全 文 ：试 验 与 花开究
响应面法优化一微波辅助萃取一高效液相色谱法
测定农吉利中牡荆素和异牡荆素
王李平 , 刘小琴 , 范华均 , 佘旭辉 , 肖雪霞 , 黄晓文
”东药学院 药科学院 广州
摘 要 应用响应面法优化了乙醇微波辅助萃取农吉利中牡荆素和异牡荆素的条件 ,用高效液
相色谱法测定提取液中牡荆素和异牡荆素的含量 。用单因素试验选取 了苹取温度 、液料比及革取
时间等 项条件 ,并在此基础上 ,用中心组合试验设计 采用三因素三水平数学模型和响应面法分
析进行优化 ,确定了最优提取条件为 ① 萃取温度 ② 液料 比为 , ③ 萃取时间
。在此条件下牡荆素和异牡荆素的提取率分别为 沼 , 艰 · 一 ,与理论值相近 。样
品加标回收率分别在 。 一 和 一 之间 。
关键词 微波辅助萃取 响应面分析法 农吉利 牡荆素 异牡荆素 高效液相色谱法
中图分类号 文献标志码 文章编号 一 一 卜
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收稿日期 一 一
基金项目 广州市科技支撑计划项工」 ` 〕
院师资队伍建设基金项目 汤 。引
作者简介 王李平 弓一 男 安徽安庆人
从事药物的提取分离及分析研究
联系人 、 , , 、 。
川 东药学
硕 卜研究生 主要
农吉利系喊科植物野百合的全草 ,含有牡荆素
和异牡荆素等多种黄酮类化合物 ,具有抗菌 、消炎 、
抗突变 、降压 、镇静等药理作用 ,在抗氧化 、抗癌 、保
护心脑血管 、抑制脂肪氧化酶方面也有显著作用 ,对
其黄酮化合物研究一直受到关注 ` 。
目前测定牡荆素和异牡荆素的方法有高效液相
·
王李平等响应面法优化一微波辅助萃取一高效液相色谱法测定农吉利中牡荆烹和异牡荆素
色谱法 〕、毛细管电泳法川和液相色谱一质
谱联用法 等 ,但存在样品前预处理繁琐 、效率低的
问题 。
微波辅助萃取用于样品预处理具有快速 、高效 、
试剂用量少等特点区` ,分为聚焦微波辅助萃取和
密闭微波辅助萃取 两种 ,前者是在开放体
系中利用溶剂回流溶出目标萃取物 ,设备简单 ,样品
处理量大 后者具有温度 、压力控制功能 ,在封闭体
系中使目标物在高温高压下被溶剂溶出 ,萃取速度
快 、样品量少 ,设备要求高区 “〕利用微波辐射药材
进行细胞破壁预处理后再溶剂萃取 ,能明显提高萃
取率 ,但不适合于样品量小的萃取分析〔 」。响应
面分析法通过建立连续变量曲面模型 ,可对影响过
程的因素水平及交互作用进行优化和评价 ,具有简
便 、结果直观 、预测性好等优点 〔口。
本工作采用 对农吉利中的牡荆素和异
牡荆素进行萃取 ,利用 片 中心组合试验
设计及响应面回归分析法对影响样品萃取的多种因
素进行了考察和优化 ,建立了 一 尤 测定
农吉利中牡荆素和异牡荆素的方法 。
加入无水乙醇 刁,加盖密封 ,置于密闭微波辅助
萃取系统中 ,调节温度 ,萃取 ,然后
将萃取液过滤 ,挥干 。残渣用甲醇定容至 , ,过
拜 微孔滤膜 ,在仪器工作条件下进行测定 。
结果与讨论
单因素试验
按试验方法分别考察了萃取温度 、液料比 、萃取
时间对牡荆素和异牡荆素萃取效果的影响 ,结果表
明 随萃取温度 、液料比和萃取时间的增加 ,牡荆素
和异牡荆素的萃取率都在增大 。当提取温度高于
,液料比大于 , ,提取时间为 一
时 ,牡荆素和异牡荆素的萃取率较高 。
中心组合试验设计
在单因素试验结果基础上 ,采用 一
中心组合试验设计原理选取萃取温度 、液料比 、萃取
时间三个因素及三水平试验设计进行优化 表 ,
利用 一 软件进行响应面回归分析 ,
响应面分析结果见表 ,提取参数的统计分析结果
见表 。
试验部分
仪器与试剂
型高效液相色谱仪 全功
能型微波化学工作平台 一型恒温水浴锅
型超声清洗器 。
牡荆素 、异牡荆素标准储备溶液 分别称取一定
量的牡荆素 、异牡荆素对照品 ,用甲醇溶解并稀释定
容 ,摇匀 ,配成 , · 一的牡荆素 、异
牡荆素标准储备溶液 。
混合标准溶液 分别移取牡荆素 、异牡荆素标准
储备溶液 , 至 容量瓶中 ,用甲
醇稀释至刻度 ,摇匀 ,配成 · 一牡荆素和
· 一异牡荆素的混合标准溶液 。
乙睛为色谱纯 ,其余试剂为分析纯 ,试验用水为
超纯水 。
仪器工作条件
菲罗门 色谱柱 只 ,
拼 流动相 体积分数 冰乙酸溶液一乙睛
混合溶液 ,流量 护· 一 检测波长
柱温为室温 进样量 拌 。
试验方法
称取农吉利药材粉末 。 于萃取罐中 ,
·
表 姚 试验设计的因素及水平
“ 】 】如
伴 回
水平 萃取温度 液料比 萃取时问 自
表 中 ,尸 。 影响极其显著 尸 影
响高度显著 尸 。 ,影响不显著 。由回归分析结
果可知 各因素对萃取率的影响显著差异为液料比
萃取温度 萃取时间 。采用二次多项式数学模型
拟合 ,牡荆素和异牡荆素的萃取符合二次多项式
夕牡荆素 一
十 一 公一
牙一 , 异牡荆素一 于卜
十
一 一 一 ,回归方
程的尸值均小于 ,模型有显著性意义 且相关
系数分别为 和 ,说明回归方程的拟
合程度较好 ,预测值和试验值之间具有高度的相关
性 ,且失拟项不显著 ,表明模型选择合适 ,可利用该
回归方程来确定最佳萃取试验条件 。
-肥掌分胭 王李平等 响应面法优化一微波辅助萃取一高效液相色谱法测定农吉利中牡荆素和异牡荆素
表 响应面分析结果
拐 溉 侧川`巴
序号 萃取温度 液料比 萃取时间 自 牡荆素质量分数
祝 , , ·
异牡荆素质量分数
拜 · 一
一 一
一
一 一 、
一
一
,
一 〕
一
一 一
一
表 提取参数的统计分析
扭 脚门”犯
牡荆素萃取率的回归分析 异牡荆素萃取率的回归分析
方差来源
模型
自由度 平方和 均方
】
〕
值 值 自由度 平方和 均方 值
八
砰
失拟项
静误差
总和
值
叮了︺八刁刀︵曰︸…八日乙书八几
试验条件的响应面优化分析
根据回归方程分析结果 ,采用 一
软件绘制了牡荆素和异牡荆素与萃取温度 、萃
取时间 、液料 比等因素的响应面曲面图 ,结果 见
图 。
图 的底部平面为等高线图 ,响应面曲线较为
陡峭 ,表明三个因素对萃取率的影响较为明显 ,且均
有稳定的最大值 ,因此可进行预测分析 。当萃取温
度为 ℃、液料比为 , 、萃取时间为
时 ,牡荆素和异牡荆素的萃取率有最大值 ,通过进行
预测分析可知 ,其萃取率预测值分别为 拜 ·
一和 拼 · 一` 。按试验条件进行分析 ,实际
测定结果分别为 拌 · 一和 拌 · 一 ,
与理论预测值接近 相对偏差分别为 和
一 ,充分验证了所建模型的正确 、可靠 ,说明
响应面分析方法适用于对牡荆素和异牡荆素萃取
理企期肺一肥掌分册 王李平等 响应面法优化一微波辅助萃取一高效液相色普法测定农占利中牡荆素和异牡荆素
供买豁翻买娜供买彭
、 向
液料比 萃取沮度 萃取时 萃取沮度 萃取时间 液料比
一 一 加 一 一 一
饭买眯彭
萃取沮度
一 一
假买书眯长裸娜眯
萃取时间 萃取沮度 萃取时间 液料比
一 一 一 一
图 萃取温度 、液料比和萃取时间对牡荆素和异牡荆素的萃取率的响应曲面
〕 、 、 、笼、、 、 、 、一 ,。 。。 一 、 。 〔注, 飞 。一 、 飞一一 了 一
一 、 、 「 , 一 、 川 一〔 、
试验条件的优化 。
色谱行为
在色谱条件下对牡荆素和异牡荆素混合标准溶
液及农吉利萃取溶液进行分离 所得色谱图见图 。
牡荆素
混合标准溶液
牡荆素
异牡荆素
】
农吉利样品溶液
图 标准溶液和样品溶液的色谱图
一 、 、 、 一 、 。
由图 可知 牡荆素与异牡荆素的保留时间分
别为 和 理论板数均在 于
以上 ,满足测定的要求 。
标准曲线及检出限
在色谱条件下对混合标准溶液系列进行测定
以峰面积对质量浓度 尸 · 绘制标准曲线 ,
牡荆素和异牡荆素的质量浓度分别在 一
, 一 · 一范围内呈线性 线性
回归方程分别为 为佛嗦一 。十 ,
夕异 昧 一 相关系数分别为
。 , 。 。按 倍信噪 比计算牡荆素和异
牡荆素的检出限分别为 , 飞 ·才 。
稳定性和重复性试验
移取供试品溶液 川 ·连续进样 次 ,并分别
在样品溶液制备 , , , , 后进样 进行
稳定性试验 ,测定牡荆素和异牡荆素的峰面积 。结
果表明 样品溶液在不同时间测得牡荆素和异牡荆
素峰面积的相对标准偏差 分别为 和
环 样品溶液在 内稳定 。
取农吉利药材粉末样品 份 按试验方法制备
样品溶液 ,分别进样 川一进行测定 。测得牡荆素
和异牡荆素的 分别为 和 表明方
法重复性良好 。
样品分析
取农吉利药材粉末 份 ,每份 。 置于
萃取罐中分别加人 的牡荆素和异
︸
王李平等 响应面法优化一微波辅助萃取一高效液相色谱法测定农吉利中牡荆素和异牡荆素
牡荆素标准溶液 ,按试验方法处理后测定牡荆素和 异牡荆素的含量 ,并计算其回收率 ,结果见表 。
表 回收试验结果
代
牡荆素 异牡荆素
称样量 本底值
之牛上
加标量
, 拜
测得总量
尹了 止
回收率
厂
本底值
, , 胖
加标量
矛,
测得总量 回收率
一︸︵自卜八内,山…比`任恃冲进通月味任斗啥月︸门门日习口门`八﹃占月一了﹃勺,…刁,八弓臼」乃刁巴弓尸乃匀尸介,乙一心曰月卜了…八曰,刁︸卜二
由表 数据计算可得 农吉利药材样品中牡荆
素和异牡荆素的质量分数分别为 · 一 ·
拌 · 一 牡荆素和异牡荆素的回收率在
一 之间 ,相对标准偏差分别为 和
。方法的准确度良好 ,操作简便 ,适合于农吉
利中牡荆素和异牡荆素的萃取分析 。
参考文献
仁 〕 刁 ·
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