全 文 :西北农业学报 2013,22(1):168-173
Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica
不同胡卢巴种质资源染色体核型的遗传多样性
*?
刘 萍,张晓岗
(宁夏大学 农学院,银川 750021)
摘 要 以9份胡卢巴种质资源为材料,采用染色体常规压片法,分析胡卢巴根尖细胞染色体的核型,探讨其
核型公式和核型分类上的变化。结果表明,9份胡卢巴种质资源的染色体数目均为2n=16;染色体相对长度
组成(IRL)均为2n=16=8M1+8M2;表现出3种核型公式,分别为2n=16=14sm+2sm(SAT)、2n=16
=4m+10sm+2sm(SAT)和2n=16=6m+8sm+2sm(SAT),且以第1种最为常见;9份胡卢巴具有2
种核型类型,核型不对称系数为64.12%~68.13%。来源不同的胡卢巴种质资源在核型上存在不同程度的
多样性。
关键词 胡卢巴;种质资源;染色体核型;遗传多样性
中图分类号 Q943 文献标志码 A 文章编号 1004-1389(2013)01-0168-06
Genetic Diversity on Karyotypes of Different Germplasm
Resources in Fenugreek(Trigonella foenum-graecum)
LIU Ping and ZHANG Xiaogang
(Colege of Agronomy,Ningxia University,Yinchuan 750021,China)
Abstract In this paper,the chromosome numbers and karyotypes in Root-tip Cels of 9Fenugreek
(Trigonella foenum-graecum L.)germplasm resources had been studied by common(slice making)
method,and the variation of the karyotypes formulae and Stebbins’s types had been also discussed.
The results showed that the chromosome number of al 9Fenugreek is 2n=2x=16and the entire in-
dex of relative length of chromosome(IRL)is 2n=2x=16=8M1+8M2.Three kinds of karyo-
types formula are found in 9Fenugreek,namely 2n=16=14sm+2sm(SAT)(most common),2n
=16=4m+10sm+2sm (SAT)and 2n=16=6m+8sm+2sm (SAT).Nine Fenugreek germ-
plasm resources include 2kinds of Stebbins’s types and the asymmetrical karyotypes parameter
(AsK)is within the range of 64.12%-68.13%.The diversity of karyotypes in the 9fenugreek germ-
plasm resources is helpful to introduction and cultivation of Fenugreek.
Key words Fenugreek(Trigonella foenum-graecum L.);Germplasm resources;Chromosome karyo-
type;Genetic diversity
胡卢巴(Trigonella foenum-graecum L.)又
名芸香草、香苜蓿、芦巴子、香豆子,为豆科蝶形花
亚科胡卢巴属一年生草本植物[1],原产西亚及欧
洲东南部,以印度、法国、黎巴嫩、摩洛哥等地产量
最大,中国多数省区均有栽培。胡卢巴在宁夏栽
培的历史久远,是宁夏道地中药材之一。胡卢巴
以种子入药,具有补肾阳、祛寒冷、止痛功效[2]。
其籽粒中的薯蓣皂甙元是合成激素类药物的理想
甾体结构化合物,是治疗常见病不可缺少的药物,
近年研究发现,胡卢巴中4-羟基异亮氨酸对Ⅱ型
糖尿病有治疗作用[3-5]。胡卢巴胶是石油工业中
压裂液的主要成分,也是食品行业中的增稠剂和
*收稿日期:2012-04-22 修回日期:2012-07-25
基金项目:国家自然科学基金(30660017)。
第一作者:刘 萍,女,教授,主要从事植物遗传学教学和研究工作。E-mial:liupingmy@yahoo.com.cn
改良剂,胡卢巴植株还是一种新型香料[6]。随着
对胡卢巴需求的日益增加,对胡卢巴的化学成分、
药理作用、栽培技术、食品应用等也有较详细的报
道[7-9],近年来刘萍等[10-11]、王掌军等[12]对胡卢巴
的生物学特性、等位酶和RAPD的遗传多样性进
行了较系统的研究。
染色体是生命遗传的物质基础,染色体的形
态、数目等是生物体最稳定的细胞学特征之一,染
色体的核型、核型类型等是表明物种系统演化位
置以及和相近种亲缘关系的重要依据。张荣
等[13]报道,胡卢巴的核型为2n=2x=16=2M
+2m+2m(SAT)+10sm,属2B型,随体在第
一对染色体的长臂末端;黄永红等[14]报道,胡卢
巴的核型为2n=2x=16=6m+2m(2SAT)
+4sm+4st;祁如虎[15]报道,青海湟中胡卢巴
2n=2x=16=4M+10sm+2st,属3A型,但
未见随体;Martin等[16]对土耳其胡卢巴属10个
组23个种的核型进行分析,认为胡卢巴的核型为
2n=2x=16=4m+12sm。虽有多位学者对胡
卢巴的核型进行了研究,但对中国不同地区胡卢
巴种质资源及国外引种胡卢巴的染色体核型及其
多样性研究却未见报道。本试验通过比较不同来
源胡卢巴种质资源的染色体核型,以期从染色体
水平上了解该种质资源的遗传多样性。
1 材料与方法
1.1 材 料
供试材料为来自9个不同地区的胡卢巴种质
资源(以下简称种源),其中国外种源3份,国内种
源6份,其材料编号及来源见表1,国外种源由宁
夏大学许强教授惠赠,国内各种源由笔者收集。
于2009、2010年种植于宁夏大学实验农场,经宁
夏大学植物分类教研室有关专家鉴定,均为胡卢
巴 (Trigonella foenum-graecumL.)。凭证标本
存于宁夏大学农学院标本室。
1.2 方 法
1.2.1 细胞学制片 采用植物染色体常规压片
法 [17]。种子先用水浸泡24h,25℃恒温保湿培
养待胚根生长至1~2cm时剪根,用0℃冰水混
合物处理24h后用卡氏固定液[V(95%酒精)∶
V(冰醋酸)=3∶1]固定24h以上,蒸馏水冲洗
并用1mol·L-1盐酸解离5~10min。φ=1%龙
胆紫染液染色后压片,Olympus BH2 显微镜
镜检。
1.2.2 染色体核型分析 每个种源均在100倍
油镜下仔细观察50个左右可准确计数染色体的
细胞,进行染色体计数,对各条染色体处于同一平
面、分散均匀、数目完整的细胞作显微摄影,将镜
台测微尺在同等条件下拍照。每个种源分别量取
5个以上细胞的染色体长臂和短臂值,根据所得
平均值进行胡卢巴同源染色体配对,并按染色体
的长度从长到短顺序编号,有随体的染色体排在
最后,随体不计入染色体总长。染色体相对长度、
臂比按李懋学等[18]方法进行计算,染色体类型按
Levan等[19]方法划分,核型分类按Stebbins[20]的
标准确定,按 Arano[21]的核型不对称系数(AsK
=长臂总长/全组染色体总长)确定染色体核型的
不对称程度。染色体相对长度组成(IRL)参照文
献[22]的方法确定。
2 结果与分析
2.1 核型分析
从胡卢巴根尖细胞的大量制片中发现,不同
种源染色体数目均为2n=16,有一对具随体的
染色体,没有非整倍性变异和多倍体现象,也未观
察到B染色体。有丝分裂中期染色体形态、核型
和核型模式分别见图1、图2和图3,各种源染色
体核型分析见表2。
2.2 核型变异
2.2.1 核型组成 由表3可见,来源不同的9个
种源虽为同一物种,但由于长期人工选择和环境
的协同作用,在染色体核型上表现出多样性,共出
现3种核型。其中6个国内种源中有5个具有相
同的核型;3个国外种源的核型各不相同,来自印
度某地的种源7较为特殊,与所分析的其他8
个种源的核型均不一样,为2n=16=6m+8sm+
表1 供试胡卢巴种质资源编号及来源
Table 1 The plant material used for karyotypes of T.foenum-graecumand their provenance
编号
No.
来 源
Provenance
编号
No.
来 源
Provenance
编号
No.
来 源
Provenance
1 宁夏青铜峡 Qingtongxia Ningxia 4 云南永仁 Yongren Yunnan 7 印度2 India 2
2 宁夏陶乐 Taole Ningxia 5 甘肃张掖Zhangye Gansu 8 埃及1 Egypt 1
3 青海海西 Haixi Qinghai 6 甘肃兰州Lanzhou Gansu 9 摩洛哥 Morocco
·961·1期 刘 萍等:不同胡卢巴种质资源染色体核型的遗传多样性
编号见表1,图2、图3同 The serial number of pictures see table 1,the same as Fig.2and Fig.3
图1 9个胡卢巴种质资源根尖细胞有丝分裂中期
Fig.1 Mitotic metaphases of 9germplasm resources in T.foenum-graecum
图2 9个胡卢巴种质资源的核型
Fig.2 Karyotypes of 9germplasm resources in T.foenum-graecum
2sm(SAT),来自埃及某地的种源8与国内甘肃
张掖的种源5核型相同,为2n=16=4m+
10sm+2sm (SAT),而来自摩洛哥的种源9与
国内大多数种源的核型一致,为2n=16=14sm
+2sm(SAT)。
2.2.2 染色体相对长度组成 由表3可知,9个
胡卢巴种质资源的染色体相对长度组成均为2n
=16=8M1+8M2,即都是由中长和中短染色体
组成,属较原始的核型类型,9个供试种源对应的
各对染色体相对长度间不存在本质的差异。
2.2.3 核型不对称系数(AsK) 9个种源的
AsK为64.12%~68.13%,平均66.74%,以种
源7和种源8的AsK最低。表明,这2个种源的
染色体变异程度相对较低。
2.2.4 核型类型 按Stebbins的标准,9个种源
分属于2种核型类型,种源3、4、6为3A型,不对
称性相对较高,属于较特化的类型;其余6个种源
为2A型,不对称性程度相对较低,属于较原始的
类型。
·071· 西 北 农 业 学 报 22卷
图3 9个胡卢巴种质资源的核型模式
Fig.3 Karyotypes models of 9germplasm resources in T.foenum-graecum
3 讨 论
9个来源不同的胡卢巴表现出一定的遗传多
样性,共有3种核型公式,2种核型类型,与以前
的研究结果不尽相同[13-16],这一方面可能由于研
究材料来源不同所致,另一方面引种所带来的环
境因素改变等也可能导致染色体结构发生变化。
宁夏2个种源(种源1,种源2)核型分析的各
主要参数相近,青海海西(种源3)、云南永仁(种
源4)和甘肃兰州(种源6)3个种源核型分析的各
·171·1期 刘 萍等:不同胡卢巴种质资源染色体核型的遗传多样性
表2 9个胡卢巴种质资源的染色体相对长度、臂比和类型
Table 2 Relative length,arm ratio and classification of the chromosomes of 9germplasm resources in T.foenum-graecum
宁夏青铜峡 Qingtongxia Ningxia
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
宁夏陶乐 Taole Ningxia
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
青海海西 Haixi Qinghai
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
1 4.88 9.52 14.40 1.95 sm 1 5.49 9.64 15.13 1.75 sm 1 4.40 10.59 14.99 2.41 sm
2 4.76 9.17 13.93 1.93 sm 2 4.35 9.64 13.99 2.21 sm 2 4.70 9.59 14.29 2.04 sm
3 4.05 9.40 13.45 2.32 sm 3 4.46 8.50 12.95 1.91 sm 3 4.30 9.09 13.39 2.12 sm
4 3.45 9.17 12.62 2.66 sm 4 3.94 8.91 12.85 2.26 sm 4 4.20 8.59 12.79 2.05 sm
5 4.05 7.98 12.02 1.97 sm 5 3.52 7.77 11.30 2.21 sm 5 3.70 8.19 11.89 2.22 sm
6 3.93 7.50 11.43 1.91 sm 6 4.35 7.77 12.12 1.79 sm 6 3.70 7.59 11.29 2.05 sm
7 3.93 6.79 10.71 1.73 sm 7 3.83 7.25 11.09 1.89 sm 7 3.60 6.59 10.19 1.83 sm
8 3.33 8.10 11.43 2.43 sm * 8 3.83 6.74 10.57 1.76 sm * 8 3.30 7.89 11.19 2.39 sm *
云南永仁 Yongren Yunnan
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
甘肃张掖Zhangye Gansu
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
甘肃兰州 Lanzhou Gansu
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
1 4.78 9.92 14.70 2.08 sm 1 5.22 9.70 14.93 1.86 sm 1 5.26 10.76 16.02 2.04 sm
2 4.18 9.44 13.62 2.26 sm 2 4.48 9.33 13.81 2.08 sm 2 4.44 9.59 14.04 2.16 sm
3 4.78 8.36 13.14 1.75 sm 3 3.98 9.08 13.06 2.28 sm 3 4.44 9.12 13.57 2.05 sm
4 4.18 8.60 12.78 2.06 sm 4 4.23 8.46 12.69 2.00 sm 4 4.09 8.54 12.63 2.09 sm
5 3.70 8.48 12.19 2.29 sm 5 4.48 7.59 12.06 1.69 m 5 3.51 8.30 11.81 2.37 sm
6 4.06 7.53 11.59 1.85 sm 6 4.35 6.97 11.32 1.60 m 6 4.09 7.13 11.23 1.74 sm
7 3.82 6.81 10.63 1.78 sm 7 3.61 6.84 10.45 1.90 sm 7 3.51 6.78 10.29 1.93 sm
8 2.99 8.36 11.35 2.80 sm * 8 3.48 8.33 11.82 2.39 sm * 8 3.16 7.37 10.53 2.33 sm *
印 度2 India 2
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
埃 及1 Egypt 1
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
摩洛哥 Morocco
编号
No.
相对长度/% Relative length
短臂
Short
长臂
Long
全长
Length
臂比
Arm
ratio
类型
Type
1 5.84 9.06 14.90 1.55 m 1 5.76 8.92 14.67 1.55 m 1 5.36 9.57 14.93 1.79 sm
2 4.89 9.30 14.18 1.90 sm 2 4.97 9.14 14.11 1.84 sm 2 4.31 9.76 14.07 2.27 sm
3 4.65 8.70 13.35 1.87 sm 3 4.40 8.92 13.32 2.03 sm 3 3.83 9.67 13.49 2.53 sm
4 4.29 8.58 12.87 2.00 sm 4 4.06 8.58 12.64 2.11 sm 4 4.02 8.80 12.82 2.19 sm
5 4.17 7.75 11.92 1.86 sm 5 3.84 8.47 12.30 2.21 sm 5 4.02 8.33 12.34 2.07 sm
6 4.29 7.03 11.32 1.64 m 6 4.06 7.22 11.29 1.78 sm 6 3.83 7.27 11.10 1.90 sm
7 4.17 5.72 9.89 1.37 m 7 3.95 6.55 10.50 1.66 m 7 3.44 6.70 10.14 1.94 sm
8 3.58 7.99 11.56 2.23 sm * 8 3.16 8.01 11.17 2.54 sm * 8 3.83 7.27 11.10 1.90 sm *
注:*表示具有随体的染色体,随体长度未计入臂长
Note:* means the chromosomes that had satelites and whose satelite lengths were not included
表3 9个胡卢巴种质资源的核型
Table 3 The chromosome karyotypes of 9germplasm resources in T.foenum-graecum
编 号
No.
核型公式
Karyotype formula
平均臂比
Arm ratio
相对长度系数
Index of
relative
length
最长染色体/
最短染色体
Longest arm/
Shortest arm
臂比>2
的比率/%
Percentage of
chromosomes
with arm
ratio>2
核型类型
Stebbins’s
types
核型不对
称系数/%
Asymmetrical
karyotypes
coefficient
1 K(2n)=2x=16=14sm+2sm(SAT) 2.11 2n=2x=16=8M1+8M2 1.34 37.50 2A 67.62
2 K(2n)=2x=16=14sm+2sm(SAT) 1.97 2n=2x=16=8M1+8M2 1.43 37.50 2A 66.22
3 K(2n)=2x=16=14sm+2sm(SAT) 2.14 2n=2x=16=8M1+8M2 1.47 87.50 3A 68.13
4 K(2n)=2x=16=14sm+2sm(SAT) 2.11 2n=2x=16=8M1+8M2 1.38 62.50 3A 67.50
5 K(2n)=2x=16=4m+10sm+2sm(SAT) 1.98 2n=2x=16=8M1+8M2 1.43 50.00 2A 66.29
6 K(2n)=2x=16=14sm+2sm(SAT) 2.09 2n=2x=16=8M1+8M2 1.56 75.00 3A 67.60
7 K(2n)=2x=16=6m+8sm+2sm(SAT) 1.80 2n=2x=16=8M1+8M2 1.51 25.00 2A 64.12
8 K(2n)=2x=16=4m+10sm+2sm(SAT) 1.96 2n=2x=16=8M1+8M2 1.40 50.00 2A 65.80
9 K(2n)=2x=16=14sm+2sm(SAT) 2.07 2n=2x=16=8M1+8M2 1.47 50.00 2A 67.37
主要参数也较相近,表明,种源1和种源2,种源
3、4、6分别在染色体水平上的变异较小,该结果
与刘萍等[10-11]、王掌军等[12]对胡卢巴的生物学特
性研究、等位酶分析以及RAPD分析的结果基本
一致,由此推断,种源1和种源2是由某一种源向
宁夏的2个地区引种而成,种源3、种源4和种源
6可能是由另一种源分别引种到3个不同省份。
种源9(摩洛哥)的核型与除种源5(甘肃张掖)外
的其他5个国内种源的核型相同,但核型类型与
2个宁夏种源一样,属2A型,表明,摩洛哥种源与
·271· 西 北 农 业 学 报 22卷
宁夏种源在系统演化上亲缘关系更近,这为摩洛
哥种源向宁夏引种提供了依据。种源7的起源应
该与其他种源完全不同。本研究结果既反映胡卢
巴9个种源间有密切的亲缘关系,又表明它们间
存在一定差异。胡卢巴作为一种常用的传统中药
材以及近几十年发展起来的新型香料,引种广泛
加之频繁而强有力的人工选择,使其具有极强的
生态适应性,因此,在核型上也产生了一定的多
样性。
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·371·1期 刘 萍等:不同胡卢巴种质资源染色体核型的遗传多样性