全 文 ：关键 , 姚美村等 [ 1]将黄芪甲苷苯甲酰化后 ,在 230 nm下检测干扰
少 , 吸收值高。依照此方法 , 取得了满意的结果。流动相中水对
保留时间影响非常大 ,配制时应注意精密吸取 , 减小误差。
黄芪中黄芪甲苷含量相对较低 , 药典规定含量应不低于
0.004%, 所以增加了正丁醇萃取部位得率和水提取得率作为指
标 , 3个指标综合考察 3个因素对提取效果的影响。
提取只是制备工艺的一个过程 ,制剂的制备还包括浓缩精制
等过程 , 每个过程都是相互关系影响的 , 所以提取工艺的研究在
保证了有效指标成分最大程度的提取出的基础上还要考虑到其
他的一系列过程。本实验只研究了补阳还五合剂制备提取工艺 ,
其它过程工艺还有待进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　姚美村 ,齐　莹.柱前衍生化法测定黄芪中黄芪甲苷的含量 [ J] .天
然产物研究与开发 , 2000, 4(7):17.
[ 2 ] 　韩立纬 ,高卫华.正交试验优选降糖合剂的提取工艺 [ J] .中国中药
杂志 , 2000, 10(2):605.
[ 3 ] 　贺石林.中医科研设计与统计学 [ M] .长沙:湖南科学技术出版社 ,
2001, 3:298.
[ 4 ] 　邹衍衍 ,梁柳文.退热合剂工艺筛选的正交实验研究 [ J] .广州中医
药大学学报 , 2002, 6(3):143
[ 5 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版
社 , 2005.
资源开发
收稿日期:2007-04-24;　修订日期:2007-10-24
葫芦茶种子发芽试验
彭朝忠 , 李学兰 , 彭建明 , 王云强
(中国医学科学院 ·中国协和医科大学药用植物研究所云南分所 ,云南 景洪　666100)
关键词:葫芦茶;　种子;　发芽试验
中图分类号:S567　　文献标识码:C　　文章编号:1008-0805(2008)04-0953-01
　　葫芦茶 Tadehagitriquetrum(Linn)ohashi为蝶形花科半灌
木 , 药用根 ,茎 , 叶 ,味甘 , 性凉 ,有祛风解表 、健脾利湿消炎止痛的
功效。我国分布于云南 、海南 、广东 、广西 、福建 、贵州等省区 ,
2002年我所进行中药资源保存课题研究 , 野生变为家种 , 在云南
分所南药园内种植 , 生长较好 , 每年结果很多。目前 ,野生资源越
来越少 , 大面积栽培势在必行 , 针对葫芦茶大规模生产中存在的
问题 , 我们进行了葫芦茶种子发芽试验 , 结果整理如下 , 供生产
参考 [ 1] 。
1　材料
试验用种子分别采自云南分所南药园 , 2002年种植的葫芦
茶采果期为 2005-01-17 ～ 2005-01-19, 采下果实 、阴干后剥去果
皮 , 用此种子进行如下试验。
2　方法
2.1　不同成熟度种子的发芽试验 将种子分为 3种 , 第 1种为绿
色 , 种子不饱满;第 2种黄绿色 , 种子基本饱满;第 3种褐色 ,种子
饱满。将 3种不同种子插于放有棉花的培养皿内 。
2.2　不同结果部位种子的发芽试验 采果时 , 将结果部位划分为
上 、中 、下 3个部位 , 同一时间采收成熟的果实 , 取种子抪于放有
棉花的培养皿内。
2.3　不同采收期的种子发芽试验 果实采收期分别在 12月上
旬 , 1月中旬 , 2月上旬 , 采果处理后 , 将种子抪于放有棉花的培养
皿内。
2.4　不同方法贮藏种子的发芽试验 贮藏方法分为 3种。第 1
种将种子用白纸包好后分层贮藏于放有干砂的花盆内 ,第 2种将
种子用白纸包好后分层贮藏于放有湿砂的花盆内 ,第 3种用白纸
包好后用布袋吊贮在室内。贮藏后 ,把花盆放在室内。
3　结果
3.1　不同成熟度与种子发芽关系 成熟度不一致的种子 , 其千粒
重与发芽率有较大的差异。以成熟饱满种子千粒重最重 、发芽率
最高。结果见表 1。
表 1　不同成熟度对种子发芽的影响
成熟度 千粒重 试验数 发芽数(平均数)发芽率(%)
不饱满粒 2.84 100 11 11
基本饱满粒 3.1 100 75 75
饱满粒 3.3 100 90 90
3.2 　不同结果部位与种子发芽的关系 从同一枝上 , 分别划分
为结果上部 、中部 、下部采成熟度一致的果实 , 种子千粒重 ,发芽
率有一定的差异 , 中部种子发芽率最高 , 下部次之 , 上部最低 , 结
果见表 2。
表 2　不同结果部位对种子发芽的关系
采种方法 果色 成熟度 千粒重 试验数 发芽率(%)
上部 褐色 不饱满 2.79 100 10
中部 褐色 饱满 3.42 100 94
下部 褐色 基本饱满 3.12 100 77
3.3　不同采收期与种子发芽的关系 不同采收期 , 其果实表现颜
色不同 ,种子发芽率有差异。最佳的采种期为每年的 1月中旬。
结果见表 3。
表 3　不同采收期与种子发芽的关系
采收期 成熟度 试验数 发芽率(%)
12月下旬 绿果 100 7
1月中旬 褐色 100 96
2月上旬 褐色 100 78
3.4　不同贮藏方法对种子发芽的影响 用干砂贮藏的种子 ,发芽
率最高 , 12个月后 ,还有 29%,而湿贮藏的种子 0%,用布袋贮藏
的种子 18%。结果见表 4。
表 4　不同贮藏方法对种子发芽的影响
贮藏时间 干砂藏抪种数　发芽数
湿砂藏
抪种数　发芽数
布袋藏
抪种数　发芽数
3个月 100 77 100 9 100 57
6个月 100 45 100 7 100 44
9个月 100 38 100 　 1.6 100 32
12个月 100 29 100 0 100 18
4　讨论
在同一树枝的不同部位采的种子 , 其种子千粒重有一定差
异 , 发芽率也不相同 ,中部发芽率最高为 94%, 这是由于中部的
种子养分充足 ,种子积累物质多 , 所以发芽率为 94%。
不同采收期对种子的发芽也有一定的影响 ,每年 12月下旬
采种太早 ,种子不成熟 , 故种子发芽率低 ,在西双版纳每年的 1月
中旬 , 种子成熟 , 为最佳采种时期。
贮藏对葫芦茶种子的发芽率影响较大 ,用布袋吊藏种子难以
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.4 时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期
控制温度和湿度 、时间太长会丧失发芽率。用湿砂贮藏水分过多 ,
时间长了会变霉坏死 , 9个月后完全丢失了发芽率, 而干砂贮藏水
分变化不大, 能保存种子的活力。故葫芦茶种子用干砂贮藏较好。
参考文献:
[ 1 ] 　中国医学科学院药用植物研究所云南分所.西双版纳药用植物名
录[ M] .昆明:云南民族出版社 , 1991:23.
药理药化
收稿日期:2007-04-13;　修订日期:2007-09-27
作者简介:刘丽丽 (1981-),女 (汉族),河南商丘人 ,现任大连医科大学
附属二院北院住院医师 ,硕士学位 ,主要从事肿瘤内科的临床与实验研究
工作.
＊通讯作者简介:刘艳娥(1956-),女 (汉族),吉林龙井人 ,现任大连医科
大学附属二院肿瘤科主任医师 、教授 ,硕士学位 ,主要从事中医药与中西
医结合抗肿瘤的临床与实验研究工作.
三七总皂苷逆转乳腺癌细胞
MCF-7 /ADM多药耐药的实验研究
刘丽丽 , 刘艳娥＊ ,房国涛
(大连医科大学附属第二医院 ,辽宁 大连　116027)
摘要:目的 从中药中寻找安全有效的多药耐药逆转剂 , 并初步研究三七总皂苷(PNS)对人乳腺癌细胞 MCF-7/S(敏感
细胞)及 MCF-7/ADM(耐药细胞)的影响。方法 以 MTT法测定 PNS对 MCF-7/S及 MCF-7/ADM的直接细胞毒作
用;测定阿霉素(DOX)对两种细胞的毒性作用并计算出耐药倍数;以无细胞毒性的三七总皂苷注射液作为耐药逆转剂
用 MTT法体外药敏感实验观察其对多药耐药细胞株 MCF-7/ADM的逆转作用;用 RT-PCR分别测敏感细胞和 PNS作
用后的耐药细胞表达的 MDR1基因的阳性率;用 WESTERN测定敏感细胞和 PNS作用后的耐药细胞表达多药耐药蛋白 P
-gp(P- 170)的阳性率。以上实验均用维拉帕米作为阳性对照。结果 ①PNS在 300μg/ ml浓度以下时对两细胞基
本无毒性 , 为安全有效的逆转剂量。 ②阿霉素对敏感细胞和耐药细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为 0.62μg/ ml和
25.03μg/ ml, 耐药倍数为 40.37倍。 ③PNS能够增强阿霉素(DOX)对 MCF-7/ADM的细胞毒作用 , PNS50, 100,
200μg/ ml分别作用于乳腺癌耐药细胞 48 h后 ,耐药细胞株的 IC50分别降至 17.85, 13.80, 11.63μg/ml。 ④PNS(50, 100,
200μg/ ml)均可下调多药耐药基因 mdr- 1及其表达的糖蛋白 P-gp的量 , 且随 PNS浓度的增加 , 下调作用更加明
显。而未发现维拉帕米有类似作用。结论 ①高浓度的三七总皂苷具有一定的抗肿瘤作用;②三七总皂苷可下调 MCF-
7/ADM的 MDR-1和 P-gP;③PNS能够部分逆转耐药细胞 MCF-7/ADM的多药耐药性;④三七总皂苷是一种有效安
全的多药耐药逆转剂。
关键词:乳腺癌;　三七总皂苷;　多药耐药;　逆转;　体外研究
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)04-0954-03
ReversalEffectofPanaxnotoginsengSaponinsonMultidrugResistanceBreastCancer
CelMCF/ADM
LIULi-li, LIUYan-e＊ FANGGuo-tao
(SecondAfiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity, Dalian116027, China)
Abstract:ObjectiveTosearchasortofsafeandefectivereversalagentformultidrugresistantcefromChinesetraditionalmedi-
cineandtostudytheimpactofthePanaxnotoginsengsaponins(PNS)onhumanbreastcloneMCF-7/Sandmultidrugresistance
cloneMCF-7/ADMinvitro.MethodsTomeasuredirectceltoxicantefectofPNStoMCF-7/S(sensitivestrain)andMCF-
7/ADM(multidrug-resistantstrain)andmeasuretoxicantefectofdoxtobothstrainsforresistantindexbyMTT;toobservethe
reversalefectofPNSwhichhasscreenedfornontoxicantconcentrationtoMCF-7/ADMbyMTT;tomeasureexpressionpositive
rateofmdr-1andP-gpofthebothcelaftertreatmentwithPNSbyPCRandWESTERN.Veraparmilwasusedasapositive
control.Results①TherewasnoobviouscelltoxicityofPNStoMCF-7/SandMCF-7/ADMcel, whentheconcentrationof
PNSwas300μg/mlbelow.②IC50 ofDoxtoMCF-7/SandMCF-7/ADMwere0.62 ng/mland25.03 ng/mlrespectively.Drug-ResistantindexofMCF-7/ADMwas40.37.③PNScouldincreaseceltoxiceffectofdox, aftertreatedwithcouldreduce
manner50, 100, 200 μg/mlPNSrespectivelytoMCF-7/ADMfor48 hours, IC50 respectivelydeclinedto17.85, 13.80, 11.63μg/ml(P<0.01);④PNS(50, 100, 200μg/ml)couldreducetheexpressionofmdr-1andP-GP.Nosignificantefectwasob-
servedwithverapmil.Conclusion ①HighconcentrationofPNShadcertaintumor-resistantefect;②PNScouldreducetheex-
pressionofmdr-1 andP-GPofMCF/ADM;③PNScouldpartlyrevesemultidrug-resistanceofMCF-7/ADMinvitro;④
PNScanbeakindofsafeandefficientreversalagentforclinic.
Keywords:Breastcarcinoma;　Panaxnotoginsengaponins;　Multidrugresistance;　Reversal;　Researchinvitro
　　乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤 ,占女性肿瘤发病率
的第二位 , 乳腺癌是实体瘤中应用化疗最有效的肿瘤之一 , 化疗
在整个治疗中占重要的地位 ,但由于多药耐药现象的产生而导致
化疗失败并由此引起的复发和转移 , 限制了许多抗癌药(特别是
植物类)的临床应用 [ 1] 。 MDR的主要机制之一是细胞过量表达
了一种膜 P糖蛋白(P· glycoprotein.PGP, 分子量 l70 ～ 180KD),
它通过消耗 ATP将药物从细胞内快速 “泵出”细胞 , 致细胞内药
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2008VOL.19NO.4