column ( 4. 6mm
@ 250mm, 5Lm ) w ith the mobile pha se of ace tonitrile - 0. 1% fo rm ic ac id( 38: 62). The flow rate w as 0. 8 m L /m in,
and the de tec tion w ave leng th was set at 258 nm. R esu lts : The linea r ranges o f kaem pfero ,l naringenin and que rce tin
we re 0. 02064~ 0. 2580Lg( r = 0. 9996), 0. 05592~ 0. 699Lg ( r = 0. 9997), 0. 01656~ 0. 207Lg( r = 0. 9998) re spec-
tively. The average recoveries w ere 100. 6% ( RSD= 2. 5% ) , 96. 4% ( RSD= 1. 1% ), 101. 9% ( RSD= 1. 7% ) re spec-
tively. Conclusion: The m ethod is sim ple and qu ick w ith good reproduc ibility, it is su itable for the dete rm ina tion of the
conten ts of 3 active components, and can be used to contro l o fE uonymus a latus ( Thunb. ) Sieb.
Keywords: Euonym us a la tus ( Thunb. ) sieb. ; kaem pfero ;l naringenin; querce tin; RP -HPLC
收稿日期: 2007 - 02 - 17
作者简介:高媛 ( 1982 - ) ,女,陕西宝鸡人, 硕士研究生,主要从事
中药物质基础及质量控制研究。
鬼 箭 羽为 卫 矛科 植 物 卫矛 [ Euonym us alatus
( Thunb. ) S ieb. ]的翅状附属物或其嫩枝, 分布于我国北
部、中部、华东以及西南各地 [ 1]。其味酸甘涩, 性微寒, 能
通经活血,民间使用鬼箭羽治疗治疗糖尿病取得了较好的
效果 [2 ];在韩国和日本多用于抗肿瘤 [3]。本实验室发现鬼
箭羽的提取物能显著降低糖尿病模型小鼠 Kkay的血糖,增
加外周组织对胰岛素的敏感性。对鬼箭羽化学成分及作用
机制研究表明:鬼箭羽中山柰酚、柚皮素及槲皮素等成分能
激活过氧化物增殖剂受体 ( PPAR ) (研究论文另行发表 )。
过氧化物增殖剂受体 ( PPAR )为糖尿病一线治疗药物罗格
列酮,比格列酮的分子靶位。鬼箭羽提取物中的有效成分
具有过氧化物增殖剂受体 ( PPAR )的激动活性的这一研究
结果至少部分阐明了该植物的物质作用机制, 对深入挖掘
该植物的药用价值及药材的质量控制等方面也有积极的推
动作用。目前鬼箭羽药材常用于中药验方及成药中 [4 -7 ],
然而其质量控制方法尚未见报道, 其根本原因是其中的活
性化学成分尚未阐明。基于本实验室的化学成分及作用机
制的研究结果,本文首次建立了鬼箭羽 3种有效成分的含
量测定方法,并对不同收集地的鬼箭羽药材进行了含量测
定。从而为有效评价药材的内在质量,控制中药成药的生
产质量奠定基础。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪 W aters600E - 996 (美国 W ate rs公
司 ), 包括 W aters600E, 996PDA 检测器, M illennium32工作
站;色谱柱; 十万分之一天平 ( M ETTLER AE240 ); KQ -
100DE型医用数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公
司 ), 100LL微量进样器。
鬼箭羽药材由江苏、浙江、安徽等地收集,经本校生药
学余伯 阳教授 鉴定为 卫矛科 植物 Euonym us a la tus
( Thunb. ) Sieb. 的翅状附属物和其嫩枝。
对照品山柰酚、柚皮素及槲皮素均为自制, 经 M S、
1HNM R、12CNMR鉴定结构, HPLC测定纯度达 98%以上。
色谱纯乙腈 (M erck公司 )、色谱纯甲醇 (江苏汉邦科技
有限公司 ),纯净水 (乐百氏公司 ); 甲酸 ( AR, 南京化学试
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DOI：10.13193/j.archtcm.2007.07.131.gaoy.056
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中医药
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学刊
剂厂 ); 乙醇 ( AR,南京化学试剂一厂 )。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱: A lltim a C18 column ( 4. 6mm @
250mm, 5Lm ); 流动相:乙腈 - 0. 1%甲酸 ( 38: 62) (梯度洗
脱: 0 -10m in,乙腈 25%→ 38% ; 10 - 30m in,乙腈 38% ) ;检
测波长: 258nm; 柱温: 30e ; 流速: 0. 8 mL /m in。
2. 2 溶液的制备 ①对照品溶液的配制: 精密称取山柰
酚、柚皮素及槲皮素对照品适量于同一量瓶中,加甲醇分别
配制成山柰酚为 0. 0344m g /mL、柚皮素为 0. 0932m g /m L及
槲皮素为 0. 0276m g /mL的溶液, 作为对照品溶液。②供试
品溶液的制备:精密称取样品细粉 (过 80目筛 ) 0. 6g于具
塞三角烧瓶中,加入 25 m L 75%乙醇, 超声处理 30m in ,用
中速分析滤纸滤过, 滤渣再加 75%乙醇 25 mL超声处理 1
次,滤过, 合并滤液, 减压回收溶剂, 残渣加 75% 乙醇溶解
并转移至 5mL容量瓶中, 加 75% 乙醇至刻度, 摇匀, 用
0. 45Lm微孔滤膜滤过,作为供试品溶液 ,备用。
2. 3 标准曲线的制备 精密吸取上述对照品溶液 60、
100、220、450、550、750LL,分别置于 2mL量瓶中, 加 75%乙
醇至刻度,摇匀, 制成系列浓度的对照品溶液。用 0. 45Lm
微孔滤膜滤,取续滤液按上述色谱条件进行测定,记录峰面
积,分别以山柰酚、柚皮素及槲皮素样品浓度 ( Lg /mL)为横
坐标,以峰面积为纵坐标,得回归方程分别为: 山柰酚: Y =
62646X -15589, r = 0. 9996( n = 6); 柚皮素 : Y= 13457X
- 229. 6, r = 0. 9997( n = 6); 槲皮素: Y= 65200X - 14972,
r = 0. 9998 ( n = 6 )。结果表明, 山柰酚在 0. 02064 ~
0. 2580Lg范围内、柚皮素在 0. 05592~ 0. 699Lg范围内, 槲
皮素在 0. 01656~ 0. 207Lg范围内,对照品浓度和其峰面积
具有良好的线性关系。
2. 4 最低检测限及定量限 在选定的色谱条件下, 当信
噪比为 3时,对各组分的最低检测限进行测定, 结果表明,
山柰酚、柚皮素及槲皮素的最低检测限分别为 0. 2、0. 76、
0. 176ng。在选定的色谱条件下, 当信噪比为 10时, 对各组
分的定量限进行测定, 结果表明, 山柰酚、柚皮素及槲皮素
的定量限分别为 0. 6、3. 04、0. 528ng。
2. 5 精密度试验 精密吸取上述对照品贮备液 20LL ,重
复进样 6次, 考察仪器精密度, 结果表明仪器精密度良好,
其 RSD分别为 1. 62%、1. 42%、1. 65%。
2. 6 重复性试验 称取鬼箭羽细粉, 按照 /供试品溶液制
备0方法制备 6份, 以上述色谱条件下进行分析,计算山柰
酚、柚皮素及槲皮素的含量, 考察方法重复性, 结果表明方
法重复性良好,其 RSD分别为 1. 77%、0. 96%、2. 53%。
2. 7 稳定性试验 精密吸取新制备的供试品溶液 20LL ,
按上述色谱条件分别于 0、6、12、24、36、48h进样分析,记录
色谱峰面积,结果表明供试品溶液在 48h内稳定。
2. 8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品 9份,
分别精密加入高、中、低 3种浓度的对照品溶液,按照 /供试
品溶液制备0方法制备后, 在上述色谱条件下进行分析,计
算回收率,结果见表 1。
2. 9 样品测定 取鬼箭羽细粉, 按照 /供试品溶液制备0
方法制备,以上述色谱条件下进行分析, 记录色谱图 (见图
1)。计算山柰酚、柚皮素及槲皮素的含量, 测定结果见
表 2。
表 1 方法回收率的测定
编号
样品量
( g)
已知量
( Lg )
加入量
( Lg)
测得量
( Lg)
回收率
(% )
平均回收
率 (% )
RSD
(% )
1 0. 3103 4. 5149 3. 5 7. 9918 99. 34
2 0. 3127 4. 5499 3. 5 8. 1556 103. 0
3 0. 3190 4. 6415 3. 5 8. 0997 98. 81
4 0. 3213 4. 6750 4. 5 8. 9860 95. 80
山柰酚 5 0. 3247 4. 7245 5 9. 7108 99. 73 100. 6 2. 46
6 0. 3114 4. 5309 5 9. 6212 101. 8
7 0. 3180 4. 6270 6 10. 8115 103. 1
8 0. 3233 4. 7041 6 10. 8384 102. 2
9 0. 3274 4. 7637 6 10. 8408 101. 3
1 0. 3103 33. 3625 28. 88 61. 0941 96. 02
2 0. 3127 33. 6052 28. 88 61. 1398 95. 29
3 0. 3178 34. 1689 28. 88 61. 7818 95. 61
4 0. 3190 34. 2919 32. 68 65. 7656 96. 29
柚皮素 5 0. 3146 33. 8249 32. 68 65. 6252 97. 31 96. 45 1. 15
6 0. 3213 34. 5452 32. 68 66. 0005 96. 25
7 0. 3247 34. 9107 41. 80 74. 6982 95. 19
8 0. 3114 33. 4807 41. 80 74. 3794 97. 84
9 0. 3274 35. 2010 41. 80 76. 2635 98. 24
1 0. 3103 3. 4022 3. 08 6. 5462 102. 1
2 0. 2975 3. 2619 3. 08 6. 3587 100. 5
3 0. 3127 3. 4286 3. 08 6. 6416 104. 3
4 0. 3190 3. 4976 3. 96 7. 4934 100. 9
槲皮素 5 0. 3184 3. 4911 3. 96 7. 4123 99. 02 96. 45 1. 15
6 0. 3213 3. 5229 3. 96 7. 5631 102. 0
7 0. 3247 3. 5601 4. 40 8. 1478 104. 3
8 0. 3114 3. 4143 4. 40 7. 8538 100. 9
9 0. 3250 3. 5634 4. 40 8. 0956 103. 0
1.槲皮素; 2.柚皮素; 3.山柰酚
图 1 对照品 (上 )及鬼箭羽药材 (下 ) HPLC色谱图
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收稿日期: 2007 - 02 - 14
作者简介:王世勋 ( 1962 - ),男,河南南阳人,副教授,学士,主要从
事中医内科临床和基础理论的教学、科研工作。
表 2 来自不同收集地鬼箭羽中山柰酚
柚皮素及槲皮素的含量测定 ( Lg /g)
收集地 山柰酚 柚皮素 槲皮素
江苏 12. 097 69. 342 9. 140
江苏 12. 643 72. 850 16. 451
安徽 13. 384 95. 856 13. 015
安徽 18. 376 118. 347 16. 521
浙江 20. 693 106. 331 18. 906
3 讨 论
3. 1 提取溶剂的选择 分别比较了甲醇、95% 乙醇、70
%乙醇、75%乙醇及乙酸乙酯作为提取溶剂同法处理药材
粉末,含量测定结果表明,选用 75%乙醇时峰形最好, 且目
标物含量较高,故选用 75%乙醇作为该方法的提取溶剂。
3. 2 提取方法的选择 分别比较了超声提取、回流提取
及索氏提取 3种方法, 其中回流提取及索氏提取法提取效
率不高,超声提取效率高且操作简单,故选择超声提取法。
进而对超声提取的时间进行考察, 分别比较了超声 0. 5h;
超声 2次,每次 0. 5h; 超声 3次,每次 0. 5h; 结果发现,超声
2次, 每次 0. 5 h即可将其提取完全, 因而选用超声 2次,每
次 0. 5h。
3. 3 小结 山柰酚、柚皮素及槲皮素均为鬼箭羽中的活性
成分,在药材中含量较低, 进行梯度洗脱时基线有所漂移。
由 5个收集地样品的测定结果可看出, 各收集地的 3
个活性成分各有差异,浙江及安徽样品含量较高, 本法简便
易行,可用于评价鬼箭羽药材的质量以及提取工艺条件的
控制。
参考文献
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中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
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未
病
新
悟
中华中医药
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学刊
《黄帝内经》中的亚健康思想
王世勋
(张仲景国医学院,河南 南阳 473061)
摘 要:《黄帝内经》是最早提出亚健康理论的医学著作。其 /治未病 0的思想即是现代医学中的亚健康理
论。文章全面系统的总结了《黄帝内经》中亚健康的内涵、原因、表现和防治。为后人研究亚健康理论奠定了坚
实的理论基础。
关键词:黄帝内经;亚健康
中图分类号: R221 文献标识码: A 文章编号: 1673 -7717( 2007) 07 -1443 - 02
The Theory of Sub-health in the Yellow Emperor s C la ssic o f In terna lM ed icine
WANG Sh i-xun
( Zhang Zhong-jing Co llege of T raditional Ch ineseM edicine, Nanyang 473061, H enan, Ch ina)
Abstrac:t the Y ellow Empero r sC lass ic o f Interna lM edicine is the ea rlistm edica lw orks in thew orld which pu ts for-
wa rd the theory o f sub - hea lth. The idea of trea ting be fore illness in it embodies nowaday s sub -hea lth theo ry. Th is pa-
pe r smmarizes com prehensive ly and system atica lly about the connota tion, causes, appearance s and p reven tion and cure
which is the founda tion fo r o f fsprings research on sub - hea lth.
Keywords: the Y ellow Em peror s C lassic o f Interna lM edic ine; sub - health
亚健康是现代医学在 20世纪末提出的一个新的医学
概念。是指在人群中,除了无任何生理、心理疾病和有明显
疾病者外,还大量存在着一种介于二者之间的状态者,即亚
健康人群。表现为机体活力降低、反应能力减退、适应能力
下降等生活状态。处于健康与疾病之间的不稳定中间状
态。亚健康容易变化并具有双向性, 若采取适当的养生调
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