全 文 ：ALT、AST、TNF-α、HA、LN含量 ,减少肝组织产生
MDA,升高 IL-10水平(P<0.01),提示枳椇子总黄
酮能减轻酒精引起的炎症反应 ,并可对抗肝纤维化
的形成 ,对酒精引致的肝损伤有良好的防治作用 ,为
枳椇子总黄酮防治酒精肝提供了实验依据。
参 考 文 献
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葫芦茶地上部分抗 IgE介导 Ⅰ型过敏反应的研究
于大永 ,周旭东 ,史丽颖 ,冯宝民 ,唐　玲 ,王永奇＊
(大连大学药物研究所 ,山东 大连 116622)
　　摘要　目的:以致敏大鼠血清免疫球蛋白 E(IgE)、白三烯(LT)、全血和肺泡灌洗液(BALF)中的嗜酸性粒细胞
(EOS)及肺组织炎症面积为指标 , 观察葫芦茶地上部分抗 IgE介导 Ⅰ型过敏反应活性。方法:用卵白蛋白(OVA)
和氢氧化铝 AL(OH)3的混合液致敏和诱发 ,制成 Ⅰ型过敏反应动物模型。 将实验动物随机分组 , 即正常对照组 、
模型组 、孟鲁司特钠(Menglusitena)阳性对照组及葫芦茶地上部分丙酮-水提取物低 、高剂量组 。采用 ELISA法测定
致敏大鼠血清 IgE和 LT含量。采用细胞计数法 , 检测大鼠全血和 BALF中 EOS数量。通过病理学检查 ,观察肺组
织炎症反应程度。结果:与模型组比较 , 葫芦茶地上部分 50%丙酮-水提取物能显著降低大鼠血清 IgE和 LT的含
量 ,显著减少全血和 BALF中 EOS的数量 , 显著减小肺组织炎症面积。结论:葫芦茶地上部分可能通过抑制炎症介
质的释放 ,降低炎症反应 , 起到抗Ⅰ型过敏反应的作用。
关键词　葫芦茶;过敏反应;免疫球蛋白 E;白三烯;嗜酸性粒细胞;炎症
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)11-1785-03
收稿日期:2009-11-10作者简介:于大永(1976-),男 ,讲师 ,博士 ,主要从事天然活性物质的研究;Tel:0411-87403834E-mail:dlyudayong@hotmail.com。＊通讯作者:王永奇 , Tel/Fax:0411-87403834, E-mail:dalianwyq@163.com。
　　由 IgE介导的Ⅰ型过敏反应临床表现为支气管
哮喘和过敏性鼻炎〔1〕。过敏性哮喘在易感者中可
引起反复发作的喘息 、气促 、胸闷 、咳嗽等症状 ,劳损
过度时 ,过敏性哮喘还可迅速恶化 ,出现呼吸困难
等 ,严重者甚至可猝死。近年来 ,伴随人们生活方式
和工作生活环境的变化 ,过敏性哮喘的发病率正呈
现出不断上升的趋势 ,目前该病已成为常见病。葫
芦茶系豆科葫芦茶属植物葫芦茶 Tadehagitrique-
trum(L.)Ohashi的全草 ,主产于广西 、江西 、广东 、福
建等地〔2〕 ,民间常用于治疗感冒发热 、咽喉肿痛 、急
性肾炎 、黄疸肝炎 、肠炎 、细菌性痢疾等 〔3, 4〕。前期
研究中发现葫芦茶具有较强的抗过敏性哮喘作用 ,
本实验对相关机制进行了研究 ,旨在为葫芦茶抗过
敏性哮喘作用提供理论和实验依据 。
1　材料与仪器
1.1　实验动物 　Wistar大鼠 50只 ,雄性 ,体质量
170 ～ 180g,购自吉林大学基础医学院实验动物中
心 ,动物合格证号:SCXK-(吉)2007-0003,合格证编
号:0003744。
1.2　药品　葫芦茶全草 2006年 3月采集于广西
壮族自治区平南县 ,经辽宁师范大学陈辰教授鉴定
为 Tadehagitriquetrum(L.)Ohashi。葫芦茶地上部
分 50%丙酮-水提取物:葫芦茶地上部分粉碎 ,干燥
后称取 500 g,加入 50%丙酮-水回流提取 3次 ,每次
2 h,合并提取液 ,减压浓缩 ,干燥后得葫芦茶地上部
分 50%丙酮 -水提取物 110 g。对葫芦茶地上部分
50%丙酮-水提取物进行化学成分含量分析 ,测得含
总黄酮 、总多酚(鞣质)、总皂苷含量依次为 3.15%,
32.14 (18.59)%, 24.57%〔5〕。孟鲁司特钠片 ,杭州
默沙东制药有限公司 ,批号:08040。上述药物用时
·1785·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 11期 2010年 11月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.11.015
以 5%吐温-80配成混悬液 , 4℃保存 ,均灌胃给药。
1.3　主要试剂　卵白蛋白 ,北京鼎国生物技术有
限责任公司 , 批号:056K0729;大鼠白三烯(LT)、免
疫球蛋白 IgEELISA检测试剂盒 , BiowenCo.Ltd.,
批号:2008 /08/11;瑞氏 -姬姆萨染色液 ,珠海贝索生
物技术有限公司 ,批号:070202。
1.4　主要仪器 　680型全自动酶标仪 ,美国 BIO-
RAD伯乐公司产品;显微镜 ,日本 OLYMPUS公司。
2　方法
2.1　模型建立　致敏:大鼠一次性腹腔注射含卵
白蛋白 1mg和氢氧化铝 10mg的生理盐水混悬液 1
mL。攻击:大鼠致敏后 15、16、17d每天尾静脉注射
卵白蛋白生理盐水溶液(15 mg/kg)1次 ,连续 3 d,
激发哮喘 ,注射后 5 ～ 10min后出现喘促 、咳嗽等呼
吸道痉挛梗阻症状提示造模成功 〔6, 7〕。正常对照组
注射等体积生理盐水。
2.2　分组与给药　雄性 Wistar大鼠 50只 ,体质量
170 ～ 180 g,按体质量随机分为 5组 ,分别为正常对
照组 、模型组 、孟鲁司特阳性对照 1 mg/kg组及葫芦
茶地上部分 50%丙酮 -水提取物 400、100mg/kg组。
各给药组于致敏前 1h至末次攻击前 1h灌胃给药 ,
1次 /d,共计 18次 ,正常对照组及模型组给予同体
积(10mL/kg)5%吐温 -80水溶液。
2.3　测定指标及方法
2.3.1　外周血 IgE与 LT检测:大鼠末次攻击后 24
h, 300 mg/kg水合氯醛腹腔注射麻醉 ,腹主动脉采
血 , 3 000 r/min离心 10 min分离血清 ,按 ELISA试
剂盒操作要求 ,以全自动酶标仪于 450nm测定光密
度 D(λ)值 ,通过标准曲线计算全血 IgE、LT含量 。
2.3.2　全血嗜酸性粒细胞计数:全血镜下计数白
细胞数;全血涂片 ,瑞氏-姬姆萨染色 ,镜下进行白细
胞分类计数 ,计数 200个白细胞中嗜酸性粒细胞所
占百分数 ,按全血白细胞数 ×嗜酸性粒细胞%,计算
嗜酸性粒细胞数量 。
2.3.3　肺泡灌洗液嗜酸性粒细胞计数:大鼠腹主
动脉采血处死 ,消毒后打开胸腔 ,左侧肺支气管插
管 ,缓慢注入 D-Hanks液 5 mL,停留 10 s,缓慢抽
回 ,重复 3次 ,回收液约 4 mL,注入消毒试管 , 1 500
r/min离心 15min,取少量白细胞涂片 ,按全血方法
进行白细胞分类计数 ,剩余沉淀用 4mL生理盐水稀
释 ,镜下进行白细胞计数 ,按全血方法计算嗜酸性粒
细胞数量 。
2.3.4　组织病理学检查:大鼠腹主动脉采血处死
后 ,立即剖去右侧肺组织 , 10%多聚甲醛固定 ,石蜡
包埋切片 , HE染色 ,镜下观察肺组织病理学改变 ,
按炎症反应轻重程度分为Ⅴ级 ,分级标准为:0级:
镜下未见炎症反应 ,Ⅰ级:镜下目测炎症反应面积占总
面积 <25%,Ⅱ级:镜下目测炎症反应面积占总面积 <
50%, Ⅲ级:镜下目测炎症反应面积占总面积 <75%,
Ⅳ级:镜下目测炎症反应面积占总面积 >75%〔8, 9〕。
2.4　统计学处理　计量资料以 x±s表示 ,方差齐
性采用 F检验 ,两组间均数差异性采用 t检验(方差
不齐时采用 t检验校正公式), P<0.05认为有统计
学意义 。
3　结果
3.1　葫芦茶地上部分对过敏性哮喘大鼠血清 IgE、
LT含量的影响　与正常对照组大鼠比较 ,模型对照
组大鼠血清 IgE、LT含量显著增高 (P<0.01)。与
模型组比较 ,葫芦茶地上部分 50%丙酮-水提取物高
低剂量组血清 IgE、LT含量均显著下降 ,结果见表 1。
　表 1　　葫芦茶地上部分对过敏性哮喘大鼠血清
IgE、LT含量的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(mg/kg) IgE/(ng/L) LT/(pg/L)
正常对照组 - 4.88±1.77 3.21±0.51
模型组 - 22.05±13.93## 19.96±6.61##
孟鲁司特组 1 7.44±3.64＊＊ 3.54±0.55＊＊＊
葫芦茶地上部分
50%丙酮-水提取物组
400 4.93±1.07＊＊ 3.58±0.73＊＊＊
100 8.26±8.19＊ 10.28±5.99＊＊
　　注:与正常组比较 , ##P<0.01;与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<
0.01, ＊＊＊P<0.001
3.2　葫芦茶地上部分对过敏性哮喘大鼠全血与
BALT中 EOS数量的影响　与正常对照组大鼠比
较 ,模型对照组大鼠全血与 BALF中 EOS数显著增
高(P<0.01)。与模型组比较 , 葫芦茶地上部分
50%丙酮 -水提取物高低剂量组全血和 BALF中
EOS数量均显著减少 。结果见表 2。
　表 2　　葫芦茶地上部分对过敏性哮喘大鼠全血与
BALF中 EOS数的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(mg/kg) 全血 /(×108 /L) 肺泡灌洗液 /(×107 /L)
正常对照组 - 2.26±0.70 3.62±0.96
模型组 - 4.60±1.13### 7.56±3.51##
孟鲁司特组 1 2.51±1.08＊＊＊ 4.39±1.59＊
葫芦茶地上部分
50%丙酮-水提取物组
400 2.88±1.18＊＊ 3.97±1.48＊＊
100 2.93±1.55＊ 5.04±0.71＊
　　注:与正常组比较 , ##P<0.01;与模型组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P
<0.01, ＊＊＊P<0.001
·1786· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 11期 2010年 11月
3.3　葫芦茶地上部分对过敏性哮喘大鼠肺组织病
理形态的影响　正常对照组大鼠肺组织结构正常 ,
肺泡腔内无炎细胞浸润 、渗出 。模型对照组的肺泡 、
肺泡囊 、肺泡管显著变小 ,肺间质显著增生 ,其中以
各类成纤维细胞 、嗜酸性细胞为主 ,中性粒细胞较
少 ,肺内未见显著的白细胞渗出和液体渗出 。主要
表现为成纤维细胞为主的炎症。与模型对照组比
较 ,葫芦茶地上部分 50%丙酮 -水提取物高低剂量
组肺组织炎症面积均显著减小 。结果见表 3。
4　讨论
　　表 3　 葫芦茶地上部分对过敏性哮喘大鼠肺组织炎症的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(mg/kg)
炎症面积
正常 <25% <50% <75% >75% U值 P值
正常对照组 - 10
模型组 - 0 1 2 7
孟鲁司特组 1 10 0 0 0 4.141 <0.01
葫芦茶地上部分 50%丙酮-水提取物组 400 2 3 3 2 2.3685 <0.05
100 3 3 2 2 2.5216 <0.05
　　IgE在过敏反应中起重要作用 ,机体吸入抗原
后产生特异性 IgE抗体 , IgE与肥大细胞膜上 IgEFC
段高亲合力受体结合 ,使机体呈致敏状态 〔10〕。组
胺 、白三烯 、血小板活化因子统称为过敏反应三大介
质 ,但与Ⅰ型过敏反应相关的是组胺和白三烯 ,而与
支气管哮喘和过敏性鼻炎密切相关的是白三烯 ,它
引起肺气管收缩作用比组胺大 1 000倍 〔10〕。
本实验以卵白蛋白为抗原 ,复制大鼠过敏性哮
喘模型 ,通过特异性 IgE的产生 , 全血和 BALF中
EOS数量变化 、血清中炎症介质白三烯含量变化及
肺组织炎性细胞浸润程度 ,对葫芦茶地上部分 50%
丙酮-水提取物的抗过敏性哮喘活性进行了考察。
结果表明 ,模型组大鼠血清中 IgE、 LT含量显著增
高 ,全血及 BALF中 EOS数量显著增多 ,肺组织炎
性细胞浸润显著加重。与模型组比较 ,葫芦茶地上
部分 50%丙酮 -水提取物可显著降低大鼠血清 IgE
和 LTS的含量 ,显著减少全血和 BALF中的 EOS数
量 ,显著减小肺组织炎症面积。嗜酸性粒细胞是支
气管哮喘发病的主要效应细胞 ,能释放炎症介质及
炎症蛋白颗粒 ,引起气道高反应性及炎症反应 〔11-15〕
故推测葫芦茶地上部分可能是通过抑制炎症细胞的
渗出 ,减少炎症介质的释放 ,降低炎症反应 ,起到抗
Ⅰ型过敏反应的作用的 。
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