全 文 ：象耳豆根结线虫（Meloidogyne enterolobii）是中
国热带、 亚热带地区作物上广泛发生的一种重要的
植物病原线虫， 也是世界上公认的危害最大的根结
线虫种类之一 [1-2]。 该线虫最早在海南儋州象耳豆
树上被发现， 随后在欧洲、 美洲和非洲等报道发
生， 造成的产量损失可达 65％以上 [3-5]。 近年来，
象耳豆根结线虫在海南岛迅速蔓延扩散， 目前已在
海南全岛发生危害， 受害作物包括瓜果蔬菜、 南
热带作物学报 2016， 37（10）： 1980-1985
Chinese Journal of Tropical Crops
收稿日期 2016-05-26 修回日期 2016-08-03
基金项目 973计划前期研究专项（No. 2014CB160307）； 国家自然科学基金项目（No. 31360432）； 海南省植物病虫害防控重点实验室开放课题。
作者简介 魏丽莎子（1992 年—）， 女， 硕士研究生； 研究方向： 植物线虫学。 *通讯作者（Corresponding author）： 陈绵才（CHEN Miancai），
E-mail： miancaichen@163.com； 赵志祥（ZHAO Zhixiang）， E-mail： zhaozhixiang0207@126.com。
%
象耳豆根结线虫Me-mapk1
基因的克隆及 RNAi分析
魏丽莎子1，2， 龙海波 3， 陈绵才 2*， 赵志祥 2*
1 海南大学环境与植物保护学院， 海南海口 570228
2 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室 海南海口 571100
3 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所， 海南海口 571101
摘 要 促分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase， MAPK）是线虫体内信号转导的重要组分， 在
生长发育过程中具有重要作用。 本研究从象耳豆根结线虫中克隆了 1 个促分裂原活化蛋白激酶基因 Me-mapk1
cDNA 序列， 该序列全长 1 369 bp， 包含 1 个 1 185 bp 的完整开放阅读框， 推导编码 394 个氨基酸， 蛋白质分子
量为 45. 39 ku。 同源性搜索比对结果发现， 该基因编码的蛋白序列与南方根结线虫 MI-MAPK1 具有 99％的一致
性。 通过构建原核表达载体 pET-32a-MAPK， 在 IPTG的诱导下得到 70 ku左右的特异融合蛋白（包括大小约 26 ku
的标签序列）。 利用 RNAi 技术对象耳豆根结线虫二龄幼虫 Me-mapk1 基因进行沉默， 线虫诱导番茄根结形成的
数量显著减少， 推测 Me-mapk1 基因的下调表达有可能影响象耳豆根结线虫二龄幼虫（J2）的生长发育。
关键词 象耳豆根结线虫； 促分裂原活化蛋白激酶； 基因克隆； 原核表达； RNA 干扰
中图分类号 R532.1 文献标识码 A
Cloning and RNAi of Me-mapk1 Gene from the
Root-knot Nematode Meloidogyne enterolobii
WEI Lishazi1,2, LONG Haibo3, CHEN Miancai2*, ZHAO Zhixiang2*
1 Environment and Plant Protection College, Hainan University, Haikou, Hainan 570228, China
2 Institute of Plant Protection, Hainan Academy of Agricultural Sciences/Hainan Key
Laboratory for Control of Plant Diseases and Insect Pests, Haikou, Hainan 571100, China
3 Environment and Plant Protection College, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Haikou, Hainan 571101, China
Abstract Mitogen-activated protein kinases （MAPKs） are important components in signal transduction pathway
involving in the process of nematode growth and development. In this study, a MAPK gene （Me-mapk1） from the
root-knot nematode Meloidogyne enterolobii was cloned. The Me-mapk1 cDNA sequence consisted of a 1 185 bp
open reading frame （ORF） encoding 394 amino acid residues that were franked by a 27 bp 5′-untranslated region
（UTR）and a 157 bp 3′-UTR. The protein molecular mass was 45.39 ku. Homology analysis showed that the
identity was 99% between Me-mapk1 deduced protein ME-MAPK1 and MI-MAPK1 protein of M. incognita. The
recombinant protein ME-MAPK1 with a molecular mass of 70 ku which included tag protein sequence of 26 ku
was produced by prokaryotic expression. The number of nematode -induced galls on tomato was significantly
reduced after knocking-down Me-mapk1 gene by RNA interference, indicating an important role of the gene to
nematode development.
Key words Meloidogyne enterolobii; Mitogen activated protein kinase; Gene cloning; Prokaryotic expression; RNAi
doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2016.10.022
第 10 期 魏丽莎子等： 象耳豆根结线虫 Me-mapk1基因的克隆及 RNAi分析
引物名称 引物序列（5′-3′）
GeneRacer5′primer CGACTGGAGCACGAGGACACTGA
GeneRacer5′ nested primer GGACACTGACATGGACTGAAGGAGTA
M-S1 CAATCAGCCCCCACAACAGCAGTAG
M-S2 GCTTACCTCCTATCTCTACAACCGA
GeneRacer3′primer TACCGTCGTTCCACTAGTGATTT
GeneRacer3′ nested primer CGCGGATCCTCCACTAGTGATTTCACTATAGG
M-A1 CTTCCCAGGAAAGAGTGGTCGATTATT
M-A2 AATGAATATATTTGAGGCCGCGTAG
M1-BamHI C GGATCC ATGGCTGCAGCCAACACTGTGCAG
M1-NotI GCGGCCGC A CTTTGTCTCGGTCGTTGTCTGCAAT
M-I1 taatacgactcactatagggagaATTTGTGATTTTGGACTTGC
M-I2 taatacgactcactatagggagaCATTGTTGTTTGACCTTCGG
M-R1 ATTCTTTCTCGCTTCAAACACG
M-R2 CGATTATTCAACATTTCGGCAA
ActinF1 GCGGATATTTAGTTAATTGGGATAC
ActinR1 TTGAATTTCTTTAGGGAATTTAGAT
表 1 本研究所用的 PCR 引物
Table 1 PCR primers used in this study
药、 热带果树等多种农作物， 并造成重大经济损失[6]。
越来越多的调查结果表明， 象耳豆根结线虫正逐渐
取代南方根结线虫（M. incognita）， 成为海南热带
水果和反季节蔬菜上的优势根结线虫种类[6-7]。
促分裂原活化蛋白激酶 （mitogen -activated
protein kinases, MAPK）是一种真核生物体内普遍
存在且高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。 MAPK
与促分裂原活化蛋白激酶激酶 （mitogen-activated
protein kinase kinase, MAPKK）、 促分裂原活化蛋
白激酶激酶激酶 （mitogen-activated protein kinase
kinase kinase， MAPKKK）组成 MAPK 级联信号通
路， 接受外界信号刺激并将信号转导至细胞内， 调
控基因表达、 细胞增殖与分化、 细胞生存与凋亡等
多种生命活动[8-9]。 MAPK 还被证实与多种植物病原
物包括真菌、 细菌及类病毒的致病性密切相关[10-12]。
迄今， 有国内外研究人员已从真菌、 哺乳动物和植
物中分离克隆了多种 MAPK 基因， 如在拟南芥基
因组中鉴定出 20 余种 MAPK 基因 [13-14]。 目前植物
病原线虫中关于 MAPK 的研究较少， 仅在南方根
结线虫、 甘蓝根结线虫和松材线虫中克隆了少量地
MAPK基因， 其具体功能和作用机制均未开展深入
研究。 本研究从象耳豆根结线虫中克隆并鉴定出一
个新的促分裂原活化蛋白激酶基因 Me-mapk1。 同
时， 利用 RANi 技术对 Me-mapk1 进行诱导沉默，
分析 MAPK 在象耳豆根结线虫生长发育过程中的
功能地位， 旨在为防治该线虫提供新的理论依据和
防治策略。
1 材料与方法
1.1 材料
象耳豆根结线虫 Meloidogyne enterolobii 由本
实验室培养， 在室内用改进的贝尔曼漏斗法分离得
到。 培养和接种象耳豆根结线虫的番茄品种均为
“特级大明星”。
1.2 方法
1.2.1 第一链 cDNA 的合成 采用 Trizol 法提取
M. enterolobii 总 RNA， 其 RNA 沉淀用 30 μL 无
RNase 水溶解。 取 5 μL 总 RNA 为模板， 以 oligo
dT为引物， 用反转录酶（TaKaRa PrimeScriptTMⅡ1st
Strand cDNA Synthesis Kit）进行反转录 ， 合成
cDNA第 1链。
1.2.2 Me-mapk1 cDNA 末端的序列扩增 以 M.
enterolobii 总 RNA 为 模 板 ， 利 用 GeneRacerTM
RACE 试剂盒（Invitrogen）反转录合成获得带 3′接
头和 5′接头的 cDNA 第一链（RACE 模板）。 同时，
根据实验室已有的象耳豆根结线虫 cDNA 文库序列
信息， 设计 Me-mapk1基因末端扩增特异引物， 结
合 RACE 接头引物， 采用巢式 PCR 分别扩增基因
的 5′及 3′末端序列。 其中， 5′末端序列扩增第 1 轮
所用引物为 GeneRacer5′ primer 和 M-S1（表 1）， 第
2 轮 PCR 以第 1 轮 PCR 产物为模板， 所用引物为
GeneRacer5′ nested primer 和 M-S2（表 1）； 3′末端
序列的扩增第 1 轮 PCR 所用引物为 GeneRacer3′
primer 和 M-A1（表 1）， 第 2 轮 PCR 所用引物为
GeneRacer3′ nested primer 和 M-A2 （表 1） 。 PCR
1981- -
第 37 卷热 带 作 物 学 报
扩增产物经电泳检测、 纯化、 连接、 转化并送诺赛
基因测序。
1.2.3 Me-mapk1 原核表达 以第 1 链 cDNA 为
模板， 用引物 M1-Bam HI 和 M1-Not I 扩增 Me-
mapk1基因的开放阅读框区域。 PCR 产物经 TA 克
隆， 挑取单克隆， 摇菌并进行 PCR 鉴定， 将阳性
克隆送诺赛公司测序， 并进行序列分析。 同时， 提
取阳性克隆和 pET-32a 质粒， 分别经 Bam HI 和
Not I双酶切后， 连接， 构建表达重组子 pET-32a-
MAPK。 转化到感受态细胞 BL21（DE3）中， 涂板培
养。 挑取转化子接种于含氨苄青霉素的培养液中振
荡培养至菌液 OD 值约为 0.6 时， 加入 100 mmol/L
IPTG使终浓度为 0.8 mmol/L， 37℃振荡培养 4 h 后
离心收集菌体， 向收集的菌体中加入 50 μL 蛋白上
样缓冲液， 沸水加热 5 min， 将样品取出冷却至室
温， 离心后取 8 μL 上清于 12％分离胶和 5％浓缩
胶中进行 SDS-PAGE 电泳分析。 以 pET-32a 空载
体诱导表达物作为对照。
1.2.4 Me-mapk1 dsRNA 合成 设计在 5′端引用
T7 启动子序列的 dsRNA 特异引物 M-I1 和 M-I2
（表 1） ， 以第一链 cDNA 为模板 PCR 扩增获得
Me-mapk1特异靶标序列。 将获得的 PCR产物纯化
后， 随后以该片段为模板结合反转录酶合成 Me-
mapk1 特异的 dsRNA 序列。 反应体系： DNA 模板
1μg， 10×T7ReactionBuffer 2μL， ATPSolution2 μL，
CTP Solution 2 μL， GTP Solution 2 μL， UTP Solution
2μL， T7EnzymeMix2μL， 补充Nuclease-free Water
至总体积 20 μL。 具体反应步骤参照 MEGA a script
RNAi kit （Life Technologies）说明书进行 。 获得的
dsRNA 产物用微量核酸蛋白检测仪 （NanoUV -
3000）检测浓度和质量。
1.2.5 Me-mapk1 RNAi效应分析 RNAi 采用活体
外 dsRNA 浸泡二龄幼虫法进行， 略有修改 [15]。 浸
泡体系为 ： 2 mg/mL dsRNA， 0.5％间苯二酚 ，
0.05％明胶， 3 mmol/L 亚精胺， 浸泡溶液用 1xPBS
缓冲液调节 。 对照处理分 2 组 ， 一组为不含
dsRNA 的 1xPBS 缓冲液（含 0.05％明胶， 0.5％间
苯二酚， 3 mmol/L 亚精胺）， 一组为清水处理。 每
处理所用新鲜二龄幼虫数量约 20 000 条， 浸泡时
间为 24 h， 温度为 22 ℃， 浸泡过程中保持轻微振
动。 浸泡结束后用灭菌水反复冲洗虫体， 在清水中
恢复 2 h后， 每处理取约 10 000条二龄幼虫提取总
RNA。 分别取等量浓度 RNA（200 ng/μL）反转录合
成 cDNA， RT-PCR 分析沉默效果 ， 所用引物为
M-R1 和 M-R2（表 1）。 反应体系： cDNA 1 μL，
2× pfu PCR MasterMix（TIANGEN）10 μL， 上下游引
物各 1 μL， 补充灭菌双蒸水至总体积 20 μL。 同时
选择内参基因 β-actin 为扩增对照， 引物为 Actin-
F1 和 Actin-R1（表 1）， 反应体系不变。 将 dsRNA
浸泡处理（含对照）的二龄幼虫接种至生长 30 d 番
茄苗（cv. 特级大明星）根部， 每个处理接种 300 条
线虫， 重复 8 次。 接种 30 d 后收集番茄根系， 统
计根结数。 病情级别和病情指数依据《中华人民共
和国国家标准农药田间药效实验准则（二）》中所列
方法和公式计算， 具体如下：
病情指数＝∑ （病级数值×相应级别的植株数）
调查总株数×最高病级 9 ×100
2 结果与分析
2.1 Me-mapk1 cDNA克隆与序列分析
用 RACE 技术分别克隆获得了象耳豆根结线
虫 Me-mapk1 cDNA的 5′末端和 3′末端序列， 其长
度分别为 960、 505 bp， 拼接后全长序列为 1 369 bp。
Me-mapk1 cDNA 全长序列包含长度为 27 bp 的 5′
非编码区、 157 bp 的 3′非编码区（包括 24 个碱基
polyA 尾巴）和 1 个 1 185 bp 的完整开放阅读框，
推导编码 1 个含 394 aa 的蛋白序列 。 Me-mapk1
cDNA 在 NCBI GenBank 上提交注册登录号为
KT380882。
象耳豆根结线虫促分裂原活化蛋白激酶 ME-
MAPK1 蛋白序列由 394 个氨基酸残基组成， 预测
分子量大小为 45.39 ku， 等电点 pI=6.39。 BlastP 同
源性搜索及多序列比对显示 ME-MAPK1 与南方根
结线虫 M. incognita（ABI96897）促分裂原活化蛋白
激酶 MI-MPK1 有 99％的一致性， 与甘蓝根结线虫
M. artiellia（CAD56894）、 松材线虫Bursaphelenchus
xylophilus（ACT46908）及马来丝线虫 Brugia malayi
（XP_001900759） 等其它线虫促分裂原活化蛋白激
酶具有 86％~93％的一致性（图 1）。 蛋白保守结构
域分析结果表明， ME-MAPK1 第 43~331 位氨基酸
包含 11 个保守的丝氨酸 /苏氨酸蛋白激酶亚结构
域， 并且在第 VII和第 VIII亚结构域间具有胞外信
号调节激酶保守的 TEY基序序列（图 1）。
2.2 ME-MAPK1 重组蛋白诱导表达
将构建好的重组表达载体质粒 pET -32a -
MAPK 转入大肠杆菌表达菌株 BL21（DE3）进行原
核表达。 SDS-PAGE 电泳检测结果表明， 在 IPTG
的诱导下 ME-MAPK1 融合蛋白成功诱导表达， 获
得大小约为 70 ku 的特异条带， 与预测大小相符
（包括大小约 26 ku 的标签序列）； 而未经 IPTG 诱
1982- -
第 10 期 魏丽莎子等： 象耳豆根结线虫 Me-mapk1基因的克隆及 RNAi分析
M 1 2BP
500
M： DL 2 000 Marker； 1-2： Me-mapk1 dsRNA.
图 3 Me-mapk1 dsRNA 琼脂糖凝胶电泳
Fig. 3 Agarose gel ofMe-mapk1 dsRNA
ku
100
70
55
45
35
25
15
ME-MAPK1
M 1 2 3 4 6 5 7
M： 蛋白 marker； 1~4： ME-MAPK1 重组子诱导表达物； 5：
ME-MAPK1 未诱导表达物； 6： pET-32a 空载体诱导表达物； 7：
pET-32a 空载体未诱导表达物。
M: Molecular mass marker; 1-4: Protein extract from induced E.
coli cells containing Me-mapk1constructs; 5: Protein extract from non-
induced E. coli cells containing Me-mapk1 constructs; 6: Protein extract
from induced E. coli cells harbouring the empty pET-32a vector; 7: Pro鄄
tein extract from non-induced E. coli cells harbouring the empty pET-
32a vector.
图 2 SDS-PAGE 电泳检测 ME-MAPK 重组蛋白
Fig. 2 Sodium dodecyl-sulphate polyacrylamide gel of
the lysate of Escherichia coli cells expressing
Me-mapk1 from the plasmid vector pET-32a
导的重组子及空载体对照无 ME-MAPK1 融合蛋白
条带（图 2）。
2.3 dsRNA对 Me-mapk1基因的沉默效果
通过引入 T7 启动子序列的 Me-mapk1 基因特
异引物 M-I1/M-I2 扩增获得 Me-mapk1 靶标片段，
随后在反转录酶的作用下合成了长度为 332 bp 的
dsRNA（图 3）。 分别提取 Me-mapk1 dsRNA、 不含
dsRNA 的缓冲液和清水浸泡处理 24 h 的二龄幼虫
黑色背景为高度保守氨基酸残基， 灰色背景为相似氨基酸残基。 星号（*）： 保守 TEY 基序序列。 MI-MPK1： 南方根结线虫促分裂原活
化蛋白激酶（ABI96897）； MA-MPK1： 甘蓝根结线虫促分裂原活化蛋白激酶 （CAD56894）； BX-MPK1： 松材线虫促分裂原活化蛋白激酶
（ACT46908）； BM-MPK1： 马来丝线虫促分裂原活化蛋白激酶（XP_001900759）。
Highly conserved residues are shaded in black, conserved substitutions are shaded in grey. The conserved TEY residues are marked with asterisks
（*）. MI-MPK1（ABI96897）from M. incognita; MA-MPK1（CAD56894）from M. artiellia; BX-MPK1（ACT46908）from Bursaphelenchus xylophilus; BM-
MPK1（XP_001900759）from Brugia malayi.
图 1 象耳豆根结线虫促分裂原活化蛋白激酶 ME-MAPK1（KT380882）与
其它植物线虫促分裂原活化蛋白激酶蛋白多序列比对
Fig. 1 Multiple sequence alignment of Meloidogyne enterolobiiME-MAPK1（KT380882）with
mitogen-activated protein kinase from other plant-parasitic nematodes
1983- -
第 37 卷热 带 作 物 学 报
500 bp
M 1 2 3 M 1 2 3
M： DL 2 000 Marker； 1： 不含 dsRNA PBS 缓冲液浸泡处理； 2： 清水浸泡处理； 3： Me-mapk1 dsRNA 浸泡处理。
M: DL 2 000 Marker; 1: Pre-parasitic second-stage juveniles（pre-J2s）soaked in the soaking buffer without dsRNA; 2: Pre-J2s soaked in water; 3 :
Pre-J2s soaked in dsRNA against Me-mapk1.
图 4 半定量PCR 检测 Me-mapk1（A）和β-actin（B）的表达
Fig. 4 Semiquantitative RT-PCR showing the expression of Me-mapk1（A）and β-actin（B）
A B
处理 J2接种数/条 根结数量/个 病情指数/％
Me-mapk1-dsRNA 300 （21.5±8.9）b 16.7
Non-dsRNA（PBS buffer） 300 （61.8±13.5）a 44.4
Water 300 （63.1±10.6）a 47.2
表 2 dsRNA 处理的象耳豆根结线虫接种 30 d 后番茄根结形成数
Table 2 Pathogenicity of M. enterolobii treated with Me-mapk1 dsRNA, after the inoculation for 30 days
说明： 同列数据后不同字母表示差异显著（Duncan 法， p≤ 0.05）。
Note: Data in the same column followed by different letters are significantly different at 0.05 level by using Duncans multiple range test.
总RNA， 反转录 RT-PCR 扩增 Me-mapk1 和对
照基因 β-actin。 电泳检测结果显示 ， 经 Me-
mapk1 dsRNA 浸 泡 处 理 后 的 二 龄 幼 虫 Me -
mapk1 转录丰度明显低于无 dsRNA 和清水浸泡
处理后的 Me-mapk1 转录水平（图 4-A）， 而非靶
标基因 β-actin 经以上 3 个处理后其转录丰度未
发生相对变化（图4-B）。
2.4 Me-mapk1 RNAi 效应表型分析
由表 2可知， 象耳豆根结线虫二龄幼虫经 Me-
mapk1 dsRNA 浸泡处理后导致番茄根结形成数相
比对照明显减少 ， 30 d 后其平均根结形成数为
21.5±8.9（平均±SD）。 不含 dsRNA 的 PBS 缓冲液和
清水对照处理形成平均根结数分别为 61.8±13.5
（平均±SD）和63.1±10.6（平均±SD）， 对照之间差异
不显著 （表 2）。 同时 ， 二龄幼虫经 Me -mapk1
dsRNA 浸泡处理接种后的番茄病情指数为 16.7，
而不含 dsRNA 的 PBS 缓冲液和清水对照处理的番
茄病情指数分别为 44.4 和 47.2（表 2）。
3 讨论与结论
本研究从象耳豆根结线虫中成功克隆了 1个促
分裂原活化蛋白激酶基因 Me-mapk1， 其编码蛋白
ME-MAPK 与其它线虫的 MAPK 具有 80％以上的
一致性， 属于典型的丝氨酸/苏氨酸激酶家族成员。
结果表明， 各生物体 MAPK 高度相似， 都包含有
11 个保守的丝氨酸 /苏氨酸亚结构域， 并且在第
VII和第 VIII亚结构域之间的 T-loop环上有 1个由
苏氨酸（T）、 酪氨酸（Y）和X氨基酸组成的 TXY 基
序， 是决定 MAPK 活性的关键位点 [16-17]。 在植物
TXY 中的 X 常为E（谷氨酸）或D（天冬氨酸）， 而动
物和酵母中是 E、 P（脯氨酸）或G（甘氨酸）。 多序列
分析比对结果显示象耳豆根结线虫 ME-MAPK 与
其它线虫 MAPK 的 TXY 基序均为 TEY（图 1）， 表
明线虫 MAPK 对底物特异性的选择上可能具有相
似性， 而本研究通过原核表达获得的 ME-MAPK1
融合蛋白也为进一步研究 MAPK 的生化特性奠定
了基础。
Kamath 等 [18]利用 RNA 干扰技术对模式秀丽小
杆线虫 mapk 基因诱导沉默后， 秀丽小杆线虫出现
不育和胚致死等表型， 表明 MAPK 在线虫的生长
发育过程中具有重要作用。 而陈国华等[19]用体外合
500 bp
1984- -
第 10 期
责任编辑： 黄东杰
成的南方根结线虫 mapk-1 dsRNA 浸泡卵块， 会
导致孵化的 J2 成活率显著降低， 同样表明 MAPK
对于植物寄生线虫的重要性。 本研究中， 通过体外
合成与象耳豆根结线虫 Me-mapk1 同源的 dsRNA
片段并刺激 J2 吞咽取食， 成功诱导了 Me-mapk1
基因的下调表达， 表现为 Me-mapk1 mRNA 的转
录丰度降低（图 4）。 而经 Me-mapk1 dsRNA 处理
的 J2 接种后诱导番茄根结形成的数量显著减少，
病情指数下降。 由此推测， Me-mapk1 基因的下调
表达对象耳豆根结线虫在根内的寄生发育造成了影
响。 该研究结果表明 Me-mapk1 可作为抑制象耳豆
根结线虫危害的一个候选靶标基因， 具有潜在的应
用价值。 需要注意的是， 利用活体外 RNA 干扰技
术对于基因的沉默具有时效性， 不能完全抑制靶标
基因的表达， 在后期靶标基因的表达水平有可能会
恢复到正常水平， 从而一定程度上影响表型的分
析。 因此， 需进一步构建能在体内稳定持久表达
dsRNA 的转基因植株实现对根结线虫靶标基因的
持续沉默， 深入研究 MAPK 的作用机制和功能地
位， 为最终提出新的防治象耳豆根结线虫病害策略
奠定理论基础。
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