全 文 ：第 42 卷第 22 期
2014 年 11 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 42 No. 22
Nov. 2014
饿蚂蝗中黄酮类化合物的抗氧化活性的研究*
袁见萍1，张前军1，2，康文艺3，周清娣4
(1 贵州大学精细化工研究开发中心，贵州 贵阳 550025;2 贵州大学化学与化工学院，
贵州 贵阳 550025;3 河南大学中药研究所，河南 开封 475004;
4 澳大利亚悉尼大学化学学院，澳大利亚 悉尼 1797)
摘 要:提取了饿蚂蝗中的黄酮化合物，并研究了其含量及与体外抗氧化活性关系。用体积分数为 75%的乙醇提取饿蚂蝗
全草黄酮化合物，并采用 HPD －100 大孔树脂对粗提液进行精制，利用 NaNO2 － Al(NO3)3 － NaOH 显色法和可见分光光度法测定
精制黄酮的含量。采用 DPPH和 ABTS自由基测定法，对饿蚂蝗黄酮化合物的抗氧化活性进行评价。结果表明:在自由基清除实
验中，精制饿蚂蝗黄酮类化合物自由基清除能力高于未精制的乙醇提取物。饿蚂蝗黄酮类化合物的体外抗氧化活性与黄酮含量呈
正相关性。
关键词:饿蚂蝗;黄酮;抗氧化活性
中图分类号:Ｒ284. 1，Ｒ927. 2 文献标志码:B 文章编号:1001 － 9677(2014)022 － 0079 － 03
* 基金项目:教育部春晖计划 (Z2011036) ，贵阳市科技计划项目 (2012204)。
作者简介:袁见萍 (1988 －) ，硕士研究生，研究方向:天然有机化学。
通讯作者:张前军 (1965 －)，教授。
Determination of Flavonoids and Antioxidant Activity of
Different Parts from Desmodium sambuens(D C. )*
YUAN Jian － ping1，ZHANG Qian － jun1，2，KANG Wen － yi3，ZHOU Qing － di4
(1 Fine Chemical Ｒesearch Center，Guizhou University，Guizhou Guiyang 550025;
2 College of Chemistry and Engineering，Guizhou University，Guizhou Guiyang 550025;
3 Pharmacological Ｒesearch Center，Henan University，Henan Kaifeng 475004，China;
4 College of Chemistry，Sydney University，Sydney 1797，Australia)
Abstract:To the flavonoids contents from Desmodium sambuens and relationship with in vitro antioxidant activity
were studied. The flavonoids contents which purified by macroporous resins HPD －100，and the antioxidant activity were
assessed through resistance to DPPH and ABTS. The result showed that the purified products were much better than the
unpurified products in the quality and ability of anti － oxygenation. There was a positive correlation between the
antioxidant capacity and the content of flavonoids in Desmodium sambuens(D C. ).
Key words:Desmodium sambuense D C. ;flavonoids;antioxidant activity
饿蚂蝗 (Desmodium sambuense)为豆科山蚂蝗植物，具有
活血止痛、解毒消肿、清热解毒、消食的功效。课题组在前期
研究发现饿蚂蝗的醇提物及其各部位具有良好保肝活性［3］，建
立了饿蚂蝗黄酮和酚含量的测定方法［4 － 5］。由于黄酮类化合物
是具有良好的活性氧自由基清除作用，因此我们认为饿蚂蝗的
抗氧化活性应该与其黄酮含量有关，本文采用 HPD － 100 大孔
树脂对黄酮粗提液进行精制，采用 DPPH 和 ABTS 自由基测定
法，对饿蚂蝗黄酮化合物的抗氧化活性进行评价，探讨饿蚂蝗
体外抗氧化活性与其黄酮含量的相关性。
1 材料及方法
1. 1 材料及仪器
U －1901 型紫外分光光度计，北京谱析通用仪器有限责任
公司;TP － 114 型电子分析天平，北京赛多利斯仪器系统有限
公司;SB － 5200D超声波清洗器 (200 W，(40 ± 1)kHz) ，宁
波新芝生物科技股份有限公司。
槲皮素对照品(批号 100081) ，中国药品生物制品检定所;
DPPH，日本东京化成工业株式会社;ABTS，Fluka 公司;BHT
(二丁基羟基甲苯) ;PG (propyl gallate，没食子酸丙酯) ;BHA
(butylated hydroxyanisole，丁基羟基茴香醚) ;乙醇，过硫酸钾
及其它试剂均为分析纯;大孔树脂 (大孔树脂 HPD － 100) ，河
北沧州宝恩化工有限公司。
饿蚂蝗于 2012 年采自贵州省贵阳市，经贵阳中医学院陈
德媛教授鉴定为豆科山蚂蝗属 (Desmodium)植物饿蚂蝗
Desmodium sambuense D C. 的全草。
80 广 州 化 工 2014 年 11 月
1. 2 方 法
1. 2. 1 饿蚂蝗黄酮化合物的提取及精制
将饿蚂蝗粉碎后，按 1∶5 的料液比加入 75% 乙醇浸泡
3 次，每次 7 天，合并浸提液并浓缩得浓缩液，在 100 ℃下使
用烘箱进行干燥，粉碎得到粗黄酮粉。粗黄酮粉用水分散，上
HPD － 100 大孔树脂，分别用水与 20%、40%、60%、80%、
100%乙醇洗脱，减压浓缩后，在 100 ℃下使用烘箱进行干燥，
经研磨得到精制黄酮粉［6］。
1. 2. 2 黄酮含量的测定［7］
1. 2. 2. 1 对照品溶液的制备
精密称取槲皮素 0. 021 6 g，60%乙醇溶解，转移至 100 mL
容量瓶中，60%乙醇定容至刻度，摇匀即得到 0. 216 mg /mL 的
对照品溶液。
1. 2. 2. 2 供试品溶液的制备
称取适量粗黄酮和各洗脱样品，用 60%乙醇溶解，定容至
25 mL，得供试品溶液。
1. 2. 2. 3 标准曲线的制作
精密吸取槲皮素对照品溶液 0. 0 mL、2. 5 mL、5. 0 mL、
7. 5 mL、10. 0 mL、12. 5 mL，分别置于 25 mL 容量瓶中，前
5 瓶补加 60%乙醇至 12. 5 mL，精密加入 5%NaNO2溶液 0. 75 mL，
摇匀，放置 6 min;精密加入 10% Al(NO3)3溶液 0. 75 mL，摇
匀，放置 6 min;加入 4% NaOH 溶液 10 mL，分别用 60%乙醇
稀释至刻度，摇匀，放置 15 min。以不加样品试剂为空白，在
510 nm 处分别测吸光度，可得标准曲线。
1. 2. 2. 4 样品黄酮含量的测定
分别取各样品溶液体积适量，于 25 mL容量瓶中，按标准
曲线制作方法进行测定，在 510 nm 处分别测其吸光度，由吸
光度值和标准曲线计算原理得黄酮含量。
1. 2. 3 抗氧化活性筛选方法
1. 2. 3. 1 DPPH 方法
按照文献［8］，将样品用甲醇配成一系列浓度，取 0. 1 mL
样品加入 3. 5 mL DPPH 甲醇溶液(0. 06 mmol·L －1) ，混合
30 min 后于 515 nm 处测定吸光度。每份样品平行测定操作
3 次，计算公式为:
清除率 =(Acontrol － Asample)Acontrol × 100%
式中:Acontrol———3. 5 mL DPPH 溶液与 0. 1 mL 甲醇混合
后的吸光度
Asample———3. 5 mL DPPH 溶液与 0. 1 mL 样品混合
后的吸光度
1. 2. 3. 2 ABTS 方法
按照文献［9］，配制 ABTS 自由基工作液。将样品用甲醇
配成一系列浓度，取 1 mL 提取物加入 1 mL ABTS +·储备液，
棕色瓶中混合均匀，30 ℃下保温 10 min，在 734 nm 处测定吸
光度。每份样品平行测定操作 3 次，计算公式为:
清除率 =(Acontrol － Asample)Acontrol × 100%
式中:Acontrol———1 mL ABTS +·溶液与 1 mL 甲醇混合后
的吸光度
Asample———1 mL ABTS +·溶液与 1 mL 样品混合后
的吸光度
1. 2. 3. 3 清除率计算
依据上述公式计算得到的清除率，用 origin 软件处理，得
到样品清除率 DPPH 自由基和 ABTS 自由基的半数抑制率 IC50
值。
2 试验结果
2. 1 饿蚂蝗黄酮类化合物的提取、精制效果
2. 1. 1 标准曲线制作
标准曲线考察结果如表 1 和图 1。如图 1 所示，以对照品
浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，得线性回归方程为:Y =
5. 50528X + 0. 03239(r = 0. 9994)。结果表明槲皮素在 0. 021 6 ～
0. 108 0 mg /mL呈良好线性关系。
表 1 槲皮素标准曲线线性范围考察结果
Table 1 The standard curve of quercetin
编号
取对照品
体积 /mL
对照品浓 /
(mg·mL －1)
测得吸光度
1 2. 5 0. 0216 0. 144
2 5. 0 0. 0432 0. 278
3 7. 5 0. 0648 0. 392
4 10. 0 0. 0864 0. 511
5 12. 5 0. 1080 0. 622
图 1 槲皮素测定标准曲线
Fig. 1 Standard curve of quercetin
2. 1. 2 黄酮含量测定
表 2 黄酮含量的测定结果
Table 2 The absorbance of the samples of the polyphenols
样品 称量 /mg
取出
体积 /mL
测得黄酮
含量 /mg
Abs
百分
含量 /%
水 43. 4 12. 5 1. 30 0. 319 5. 99
20% 20. 1 5 1. 65 0. 410 41. 04
40% 19. 4 4 1. 93 0. 458 62. 02
60% 33. 3 2 1. 08 0. 270 40. 35
80% 28. 6 10 0. 63 0. 172 5. 46
100% 26. 8 12 0. 98 0. 243 7. 58
粗提物 19 5 0. 57 0. 159 15. 11
由表 2 可知，不同浓度乙醇精制的饿蚂蝗黄酮含量差异较
大，其中 20%、40%、60%乙醇精制的黄酮百分含量分别为
41. 04%，62. 02%，40. 35%，而粗提物中含量为 15. 11%。通
过该实验说明利用 HPD － 100 大孔树脂精制饿蚂蝗黄酮类化合
物的方法是可行的。选取 20%、40%、60%乙醇精制的黄酮进
行抗氧化活性实验。
第 42 卷第 22 期 袁见萍，等:饿蚂蝗中黄酮类化合物的抗氧化活性的研究 81
2. 2 抗氧化活性的测定
2. 2. 1 对 DPPH 自由基的清除作用
结果见表 3 和图 2。表 3 显示，不同浓度乙醇精制的饿蚂
蝗黄酮提取液清除 DPPH自由基的能力均弱于阳性对照物对照
PG，BHA，BHT清除 DPPH 自由基的能力 (IC50分别为 0. 60，
3. 10 mg·L －1)，其中 40%乙醇精制的饿蚂蝗黄酮提取液最强
(IC50为 16. 29 mg·L
－1) ，约为 BHT 清除自由基能力的 1 /2
(IC50为 8. 08 mg·L
－1)。精制黄酮对 DPPH 自由基清除能力的
顺序为:40% ＞20% ＞60% ＞粗提物。
表 3 不同浓度乙醇精制的饿蚂蝗黄酮的抗氧化活性
Table 3 The values of IC50 of extracts from different parts of D. C
提取物
DPPH IC50 /
(mg·L －1)
ABTS IC50 /
(mg·L －1)
20% 20. 61 5. 57
40% 16. 29 3. 48
60% 21. 75 5. 90
粗提物 23. 34 12. 99
BHA 3. 10 1. 65
BHT 8. 08 1. 97
PG 0. 60 1. 00
图 2 抗氧化剂浓度对 DPPH自由基清除作用
Fig. 2 The scavenging activity of extracts from D. C to DPPH
2. 2. 2 对 ABTS自由基的清除作用
图 3 饿蚂蝗醇提物浓度对 ABTS自由基的影响
Fig. 3 The scavenging activity of extracts from D. C to ABTS
表 3 显示，不同浓度乙醇精制的饿蚂蝗黄酮清除 ABTS 自
由基的能力均弱于阳性对照 PG，BHA，BHT清除 ABTS自由基
的能力，其中抗氧化活性最好的是 40%乙醇精制的饿蚂蝗黄酮
提取液(IC50为 3. 48 mg·L
－1) ，与阳性对照 BHT，BHA 清除
ABTS自由基的能力 (IC50为 1. 97，1. 65 mg·L
－1)接近。其次
是 20%、60% (IC50分别为 5. 57，5. 90，不同浓度乙醇精制的
饿蚂蝗黄酮提取液对 ABTS 自由基的清除能力顺序为 40% ＞
20% ＞60% ＞粗提物。
2. 3 讨 论
(1)从图 2 和图 3 可以看出，不同浓度乙醇精制的饿蚂蝗
黄酮清除 DPPH 和 ABTS 自由基的能力随浓度的增大而增大，
其随浓度变化最大，自由基清除力趋于平缓;显示不同浓度乙
醇精制的饿蚂蝗黄酮清除 ABTS 自由基的能力随着浓度的增加
而增大;说明不同浓度乙醇精制的饿蚂蝗黄酮清除 DPPH 和
ABTS自由基能力与其质量浓度呈正量相关性。
(2)40%乙醇精制的黄酮含量最高，对 DPPH 和 ABTS 自
由基的清除率最大，表明饿蚂蝗抗氧化活性与其黄酮的含量有
正相关性，黄酮类成分是饿蚂蝗植物的主要抗氧化物质。
(3)实验结果表明该树脂对饿蚂蝗黄酮成分具有较好的吸
附效果，40% 部位黄酮含量可达 62. 02%，比粗黄酮提高了
4 倍。实验结果可为研究饿蚂蝗中黄酮类化合物的提取分离方
法提供参考。
3 结 论
在自由基清除实验中，精制饿蚂蝗黄酮类化合物自由基清
除能力高于未精制的乙醇提取物。饿蚂蝗黄酮类化合物的体外
抗氧化活性与黄酮含量呈正相关性。
参考文献
［1］ 黄池宝，罗宗铭．槐花米中黄酮化合物的提取及其抗氧化性的研究
［J］．韶关学院学报:自然科学版，2003，24(6) :48 － 50．
［2］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草［M］． 上海:上海
科学技术出版社，1999:3130．
［3］ 张前军，于海林，李传宽，等．饿蚂蝗对四氯化碳致急性肝损伤小鼠
保护作用研究［J］．中成药，2011，33(11):1993 － 1995．
［4］ 李传宽，张前军，康文艺，等．饿蚂蝗中总黄酮含量的测定［J］．中国
实验方剂学杂志，2011，17(23) :58 － 59．
［5］ 袁见萍，张龙，张前军，等． 饿蚂蝗中多酚的含量测定［J］． 中国药
房，2013，24(43) :4078 － 4080．
［6］ 李传宽，张前军，黄钟碧，等．饿蚂蝗化学成分研究［J］．中国中药杂
志，2010，35(18) :2420 － 2423．
［7］ 李传宽．饿蚂蝗的化学成分与生物活性研究［D］．贵阳:贵州大学．
［8］ 张伟，李昌勤，刘瑜新，等．酸模叶蓼抗氧化活性［J］．中国实验方剂
学杂志． 2011，17(16):228 － 230．
［9］ 尹震花，顾雪竹，张一冰，等．三白草体外抗氧化活性［J］．中国实验
方剂学杂志，2012，18(4):99 － 102．