全 文 ：间短 , 提取浸膏得率虽低 ,但浸膏中强心苷 G的含量有提高。
表 3　超声提取方法与传统提取方法比较　
方法 提取时间 溶液与物料比
干浸膏得率 /
%
强心苷 G
含量 /%
冷浸 6d 30：1 5.67 17.03
传统回流 6h 40：1 5.49 16.57
超声提取 20min 6：1 5.38 18.61
3　结论　
通过采用正交设计优化超声提取糖芥有效成分的工艺研
究 , 发现超声提取的各因素之间有交互作用 , 超声理想优化工
艺条件为超声功率 400 W, 超声温度 60℃, 75%乙醇提取时间
30 min。实验结果表明 , 超声提取糖芥中有效成分具有提取快
速 、完全 、提取率高 , 且有效成分不易受破坏等优点 , 是一种适
用于糖芥有效成分且具有发展潜力的中药提取方法。
[参考文献 ]
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正交实验法优选地锦草中槲皮素提取工艺
曾庆恢 ,张　健
(湖北省暨武汉市中药现代化工程技术研究中心 , 430052)
[摘　要 ] 　目的　研究地锦草中槲皮素的最佳提取条件。方法　采用正交试验法 , 以乙醇浓度(A)、溶剂用量
(B)、回流时间(C)、回流次数(D)为研究因素 ,每个因素选取 3个水平进行实验。结果　因素 A和 D对槲皮素含量有显
著影响;因素 B和 C则差异无显著性。结论　最佳工艺为用 10倍量 80%乙醇加热回流 3次 , 每次 1.5h。
[关键词 ] 　地锦草;槲皮素;正交试验法;提取工艺
[中图分类号 ] 　R286;TQ450.1　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2008)08-0977-02
　　地锦草为大戟科植物地锦 EuphorbiahumifusaWild.的干
燥全草 , 具有清热解毒 、凉血止血等功效 , 常用于治疗痢疾 、肠
炎 、咳血 、便血 、崩漏 、疮疖痈肿 [ 1] 。 临床报道其水煎液和醇提
液均有较好的抗菌作用 ,地锦草主要含有黄酮类和鞣质类化合
物 , 黄酮类化合物中主要含有槲皮素 、山奈素等成分 , 槲皮素为
黄酮类化合物中重要的活性单体之一。 笔者采用反相高效液
相色谱分析法 , 以地锦草乙醇提取液中有效成分槲皮素含量为
考察指标 , 按正交实验方案优选最佳提取工艺 [ 2 ～ 5] 。
1　仪器与试药　
HP-Angilent1100型高效液相色谱仪;ZF200型真空干燥
箱;槲皮素对照品(购于中国药品生物制品检定所 , 供含量测定
用 , 批号:100081-200406);甲醇为色谱纯 , 水为二次纯化水;其
他试剂均为分析纯。地锦草药材均购于湖北省药材公司 ,符合
《中华人民共和国药典》 2005年版Ⅰ部规定。
2　方法与结果　
2.1　高效液相色谱法测定槲皮素含量　
2.1.1　色谱条件　色谱柱:LichrospherC18(4.6 mm×250 mm,
10 μm);柱温:30℃ ;检测波长:360nm;流速:0.85mL· min-1;
流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(52：48)。理论塔板数按槲皮素
计算应≥5 000。
2.1.2　标准曲线的绘制　精密称取槲皮素对照品 3.2 mg, 置
[收稿日期 ] 　2007-06-11
[作者简介 ] 　曾庆恢(1980-), 男 ,湖北武汉人 , 学士 , 助理工程
师 ,主要从事中药新药药学研究工作。 电话:027-84534490, E-mail:
zengqh623@ 163.com。
于 50 mL容量瓶 , 加 80%甲醇稀释至刻度 ,摇匀。准密吸取 1,
2, 3, 5, 10 mL, 分别置于 10 mL量瓶中 , 加 80%甲醇至刻度 , 摇
匀 ,取 10μL注入液相色谱仪 ,测定峰面积 , 以槲皮素进样量为
横坐标 ,峰面积积分值为纵坐标 ,绘制标准曲线 , 并进行线性回
归分析 ,得到线性回归方程 Y=3 903.6X-9.715 7, r=0.999 9,
结果槲皮素在 0.064 ～ 0.640 μg范围内线性关系良好。
2.2　提取方法的选择　
2.2.1　样品的制备　称取地锦草 50 g, 水煮 2次 ,每次加水 10
倍量 ,煎煮 1.5 h, 滤过 , 合并滤液 , 浓缩至一定程度后真空干
燥。称取地锦草 50 g,加 70%乙醇 10倍量回流提取 2次 , 每次
1.5 h,滤过 , 合并滤液 ,滤液回收乙醇后真空干燥 [ 6] 。
2.2.2　测定方法与结果　分别取水提 、醇提所得干膏粉 1.0 g,
精密称定 ,置于具塞锥形瓶中 ,精密加入 80%甲醇 50mL, 密塞 ,
称定重量 , 超声处理 30min,放冷 , 再称定重量 , 用 80%甲醇补
足减失的重量 ,摇匀 , 滤过。精密量取续滤液 20mL, 精密加入
25%盐酸 7mL,置于 85 ℃水浴中水解 30min, 取出 , 迅速冷却 ,
转移至 50 mL量瓶中 , 并加甲醇稀释至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续
滤液 ,分别精密吸取各 10 μL, 注入高效液相色谱仪 , 测定槲皮
素的含量。结果见表 1。由表 1的结果可见 , 乙醇回流提取的
效果最佳 ,而且适于工业化生产。
表 1　 2种提取方法结果比较　
提取方法 药材量 /g 干膏得率 /% 槲皮素总量 /mg
水煎 50 19.52 9.47
乙醇回流 50 16.36 18.68
2.3　醇提取正交实验　为优化回流提取的条件 , 选定乙醇浓
·977·医药导报 2008年 8月第 27卷第 8期
度 、溶剂用量 、回流时间 、回流次数为考察因素 , 以槲皮素总量
和干膏得率为评价指标 ,按 4因素 3水平实验表安排进行回流
提取实验。因素水平设计见表 1。按表 2所安排的实验进行操
作 , 每份称取地锦草 50 g,加乙醇回流提取 , 滤过 , 合并滤液 , 浓
缩后真空干燥。分别取干膏粉 1.0 g,精密称定 , 置于具塞锥形
瓶中 , 精密加入 80%甲醇 50 mL, 密塞 ,称定重量 , 超声处理 30
min,放冷 , 再称定重量 , 用 80%甲醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤
过。精密量取续滤液 20mL, 精密加入 25%盐酸 7 mL, 置于 85
℃水浴中水解 30 min, 取出 , 迅速冷却 , 转移至 50 mL量瓶中 ,
并加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 滤过 , 取续滤液 ,摇匀 , 分别精密吸
取各 10μL, 注入高效液相色谱仪 ,测定槲皮素的含量。结果见
表 3。
表 2　因素水平表　
水平 乙醇浓度(A)/%
溶剂用量
(B)/倍
回流时间
(C)/h
回流次数
(D)
1 50 8 1.0 1
2 65 10 1.5 2
3 80 12 2.0 3
表 3　正交实验　
序号 因素A B C D
干膏得率 /
%
槲皮素总
量 /mg
1 1 1 1 1 13.88 15.89
2 1 2 2 2 22.37 20.02
3 1 3 3 3 22.68 20.64
4 2 1 2 3 18.43 25.34
5 2 2 3 1 11.29 14.62
6 2 3 1 2 18.12 18.66
7 3 1 3 2 15.98 22.93
8 3 2 1 3 19.79 29.59
9 3 3 2 1 10.72 20.59
K1 19.643 16.097 17.263 11.963
K2 15.947 17.817 17.173 18.823
K3 15.497 17.173 16.650 20.300
R 4.146 1.720 0.613 8.337
K1′ 18.850 21.387 21.380 17.033
K2′ 19.540 21.410 21.983 20.537
K3′ 24.370 19.963 19.397 25.190
R′ 5.520 1.447 2.586 8.157
2.4　方差分析　将正交实验结果进行方差分析。结果见表 4,
5。以干膏得率为考察指标。由表 4显示 ,各因素作用主次为 D
>A>B>C, 以 A1B2C1D3组合为佳;以槲皮素总量为考察指标。
由表 5显示 , 各因素作用主次为 D>A>C>B, 以 A3B2C2D3组
合为佳。综合考虑 , 最佳工艺为每次用 10倍量 80%乙醇加热
回流 3次 , 每次 1.5 h。
表 4　干膏得率统计分析　
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 31.063 2 15.532 47.208 <0.05
B 4.531 2 2.266 6.886
C 0.658 2 0.329 >0.05
D 118.740 2 59.370 180.456 <0.05
　　F0.05(2.2)=19, F0.01(2.2)=99
表 5　槲皮素总量统计分析　
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 54.275 2 27.138 13.177 >0.05
B 4.119 2 2.060
C 10.988 2 5.494 2.668 >0.05
D 100.458 2 50.229 24.389 <0.05
　　F0.05(2.2)=19, F0.01(2.2)=99
3　讨论　
用水作为溶剂提取 , 虽然成本较低 , 但槲皮素含量低了很
多 ,而且提取物所含杂质多 , 不利于成型 , 故选择乙醇回流提
取。
本实验通过正交实验法对地锦草的提取工艺条件进行了
优选 ,乙醇浓度 、提取次数均差异有显著性 , 提取时间和溶剂用
量对结果影响不大 ,为节约资源及能源 ,避免溶剂用量过大 、耗
时过长 ,故选用每次 10倍量溶剂 ,提取 1.5 h。按最佳工艺条件
进行重复性实验 3次 , 分别测定槲皮素的含量 , 测定的结果均
优于正交实验表中的任何一组 , 结果证明用该工艺提取地锦
草 ,有效成分的含量高 、操作容易控制 、稳定性好 、适于工业化
生产 [ 2 ～ 8] 。
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·978· HeraldofMedicineVol.27No.8 August2008