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HPLC测定黄芪蜜炙前后毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量
田圣志， 杨玉涛， 张振凌， 常 良
(河南中医学院，河南 郑州 450008)
收稿日期:2009-11-30
作者简介:田圣志(1955 －)，男，副教授，硕士生导师，研究方向:中药炮制与抗艾滋病中药新药的研究 。Tel:18637191919 (0371)
65837585 E-mail:tianshzh@ 126. com
关键词:黄芪;炙黄芪;毛蕊异黄酮;芒柄花素
摘要:目的:比较黄芪蜜炙前后毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量变化。方法:采用 Waters SunfireTM C18色谱柱(5 μm，4. 6
mm × 250 mm);以甲醇-水为流动相梯度洗脱，柱温:35 ℃，检测波长:254 nm，流速:1. 0 mL /min。结果:生黄芪中毛蕊异
黄酮和芒柄花素的含量分别为 0. 247 9 mg /g 和 0. 125 2 mg /g，炙黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量分别为 0. 225 6
mg /g和 0. 108 2 mg /g。结论:蜜炙法可使黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量降低。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)08-1365-04
Simultaneous determination of calycosin and fermononetin in Radix Astragali and
its fried product with honey by HPLC
TIAN Sheng-zhi， YANG Yu-tao， ZHANG Zhen-ling， CHANG Liang
(Henan College of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，China)
KEY WORDS:Radix Astragali;Radix Astragali fried with honey;calycosin;fermononetin
ABSTRACT:AIM:To compare the contents of calycosin and fermononetin between Radix Astragali and its fried
product with honey. METHODS:The chromatographic column was a Waters SunfireTM C18 column(250 mm ×4. 6
mm，5 μm). The mobile phase was the mixture of methanol and water with a linear gradient elution at a flow rate of
1 mL /min. The ultraviolet wavelength was set up 254 nm，and the column temperature was maintained at 35 ℃ .
RESULTS:The contents of calycosin and fermononetin in Radix Astragali were 0. 247 9 mg /g and 0. 125 2 mg /g
respectively，the contents of calycosin and fermononetin in Radix Astragali fried with honey were 0. 225 6 mg /g and
0. 108 2 mg /g，respectively. CONCLUSION:The contents of calycosin and fermononetin in Radix Astragali fried
with honey decreased.
黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membrana-
ceus(Fisch.)Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao 或
膜荚黄芪 Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge 的
干燥根，为一种常用中药，临床应用历史悠久，生黄
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
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芪具补气固表，利尿，托毒，排脓，敛疮生肌作用，炙
黄芪具补气和中作用［1］。黄芪的化学成分主要有
皂苷类、多糖类和黄酮类等组成，其功效与其成分存
在着密切关系，研究黄芪蜜炙前后化学成分的变化
有助于解释其功效变化并阐明其炮制机理。研究表
明，黄芪蜜炙后，黄芪甲苷含量降低［2］，多糖含量升
高［3］，而黄酮类成分的含量变化尚未见报道，为了
探讨黄芪蜜炙前后黄酮类成分含量变化，我们采用
HPLC法对黄芪蜜炙前后毛蕊异黄酮和芒柄花素两
个主要黄酮类成分的含量进行了测定。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 Waters高效液相色谱仪系统:600E 泵，
2487 紫外双波长检测器，717 自动进样器，Empower
色谱工作站，在线脱气机，柱温箱;SK3200H 超声波
清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，METTLER
AE240 型十万分之一电子天平，Sartorius 万分之一
电子天平。
1. 2 试药 甲醇(色谱纯，天津四友精细化学品有
限公司)，甲醇(分析纯，宿州化学试剂厂)，纯净水
(杭州娃哈哈集团有限公司);毛蕊异黄酮和芒柄花
素对照品购自南京泽朗医药科技公司(纯度均大于
98%)。
1. 3 药材
黄芪生品:黄芪饮片购自河南中原正信药材公
司，经河南中医学院陈随清教授鉴定为蒙古黄芪 As-
tragalus membranaceus(Fisch.)Bge. var. mongholicus
(Bge.)Hsiao的干燥根。
炙黄芪:取上述黄芪饮片，照蜜炙法(《中国药
典》2005 年版一部附录ⅡD)炒至不黏手。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Waters SunfireTM C18色谱柱(5 μm，
4. 6 mm × 250 mm)，Waters SunfireTM C18保护柱(5
μm，4. 6 mm ×20 mm);流动相:甲醇-水梯度洗脱，
见表 1;柱温:35 ℃;检测波长:254 nm;流速:1 mL /
min，进样量:10 μL。
表 1 毛蕊异黄酮和芒柄花素含量测定用流动相条件
Tab. 1 The condition of mobile phase for
determination of calycosin and fermononetin
时间 /min 甲醇 /% 水 /%
0 50 50
20 55 45
30 60 40
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取毛蕊异黄酮
4. 90 mg和芒柄花素 6. 00 mg，分别置 5 mL 量瓶中，
加甲醇定容，摇匀，分别移取 2 mL 毛蕊异黄酮溶液
(0. 98 mg /mL)和 1 mL 芒柄花素溶液(1. 20 mg /
mL)至 100 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得
质量浓度分别为毛蕊异黄酮 1. 96 × 10 －2 mg /mL 和
芒柄花素1. 20 × 10 －2 mg /mL的混合对照品溶液。
2. 3 供试品溶液的制备 取样品粉末(过 4 号筛)
2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加甲醇 30 mL，超声
提取 45 min，过滤，残渣加 30 mL 甲醇重复提取一
次，合并滤液，蒸干，加甲醇溶解，定容至 25 mL量瓶
中，即得。进样前用 0. 22 μm微孔滤膜过滤。
2. 4 线性关系的考察 吸取毛蕊异黄酮和芒柄花
素的混合对照品溶液 2、5、10、15、20、25 μL，按 2. 1
项下色谱条件注入液相色谱仪，测得峰面积积分值。
以进样量(μL)为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，
得线性方程。毛蕊异黄酮:Y = 96 381X － 16 875，r
= 0. 999 7，线性范围:0. 039 2 ～ 0. 490 μg;芒柄花
素:Y = 79 116X － 44 263，r = 0. 999 7，线性范围:
0. 024 0 ～ 0. 300 μg。
2. 5 精密度实验 吸取同一生黄芪供试品溶液 10
μL，重复进样 5 次，测得毛蕊异黄酮峰面积 RSD 为
0. 75%，芒柄花素峰面积 RSD 为 0. 59%，说明仪器
精密度良好。
2. 6 稳定性实验 吸取同一生黄芪供试品溶液，分
别在 0、2、4、8、12、24、48 h 进样 10 μL，测得毛蕊异
黄酮峰面积 RSD 为 2. 00%，芒柄花素峰面积 RSD
为 1. 45%，说明样品溶液 48 h内稳定性良好。
2. 7 重复性实验 取生黄芪粉末，精密称取 5 份，
每份 2 g，按 2. 3 项下方法制备样品溶液，按 2. 1 项
下色谱条件注入液相色谱仪，进行测定，结果毛蕊异
黄酮含量 RSD 为 2. 90%，芒柄花素含量 RSD 为
1. 89%，说明实验方法重复性较好。
2. 8 加样回收实验 取已知含量的生黄芪粉末 6
份，每份 1 g，精密加入毛蕊异黄酮 0. 273 6 mg 芒柄
花素 0. 127 0 mg，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，
按 2. 1 项下色谱条件注入液相色谱仪，进行测定，得
毛蕊异黄酮、芒柄花素平均回收率分别为100. 94%、
103. 86%，RSD分别为 1. 72%、1. 14%。
2. 9 样品含量测定 精密称取生、炙黄芪粉末各 3
份，按 2. 3 项下方法制备供试品溶液，2. 1 项下色谱
条件注入液相色谱仪，测得峰面积积分值，代入线性
方程，以外标法计算样品中毛蕊异黄酮和芒柄花素
的含量，结果见表 2。色谱图见图 1、图 2、图 3。
3 讨论
3 . 1 关于色谱条件及供试品制备方法的选择 关
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表 2 生、炙黄芪中毛蕊异黄酮和芒柄花素含量 (n = 3)
Tab. 2 The contents of calycosin and fermononetin in Radix astragali and the one fried with honey(n = 3)
样品
样品重
量 / g
毛蕊异黄酮 芒柄花素
含量 /(mg /g) 平均值 /(mg /g) RSD /% 含量 /(mg /g) 平均值 /(mg /g) RSD /%
2. 003 8 0. 248 05 0. 124 18
0. 248 13 0. 123 87
生黄芪 2. 003 5 0. 249 73 0. 247 9 1. 48 0. 124 39 0. 125 2 1. 36
0. 244 13 0. 123 85
2. 005 0 0. 253 71 0. 126 93
0. 243 92 0. 127 70
2. 003 8 0. 219 98 0. 104 52
0. 220 83 0. 106 73
炙黄芪 2. 004 0 0. 232 85 0. 225 6 2. 21 0. 109 13 0. 108 2 2. 01
0. 229 60 0. 110 58
2. 003 8 0. 224 70 0. 108 95
0. 225 83 0. 109 13
注:样品中毛蕊异黄酮或芒柄花素的含量(mg /g)= (Y × 25 ×对照品浓度)/(10 ×样品的实际称重)
图 1 混合对照品 HPLC色谱图
Fig. 1 The HPLC fingerprint of calycosin and
fermononetin
图 2 生黄芪 HPLC色谱图
Fig. 2 The HPLC fingerprint of Radix Astragali
图 3 炙黄芪 HPLC色谱图
Fig. 3 The HPLC fingerprint of Radix Astragali fried
with honey
于色谱条件的选择，运用 HPLC 测定黄芪中毛蕊异
黄酮和芒柄花素含量的方法，有以甲醇-水为流动
相，等度洗脱法分别测定毛蕊异黄酮［4］和芒柄花
素［5］的含量;有以乙腈-水为流动相等度洗脱测定芒
柄花素的含量［6］;亦有以甲醇-水为流动相，梯度洗
脱同时测定毛蕊异黄酮和芒柄花素的含量［7］。但
我们对这些方法进行了考察，结果不理想。故探索
了新的流动相梯度洗脱条件，同时对检测波长、柱温
进行了考察，最终确定以甲醇-水为流动相，梯度洗
脱(0→20 min→30 min，甲醇-水:50% ∶ 50%→55%
∶ 45%→60% ∶ 40%)，波长 254 nm，柱温 35 ℃，作为
本实验同时测定毛蕊异黄酮和芒柄花素含量的色谱
条件。在该色谱条件下，毛蕊异黄酮和芒柄花素有
最大吸收，基线、峰形、分离度较好，且杂质峰干扰
小。该方法简便、可靠、准确，经济价廉、环境污染
小，具有一定的实用性。
关于供试品溶液的制备，比较了甲醇和 95%乙
醇的提取溶剂，提取方法比较了超声法和回流提取
法，结果以甲醇为提取溶剂，超声提取较好;后对提
取时间和提取次数进行了比较，以超声 45 min，提取
两次较好。确定以甲醇为提取溶剂，超声提取两次，
每次 45 min，过滤，合并滤液，蒸干，定容至 25 mL量
瓶，该方法提取率高、操作步骤少、损失率低。
3. 2 本实验结果表明，黄芪经蜜炙后毛蕊异黄酮和
芒柄花素的含量较生品含量低。与蜜炙后黄芪甲苷
含量降低一致，与多糖类含量增加相反。夏英［2］等
认为黄芪甲苷是受热不稳定导致含量降低;田源
红［8］等认为多糖蜜炙后含量增加，一方面多糖对热
较稳定，另一方面可能与炮制后黄芪甲苷含量减低
苷水解，以及氨基酸等含量减低有关。黄芪蜜炙后
含量变化的原因，作者认为除与毛蕊异黄酮和芒柄
花素受热不稳定有关外，还与炮制过程中辅料蜂蜜
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的加入导致样品中黄芪的有效重量降低有关。
毛蕊异黄酮和芒柄花素是黄酮类成分，黄酮类
具有清除自由基、调节免疫、抗病毒等作用［9］;黄芪
甲苷是皂苷类成分，皂苷类具有抗炎、镇痛、抗血栓
形成、抗衰老、抗病毒、抗风湿、抗肝纤维化、对心血
管系统等作用［10］;黄芪多糖具有增强机体免疫功
能、强心降压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐
射、抗氧化等作用［11］;由此似乎可以认为，生黄芪补
气固表，利尿，托毒排脓，敛疮生肌的作用与黄酮类
和皂苷类的药理作用关系密切;由于黄酮类和皂苷
类含量降低则其相应的药理作用也减弱，多糖类含
量增加则其相应的药理作用增强，相对突出了多糖
的作用，从而表现出炙黄芪补气和中的作用增强。
亦可认为炙黄芪的功效与黄酮类和皂苷类含量降
低，多糖类含量增加密切相关。说明黄芪蜜炙的传
统炮制理论具有一定的科学道理，临床应用时，应根
据不同的症状选择生黄芪或者炙黄芪。
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沙苑子及其炮制品中沙苑子苷 A和鼠李柠檬素的含量测定研究
孙建中1，2， 张 怀1，2， 贾天柱1，2* ， 张 希3
(1. 辽宁中医药大学，2. 辽宁省中药炮制工程技术研究中心，辽宁 大连 116600;3. 威海市中医院，山东 威
海 264200)
收稿日期:2009-09-08
作者简介:孙建中(1982 －)，男，在读硕士研究生，主要从事中药炮制工艺与原理研究。Tel:15866478521 E-mail:zhxi. 2006@ 163. com
* 通讯作者:贾天柱(1951 －)，男，教授，博士生导师。Tel:(0411)87586499 E-mail:jiatz@ lnutcm. edu. cn
关键词:沙苑子;盐水炙;HPLC;沙苑子苷 A;鼠李柠檬素;含量测定
摘要:目的:建立同时测定沙苑子中沙苑子苷 A和鼠李柠檬素含量的高效液相色谱方法，考察沙苑子及其炮制品中沙苑
子苷 A和鼠李柠檬素含量的变化情况。方法:采用 Agilent C18色谱柱(150 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0. 2%磷
酸溶液(采用梯度洗脱的方式:0 ～ 12 min，20% ～24%乙腈;12 ～ 40 min，24% ～70%乙腈)，流速 1. 0 mL /min，检测波长为
337 nm。结果:沙苑子苷 A及鼠李柠檬素的平均回收率分别为 99. 61%，98. 98%;RSD 分别为 0. 58%，1. 28%(n = 6)。
结论:该方法快速准确，同时测定了沙苑子中沙苑子苷 A和鼠李柠檬素的含量，可用于沙苑子的质量控制;并且证明了盐
炙沙苑子的炮制方法优于其他炮制方法。
中图分类号:R283 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2010)08-1368-04
Determination of complanatoside A and rhamnocitrin in Semen Astragali com-
planati
SUN Jian-zhong1，2， ZHANG Huai1，2， JIA Tian-zhu1，2* ， ZHANG Xi3
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第 32 卷 第 8 期
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Vol. 32 No. 8