全 文 ：　收稿日期:2010-07-13　　　　　　　　　　　　　　　　通讯作者:袁华
　＊武汉大学医学院人体解剖学教研室
　　文章编号:1004-4337(2010)05-0579-03　　　中图分类号:R971 +.91　　文献标识码:A · 药学研究 ·
毒扁豆碱对老年痴呆大鼠的空间记忆能力的影响
张　晶　　　袁　华＊
(武汉科技大学天佑医院普外科　武汉 434000)
摘　要:　目的:探讨毒扁豆碱对老年痴呆大鼠的空间记忆能力的影响 ,为老年痴呆病人的临床治疗提供新的治疗思路。方法:
健康成年雄性大鼠 48只 ,随机分为痴呆组 、毒扁豆碱对照组 、毒扁豆碱治疗组 、空白对照组。运用大鼠穹窿-海马切断术建立痴呆模
型 ,术后第 8天开始腹腔注射毒扁豆碱 ,连续 1周,然后各组进行 Morris水迷宫测试。结果:空间探索实验结果显示 ,大鼠各象限游泳
距离占总距离百分率和跨越各象限平台相应位置次数占总次数百分率 ,毒扁豆碱治疗组均有明显提高。定位航行实验提示毒扁豆碱
处理后的痴呆大鼠寻找水下平台时间明显缩短。结论:痴呆大鼠经过毒扁豆碱治疗后 ,空间记忆能力出现明显好转 ,提示毒扁豆碱对
痴呆大鼠具有一定的改善作用。
关键词:　毒扁豆碱;　老年痴呆;　大鼠;　Morris水迷宫
doi:10.3969/ j.i ssn.1004-4337.2010.05.032
　　随着全世界步入老龄化社会 ,老年痴呆的发病率目前呈
现进行性递增的趋势。由于此病影响患者的认知功能 、记忆
功能 、语言功能 、视空间功能 、社会生活能力 、个人生活自理能
力和情感人格等 , 给家庭和社会带来很大负担。 因此 , WHO
已将老年痴呆症定为 21 世纪 5 大重点疾病之一[ 1] 。寻找治
疗老年痴呆症的有效药物 ,成为世界医学界的研究热点之一。
研究指出[ 2] ,在老年痴呆的早期 , 胆碱功能缺乏的症状早于其
它任何症状 , AD特征之一的神经元凋亡也主要发生在胆碱神
经元。从治疗角度看 ,美国 FDA 批准上市治疗 AD 的药物均
为胆碱酯酶抑制剂[ 3] , 因而研究和开发新的具有更好疗效的
胆碱酯酶抑制剂是当前治疗和预防老年痴呆的有效手段。毒
扁豆碱是从非洲的毒扁豆种子中提出的生物碱 , 是一种可逆
性胆酯酶抑制剂 , 但有关毒扁豆碱对老年痴呆大鼠的空间记
忆能力的研究却鲜有报道 ,本实验拟对此展开研究。
1　材料和方法
1.1　动物及分组
选用成年雄性 SD大鼠 200 ～ 220g(购至武汉大学实验动
物中心)。动物随机分为 4 组:老年痴呆组 、毒扁豆碱组 、毒扁
豆碱治疗组以及空白对照组。
1.2　试剂
毒扁豆碱购置美国 sigma公司。
1.3　模型制备
实验动物无巴比妥钠(40 mg/kg)常规麻醉 , 大鼠立体定
位仪定位 ,无菌操作下沿颅顶中线作长 2 cm 切口。于前囟后
2.0 mm ,中线右侧旁 0.5 mm 处用牙科钻打开右侧颅骨 , 仔细
剥开硬脑膜暴露大脑皮质 , 按照大鼠脑立体定位图谱[ 4] ,用特
制的宽 2 mm 刀片于前囟后 2 mm , 中线右侧 1 mm 处置刀于
脑表面 ,然后降刀 4.1 mm ,并向外向内各移动 1 和 0.5 mm。
最后再降刀 1 mm 外移 1.5 mm , 此时上下抽动刀片 15 次 ,
依次切断(单侧)扣带回 、胼胝体干 、背侧穹窿-海马伞 , 制作
AD动物模型 , 于术后第 8 天开始腹腔注射注射毒扁豆碱 100
ug/kg ,每天 3 次 , 连续 给药 3 d 后进行 Morris 水迷宫行为训
练。
1.4　Mor ris 水迷宫行为能力测试
定位航行实验 水池分为 I、II 、III 、IV4 个象限。在第 3
象限放置平台 , 浸润在水下约 1cm 高度。实验前 1 d 将大鼠
放入水池(不含平台)自由游泳 2 min熟悉水迷宫环境 , 试验
历时 5 d , 每天分上午 ,下午两个时间段 , 每段分别训练 4 次 ,
每个时间段分别从池壁 4 个起始点将大鼠面向池壁放入水
池 , 记录每次找到平台的时间(逃避潜伏期 , e scape la tency)
和游泳路径。如大鼠在 120 s 内找不到平台 ,由实验者将其引
上平台 ,潜伏期记为 120 s , 每次间隔 4 min 让大鼠休息 , 再行
下次试验。
1.5　空间探索实验
在第 5 天下午第 5次训练时拆除水下平台 , 然后任选一
个入水点将大 鼠面向池壁放入水中 , 测其 120 s 内在各象限
的游泳距离及占总距离的百分率和 120s 内跨越各象限平台
相应位置次数及占总次数的百分率 ,并记录大鼠 120s 内搜索
平台的路线图。
1.6　统计学分析
采用 SPSS13.0 进行两两比较及 t检验。
2　结果
2.1　大鼠行为能力
·579·
数理医药学杂志 2010 年第 23 卷第 5 期
各组大鼠在 Morris 水迷宫中定向航行试验结果见图 1 ,
空白对照组和毒扁豆碱阴性对照组的大鼠平均逃避潜伏期逐
渐缩短 ,而痴呆组的大鼠则丧失学习记忆能力 ,平均逃避潜伏
期无改变。而给予毒扁豆碱的痴呆大鼠 , 平均逃避潜伏期时
间明显缩短(P<0.05)。说明经过毒扁豆碱治疗的痴呆大鼠 ,
空间记忆学习能力明显提高。
图 1　各组大鼠寻找平台潜伏期对比
2.2　空间探索试验
拆去水下平台后 ,以原站台象限(III 象限)的活动时间和
穿梭次数为指标 ,模型组在第 3 象限的活动时间显著缩短 , 穿
越站台次数明显降低。而给予毒扁豆碱治疗的痴呆大鼠 , 则
在第 3 象限的活动时间有明显增加 , 穿越站台次数也有显著
的增加 ,说明毒扁豆碱可明显改善痴呆大鼠的行为能力 , 见表
1。
表 1　各实验组动物第 3 象限活动时间与穿越平台次数
组别 第 3 象限活动时间 穿越平台次数
痴呆组 24.24±5.51 1.56±0.2
毒扁豆碱组 54.13±12.13 6.04±0.4
治疗组 53.09±8.56 ＊ 5.86±0.7 ＊
对照组 52.06±7.24 6.24±1.1
　　　　注:与痴呆组比较 , P<0.05。
3　讨论
老年痴呆的患病率目前已升至威胁老年人生命的第 3
位。中枢尤其是海马等与学习和记忆相关的区域中 , 神经递
质乙酰胆碱发现是参与学习 ,记忆功能重要的神经递质。研究
发现:老年痴呆患者大脑内的乙酰胆碱的活性明显降低 , 运用
可透过血脑屏障的胆碱酯酶抑制剂可增加脑内乙酰胆碱的含
量 ,增强突触间的传递 , 改善患者的学习和记忆能力 , 因而寻
找有效的胆碱酯酶抑制剂对老年痴呆的治疗具有重要的研究
价值[ 5] 。毒扁豆碱可以抑制体内胆碱酯酶的活力 , 是一种副
交感神经兴奋剂 ,可显著增加大脑内部的乙酰胆碱水平 , 因而
理论上可改善老年痴呆的症状 , 而本实验的研究结果提示 , 毒
扁豆碱可明显的改善老年痴呆大鼠的空间记忆学习能力。研
究指出 ,吗啡能够抑制大鼠对水迷宫任务的回忆;这种抑制作
用可能与吗啡抑制中枢胆碱能递质系统功能有关 , 毒扁豆碱
通过加强胆碱能递质系统的活动 , 从而对抗吗啡诱导而在吗
啡所致的记忆丧失 , 说明毒扁豆碱对学习和记忆的影响远超
过我们的想象。综上所述 , 毒扁豆碱给予后可显著的增加老
年痴呆大鼠的空间学习能力和记忆能力 , 其机制可能是通过
增加大脑中枢神经递质乙酰胆碱的含量而得以实现的 , 但具
体的机制如何 , 仍有待进一步的研究。
参　考　文　献
1　Musiai A , Baida M , Malaw ska.Recent developments in eholinest-
erases inhibitors for Alzheimers disease t reatment.Current Medici-
nal Chemis t ry , 2007 , 14:2654～ 2679.
2　Kalesny kas G , Pu olivali J , Si rvio J , et al.C holinergic n euron s in
the basal forebrain of aged female mice.Brain Res , 2004 , 1022.
3　Jacobsel1 JS.Alzheimers disease:an overview of cu rrent and e-
mergin g therapeutic s trategies.Cu rt Top Med Chem.2002 , 2(4):
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4　包新民 ,舒斯云.大鼠脑立体定位图谱 .北京:人民卫生出版社 ,
1991 , 12～ 20 .
5　王淑萍 ,史字翔.治疗阿尔茨海默病的胆碱酯酶抑制剂的研究进展
.中国药业 , 2005 , 14(10):78～ 79.
·580·
Journal o f Mathematical Medicine Vo l.23　　 No.5　　 2010
　收稿日期:2010-05-21
Effects of Physostigmine on Ability of Learning and Memory in Alzheimers Rats
Zhang Jing , et al
(Department o f general sugery , Wuhan Universi ty o f Science and Technology , Wuhan 430071)
Abstract　Objective:To investig ate of physostigmine on spatial learning and memo ry of Alzheimers dis-
ease (AD), provide new treatment method of AD.Methods:48 male SD rats w ere randomly divided into one
of four groups:AD group , phy sostigmine group , phy so stigmine +AD group , control g roup.AD models
were established by fo rnix-f imbria hippocampus to cut of f.After the 8 days of AD model established , phy so-
stigmine we re int raperitoneal injection tw ice a day fo r 3 day , and then each groups w ere test M o rris w ater
maze.Results:In spatial explo re test , the percentag e of swim distance in the quadrant and times o f cro ssing
the platfo rm in phy so stigmine t reatment g roup rats w ere significantly increased than those in AD g roup rats
(P<0.05).In the place navig ation test , the escape latency of phy sostigmine g roup w as signif icantly sho rter
than that o f AD group.Conclusions:Physo st igmine t reatment could obviously enhanced the learning and
memo ry abi li ty of AD rats , which suggest that phy so stigmine a potential agent on AD treatment.
Key words　phy so st igmine;alzheimers disease;rats;Morris w ater maze
　　文章编号:1004-4337(2010)05-0581-02　　　中图分类号:R927.2　　文献标识码:A · 药学研究 ·
RP-HPLC法测定丹参舒心胶囊中丹酚酸 B的含量
庄　瑞
(河南省周口市食品药品检验所　周口 466000)
摘　要:　采用 RP-HPLC法测定丹参舒心胶囊中丹酚酸 B的含量。固定相为 Kromasil C18反相柱;流动相为乙腈-甲醇-甲酸-水
(10∶30∶1∶59);检测波长为 286nm;流速为:1.0 ml/min 。结果显示 , 对丹酚酸 B的平均回收率为 100.05%, RSD=0.38%(n=
9), r=0.9998。
关键词:　反相高效液相色谱法;　丹参舒心胶囊;　丹酚酸 B
doi:10.3969/ j.i ssn.1004-4337.2010.05.033
　　丹参舒心胶囊为丹参提取物制成的胶囊剂 , 具有活血化
瘀 、镇静安神之功效 , 临床上主要用于治疗冠心病引起的心绞
痛 、胸闷及心悸等 。其收载于卫生部药品标准中中药成方制
剂第 7 册。标准中没有含量测定的记载。本实验采用高效液
相色谱法对丹酚酸 B 进行了测定 ,结果表明本法专属性强 , 重
现性好 ,可作为含量测定的质控指标之一。
1　材料与制备
1.1　仪器与试药
LC-10ATVP 型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD-
10AVP 型紫外检测器;N2000 型色谱数据工作站;92SM-
202ADR电子分析天平;V-530 型紫外分光光度计;丹酚酸 B
对照品(中国药品生物制品检定所 , 批号 111562-200807);丹
参舒心胶囊(市售品 , 河南辅仁堂制药有限公司)。 乙腈 、甲
醇 、甲酸为色谱纯 ,水为纯化水。
1.2　色谱条件
色谱柱:Kromasi C18反相柱(4.6 mm×250mm , 5μm);柱
温:室温;流动相:乙腈-甲醇-甲酸-水(10∶30∶1∶59);检测
波长为 286nm;进样量 10μl;理论塔板数按丹酚酸 B峰计算不
低于 4000;分离度大于 1.5。
1.3　对照品溶液的制备
精密称取丹酚酸 B 对照品 3.93mg , 置于 50ml棕色量瓶
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数理医药学杂志 2010 年第 23 卷第 5 期