全 文 ：第３２卷 第１期 宁夏大学学报（自然科学版） ２０１１年３月
Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｉｎｇｘｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｍａｒ．２０１１
文章编号：０２５３－２３２８（２０１１）０１－００７３－０５
胡卢巴种质资源ＲＡＰＤ遗传多样性分析
王掌军，刘 萍，阳 翠，张云霞
（宁夏大学 农学院，宁夏 银川 ７５００２１）
摘 要：在优化随机引物扩增多态性ＤＮＡ标记（ＲＡＰＤ）反应体系和条件的基础上，利用筛选的多态性引物分析了
胡卢巴种质资源的遗传多样性．结果表明，１９条 ＲＡＰＤ引物显示了４０份胡卢巴种质资源的遗传距离为０．０２～
０．７０，来源上变幅从大到小为：宁夏和国外种质间、国外种质间、宁夏种质间、国内其他省份种质间．４０份胡卢巴种
质资源分为两类，即Ⅰ类包括３份国外种质；ＩＩ类包括３７份种质，可大体上分为宁夏、国内其他省份和国外种质３
个亚类．
关键词：胡卢巴；种质资源；ＲＡＰＤ；遗传多样性
分类号：（中图）Ｑ７８ 文献标志码：Ａ
收稿日期：２００９－１２－１７
基金项目：国家自然科学基金资助项目（３０６６００１７）
作者简介：王掌军（１９７８－），男，讲师，主要从事植物分子遗传育种研究．
胡卢巴（ｔｒｉｇｏｎｅｌｌａ ｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ Ｌ．）又名
芸香草、香苜蓿，系豆科蝶形花亚科一年生草本植
物．胡卢巴以种子入药，国内外不少地区均有栽培或
野生资源分布［１］．近年来，对胡卢巴的化学成分、应
用、引种及栽培管理方面的研究不断深入．鲁鑫炎
等［２］对１８个产地的胡卢巴中总黄酮和槲皮素的质
量分数进行测定，表明不同产地间有明显差异．但国
内未见分子标记在胡卢巴上的应用．ＤＮＡ标记系统
为评价资源的遗传差异与多样性提供了有用手
段［３—４］．随机引物扩增多态性 ＤＮＡ 标记（ｒａｎｄｏｍ
ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ，ＲＡＰＤ）是以一系列随
机排列碱基顺序的寡聚核苷酸单链为引物，对研究
的基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，且当某一引物同模
板ＤＮＡ有互补的结合位点，同时这些结合位点在
基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增的分子技术［５］．ＲＡＰＤ
标记不需要专门设计引物，操作简便，所需ＤＮＡ模
板量小，灵敏度高，较适合用于对较大样本进行多态
性检测．Ｒ．Ｍａｎｉｍｅｋａｌａｉ等［６］利用ＲＡＰＤ对部分椰
子品种相互关系进行研究，通过聚类分析得到可靠
椰子品种间亲缘关系．李南珠等［７］利用ＲＡＰＤ引物
对高粱基因组多态性进行分析，发现２７个引物能对
ＤＮＡ扩增，并根据扩增结果发现其中抗性基因与感
性基因的区别．李军等［８］利用ＲＡＰＤ技术对来自宁夏
和内蒙古的枸杞进行了鉴定．陈永久等［９］用ＲＡＰＤ分
析冬虫夏草的遗传分化，从分子水平上分析了冬虫夏
草的分类、起源及进化．吴卫等［１０］应用ＲＡＰＤ分子标
记对鱼腥草种质资源进行检测分析，说明鱼腥草在分
子水平上存在较大差异．目前，ＲＡＰＤ标记已广泛用
于遗传图谱构建、基因定位于克隆、物种亲缘关系与
进化、品种鉴定等领域 ［１１］．笔者在优化ＲＡＰＤ反应
体系的基础上，利用筛选的多态性引物，分析了４０份
胡卢巴种质资源的遗传多样性，旨在利用分子标记技
术高效揭示胡卢巴的遗传差异．
１ 材料与方法
１．１ 材料
４０份胡卢巴种质资源均由宁夏大学农学院实
验室收集，其材料编号及来源见表１．其中，国外种
质为１４份；国内种质为２６份，国内种质中宁夏当地
种质为１４份．
１．２ 试剂与仪器
随机引物（北京奥科生物技术有限责任公司），
Ｔａｑ ＤＮＡ聚合酶和ｄＮＴＰｓ（天根生化科技（北京）
有限公司），ＷＤ９４０２基因扩增仪（北京市博斯拜生
物技术有限公司）．
１．３ 方法
１．３．１ 基因组ＤＮＡ的提取 材料采用随机区组
实验，播种于宁夏大学实验农场，苗期随机取样３０
株，每株取等量叶片混合，用ＣＴＡＢ方法提取基因
组ＤＮＡ［１２］．
宁夏大学学报（自然科学版） 第３２卷
１．３．２ ＲＡＰＤ反应体系和条件 反应体系：１０×
Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ２μＬ，２．５Ｕ／μＬ Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶
０．４μＬ，１５μｍｏｌ／Ｌ引物１μＬ，０．３ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰｓ
１μＬ，１０ｎｇ／μＬ模板ＤＮＡ ２μＬ．
反应条件：９４℃预变性２ｍｉｎ，９４℃变性２０ｓ，
３４℃退火３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，４０个循环；７２℃延
伸１０ｍｉｎ保存于４℃．扩增产物在１．０％琼脂糖凝
胶（含５０μｇ／ｍＬ溴化乙锭）中电泳５０ｍｉｎ，在紫外
反射透射仪下观察并用数码照相机拍照．
１．３．３ 多态性引物序列 从１００条引物中选择带
型分布均匀、多态性水平较高的１９条引物，其序列
如表２～３所示．
１．３．４ 数据统计与分析 ＲＡＰＤ的扩增产物以０，
１，９统计建立数据库．在相同迁移位置，有带的记为
１，无带的记为０，扩增失败或缺失数据的记为９．将
这些数据输入ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ聚类统计软件中进行
聚类分析，获得聚类图．遗传相似系数（ｇｅｎｅｔｉｃｓ
ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，ＧＳ）按公式ＧＳ＝２ Ｎｉｊ／（Ｎｉ＋Ｎｊ）计算，
其中，Ｎｉｊ表示基因型间共有带数目，Ｎｉ 和Ｎｊ 表示
两种质的条带数目．遗传距离（ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｄｉｓｔａｎｃｅ，
ＧＤ）按公式ＧＤ＝１－ＧＳ计算．聚类分析按 ＵＰＧ－
ＭＡ（ｕｎｗｅｉｇｈｔｅｄ ｐａｉｒ ｇｒｏｕｐ ｍｅｔｈｏｄ ａｒｉｔｈｍｅｔｉｃ ａｖ－
ｅｒａｇｅ）方法，应用ＳＴＡＴＩＳＴＩＣＡ统计软件中 Ａｎａｌ－
ｙｓｉｓ命令进行聚类作图［１３］．
表１ 供试胡卢巴种质资源编号和来源
编号 来源 编号 来源 编号 来源 编号 来源
１ 宁夏Ⅰ １１ 宁夏同心县Ⅳ ２１ 甘肃张掖市 ３１ 以色列Ⅰ
２ 宁夏同心县Ⅰ １２ 宁夏固原县 ２２ 内蒙鄂托克 ３２ 利比亚Ⅰ
３ 宁夏同心县Ⅱ １３ 宁夏隆德县Ⅱ ２３ 青海西宁市 ３３ 美国
４ 宁夏陶乐县 １４ 青海海西 ２４ 甘肃玉门市 ３４ 尼泊尔
５ 宁夏彭阳县 １５ 安徽太和县 ２５ 黑龙江孙吴县 ３５ 宁夏航空
６ 宁夏隆德县Ⅰ １６ 河北丰宁县 ２６ 印度Ⅰ ３６ 利比亚Ⅱ
７ 宁夏同心县Ⅲ １７ 河南陕县 ２７ 印度Ⅱ ３７ 摩洛哥Ⅱ
８ 宁夏青铜峡 １８ 内蒙巴彦淖尔盟 ２８ 埃及０ ３８ 以色列Ⅱ
９ 宁夏西吉县 １９ 云南省 ２９ 埃及Ⅱ ３９ 摩洛哥Ⅰ
１０ 宁夏平罗县 ２０ 山东沂水县 ３０ 中东某国 ４０ 加拿大
注：宁夏Ⅱ、利比亚Ⅱ、以色列Ⅱ、摩洛哥Ⅱ分别是宁夏Ⅰ、利比亚Ⅰ、以色列Ⅰ、摩洛哥Ⅰ经航天处理．
表２ ＲＡＰＤ引物及序列
引物 碱基序列（５′－３′） 引物 碱基序列（５′－３′） 引物 碱基序列（５′－３′）
ＡＫ Ａ ２－０２ ＴＧＣＣＧＡＧＣＴＧ ＡＫ Ｊ ４０－１２ ＧＴＣＣＣＧＴＧＧＴ ＡＫ ＡＤ ６９－０６ ＡＡＧＴＧＣＡＣＧＧ
ＡＫ Ａ ３－０４ ＡＡＴＣＧＧＧＣＴＧ ＡＫ Ｎ ４７－１１ ＴＣＧＣＣＧＣＡＡＡ ＡＫ ＡＩ ７５－０８ ＡＡＧＣＣＣＣＣＣＡ
ＡＫ Ａ ５－１１ ＣＡＡＴＣＧＣＣＧＴ ＡＫ Ｘ ５１－０１ ＧＧＣＴＡＡＣＣＧＡ ＡＫ ＡＬ ７８－０９ ＣＡＧＣＧＡＧＴＡＧ
ＡＫ Ｂ １０－０５ ＴＧＣＧＣＣＣＴＴＣ ＡＫ Ｕ ５７－１６ ＣＴＧＣＧＣＴＧＧＡ ＡＫ ＡＳ ８７－１４ ＴＣＧＣＡＧＣＧＴＴ
ＡＫ Ｂ １２－１８ ＣＣＡＣＡＧＣＡＧＴ ＡＫ Ｙ ６１－０７ ＡＧＡＧＣＣＧＴＣＡ ＡＫ ＢＣ ９６－０９ ＧＴＣＡＴＧＣＧＡＣ
ＡＫ Ｈ ２７－０６ ＡＣＧＣＡＴＣＧＣＡ ＡＫ ＡＡ ６３－０４ ＡＧＧＡＣＴＧＣＴＣ ＡＫ ＢＤ ９７－１５ ＴＧＴＣＧＴＧＧＴＣ
ＡＫ Ｊ ３７－０１ ＣＣＣＧＧＣＡＴＡＡ
表３ ＲＡＰＤ引物的多态性分析
引物
条带数
／条
多态性带
／条
多态性带
比例／％
引物
条带数
／条
多态性带
／条
多态性带
比例／％
ＡＫ Ａ ２－０２ ７ ７ １００．００ ＡＫ Ｙ ６１－０７ ６ ２ ３３．３３
ＡＫ Ａ ３－０４ ７ ５ ７１．４２ ＡＫ ＡＡ ６３－０４ ８ ３ ３７．５０
ＡＫ Ａ ５－１１ ６ ２ ３３．３３ ＡＫ ＡＤ ６９－０６ １０ ５ ５０．００
ＡＫ Ｂ １０－０５ ５ １ ２０．００ ＡＫ ＡＩ ７５－０８ ７ ３ ４２．８６
ＡＫ Ｂ １２－１８ ６ ３ ５０．００ ＡＫ ＡＬ ７８－０９ ７ ３ ４２．８６
ＡＫ Ｈ ２７－０６ ８ ５ ６２．５０ ＡＫ ＡＳ ８７－１４ ７ ４ ５７．１４
ＡＫ Ｊ ３７－０１ ４ ４ １００．００ ＡＫ ＢＣ ９６－０９ ６ ４ ６６．６７
ＡＫ Ｊ ４０－１２ ６ ３ ５０．００ ＡＫ ＢＤ ９７－１５ ４ ３ ７５．００
ＡＫ Ｎ ４７－１１ ６ ５ ８３．３３
ＡＫ Ｘ ５１－０１ ５ ５ １００．００ 变 幅 ４～１０ １～７ １４．２９～１００
ＡＫ Ｕ ５７－１６ ７ １ １４．２９ 均 值 ６．４２ ３．５７ ５７．３８
４７
第１期 王掌军等：胡卢巴种质资源ＲＡＰＤ遗传多样性分析
２ 结果与分析
２．１ ＲＡＰＤ引物多态性扩增
１９条ＲＡＰＤ引物在４０份胡卢巴种质资源上共
扩增出１２２条清晰且重复性好的条带，其相对分子
质量为４００～２ ０００ｂｐ，平均每条引物扩增６．４２条
带，其中，６８条带具有多态性，多态性条带比例
（ＰＰＢ）为５７．３８％．编号为 ＡＫ Ｈ ２７－０６引物在４０
份胡卢巴种质资源上扩增结果如图１所示．１９条引
物在４０份胡卢巴种质资源上扩增条带数变幅为４～
１０（表３），多态性条带数少者为１条，多则为７条，
多态性条带比例为１４．２９％～１００％．ＡＫ Ａ ２－０２，
ＡＫ Ｘ ５１－０１两条引物在４０份种质上分别扩增了
７，５条带，所有条带都具有多态性．
Ｍ－ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ（４００～２ ０００ｂｐ）；１～４０－材料编号
图１ ＡＫ Ｈ ２７－０６引物在
４０份胡卢巴种质资源上扩增结果
２．２ 胡卢巴种质资源ＲＡＰＤ遗传多样性
将１２２条带型产生的４ ８８０份数据输入ＳＴＡ－
ＴＩＳＴＩＣＡ统计软件，应用 ＵＰＧＭＡ方法中的遗传
最大距离矩阵选项，计算得到４０份胡卢巴种质的遗
传距离矩阵（表４）．由表４可知，胡卢巴种质资源的
遗传距离（ＧＤ）变幅为０．０２～０．７０（编号６与８，３８
与３９，３与３６），ＧＤ平均值为０．２２．其中，在宁夏种
质之间，ＧＤ变幅从０．０２（编号６与８）到０．３０（编号
５与１３，３５）；在国内其他省份种质之间，ＧＤ 变幅从
０．０４（编号１８与１９，２４，２５）到０．３０（编号１７与２２，
２４，２５）；在国外种质之间，ＧＤ 变幅从０．０２（编号３８
与３９）到０．６２（编号２８与３６）．ＧＤ 变幅从大到小
为：宁夏和国外种质间、国外种质间、宁夏种质间区
外、国内其他省份种质间．
应用ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ命令，用ＵＰＭＧＡ的聚类
方法，对４０份胡卢巴种质资源的ＲＡＰＤ标记数据
进行聚类（图２）．由图２可知，４０份胡卢巴种质资源
被大体上分为了两类，即Ｉ类包括３份国外材料（编
号３３，４０，３６）；ＩＩ类包括３７份材料，可大体上分为
３个亚类，分别是来源为宁夏、国内其他省份和国外
类型．值得一提的是：①青海海西（编号１４）和河南
陕县（编号１７）聚在了宁夏类型中，这可能是因为地
域近，相互间引种导致材料间亲缘关系较近；②宁夏
Ⅱ（编号３５）和国外材料聚在一起，说明高空环境使
材料发生了诱变，使其基因发生突变；青海西宁（编
号２３）也与国外材料聚在一起，而没有和青海海西
（编号１４）聚在一起，也没有聚在宁夏类型中，可能
是因为它来源于国外，或者也有其他因素诱导基因
发生了变异；③在３个亚类间存在一些过渡材料，在
宁夏和国内其他省份种质间为宁夏隆德县ＩＩ（编号
１３）和安徽太和县（编号１５），在国内其他省份和国
外种质间为内蒙鄂托克前旗（编号２２）和利比亚Ⅰ
（编号３２），这是因为相互间引种，使这些材料亲缘
关系和基因型相近所致；④在４个航空处理材料中，
宁夏Ⅱ与原材料宁夏Ⅰ在聚类图上分布最远，利比
亚Ⅱ和利比亚Ⅰ次之，以色列Ⅱ与以色列Ⅰ、洛哥Ⅱ
与摩洛哥Ⅰ分布较近，说明高空环境使其基因突变，
突变由大到小为：宁夏、利比亚、以色列、摩洛哥，这
正是胡卢巴航空育种的利用价值所在．
图２ １９个ＲＡＰＤ引物在４０份胡卢巴上扩增所得聚类图
５７
宁夏大学学报（自然科学版） 第３２卷
表４ 基于ＲＡＰＤ标记的４０份胡卢巴种质间遗传距离矩阵
１ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９ ２０ ２１ ２２ ２３ ２４ ２５ ２６ ２７ ２８ ２９ ３０ ３１ ３２ ３３ ３４ ３５ ３６ ３７ ３８ ３９ ４０
１ ０．００ ０．１７ ０．２０ ０．２０ ０．０７ ０．２３ ０．２１ ０．２３ ０．２３ ０．２０ ０．１９ ０．２３ ０．２５ ０．２０ ０．２５ ０．２３ ０．２０ ０．１９ ０．１６ ０．１６ ０．２２ ０．２４ ０．１８ ０．２２ ０．２３ ０．２０ ０．２２ ０．２５ ０．２２ ０．１７ ０．１７ ０．２４ ０．３４ ０．２２ ０．２５ ０．５２ ０．２５ ０．１６ ０．１７ ０．４０
２ ０．００ ０．０３ ０．０６ ０．２５ ０．０６ ０．０７ ０．０７ ０．０７ ０．１１ ０．１０ ０．１６ ０．１３ ０．１３ ０．１４ ０．１２ ０．３２ ０．１６ ０．１６ ０．１９ ０．１６ ０．１１ ０．１２ ０．１６ ０．１６ ０．１６ ０．１６ ０．１１ ０．２８ ０．１８ ０．２０ ０．１３ ０．３９ ０．２０ ０．１６ ０．６６ ０．２４ ０．２３ ０．２３ ０．４９
３ ０．００ ０．０４ ０．２８ ０．０４ ０．０６ ０．０６ ０．０７ ０．１２ ０．１１ ０．１６ ０．１１ ０．１３ ０．１２ ０．１１ ０．３５ ０．１６ ０．１７ ０．１７ ０．１８ ０．１３ ０．１６ ０．１８ ０．１７ ０．１８ ０．１８ ０．１４ ０．３１ ０．２１ ０．２３ ０．１６ ０．４０ ０．１８ ０．１６ ０．７０ ０．２５ ０．２６ ０．２６ ０．５２
４ ０．００ ０．２５ ０．０５ ０．０８ ０．０７ ０．０７ ０．１１ ０．１１ ０．１３ ０．０９ ０．１１ ０．１０ ０．１３ ０．３３ ０．１９ ０．２０ ０．１８ ０．１６ ０．１２ ０．１８ ０．１６ ０．１５ ０．１６ ０．１６ ０．１５ ０．２９ ０．１９ ０．２０ ０．１７ ０．３９ ０．１９ ０．１６ ０．６７ ０．２３ ０．２５ ０．２４ ０．５０
５ ０．００ ０．２９ ０．２７ ０．２９ ０．２９ ０．２０ ０．２３ ０．２７ ０．３０ ０．２５ ０．３０ ０．２９ ０．１４ ０．２３ ０．２２ ０．２２ ０．２５ ０．２６ ０．２２ ０．２８ ０．２７ ０．２８ ０．２８ ０．３２ ０．２５ ０．２３ ０．２５ ０．３０ ０．３４ ０．３０ ０．３０ ０．４７ ０．２７ ０．２１ ０．２１ ０．３９
６ ０．００ ０．０５ ０．０２ ０．０３ ０．１０ ０．１２ ０．１３ ０．１１ ０．１２ ０．１３ ０．１３ ０．３６ ０．１７ ０．１８ ０．２１ ０．１９ ０．１２ ０．１８ ０．１９ ０．１８ ０．１９ ０．１９ ０．１５ ０．３０ ０．２２ ０．２４ ０．１７ ０．４３ ０．２０ ０．１５ ０．６９ ０．２６ ０．２９ ０．２７ ０．５３
７ ０．００ ０．０７ ０．０８ ０．１５ ０．１２ ０．１５ ０．１１ ０．１４ ０．１３ ０．１１ ０．３４ ０．１７ ０．１８ ０．２０ ０．２０ ０．１２ ０．１８ ０．２０ ０．２０ ０．２０ ０．１７ ０．１６ ０．３０ ０．２２ ０．２５ ０．１９ ０．３９ ０．２０ ０．１６ ０．６６ ０．２５ ０．２７ ０．２５ ０．５２
８ ０．００ ０．０３ ０．１０ ０．１２ ０．１３ ０．１２ ０．１１ ０．１１ ０．１１ ０．３４ ０．１６ ０．１６ ０．２０ ０．１９ ０．１２ ０．１８ ０．１９ ０．２０ ０．２０ ０．２０ ０．１６ ０．２９ ０．２４ ０．２４ ０．１７ ０．４３ ０．２２ ０．１６ ０．６９ ０．２６ ０．２７ ０．２５ ０．５３
９ ０．００ ０．１０ ０．１４ ０．１５ ０．１４ ０．１４ ０１５ ０．１５ ０．３６ ０．１９ ０．２０ ０．２３ ０．２０ ０．１４ ０．２０ ０．２０ ０．２０ ０．２０ ０．２０ ０．１６ ０．３０ ０．２４ ０．２５ ０．１９ ０．４４ ０．２４ ０．１８ ０．６９ ０．２８ ０．２９ ０．２７ ０．５５
１０ ０．００ ０．１６ ０．１８ ０．１９ ０．１６ ０．１８ ０．１６ ０．２８ ０．２０ ０．１８ ０．２３ ０．２０ ０．１６ ０．２０ ０．２５ ０．２３ ０．２４ ０．２４ ０．２０ ０．３４ ０．２７ ０．２５ ０．２０ ０．４３ ０．２４ ０．２０ ０．６７ ０．３０ ０．２９ ０．２７ ０．５５
１１ ０．００ ０．０７ ０．０７ ０．０７ ０．０７ ０．０９ ０．２７ ０．１３ ０．１２ ０．１４ ０．１３ ０．１３ ０．１４ ０．１５ ０．１２ ０．１６ ０．１３ ０．１６ ０．２３ ０．１６ ０．２０ ０．１５ ０．３９ ０．２１ ０．１６ ０．６３ ０．１９ ０．２１ ０．２０ ０．４６
１２ ０．００ ０．０７ ０．０６ ０．０８ ０．１０ ０．２８ ０．１４ ０．１５ ０．１３ ０．１２ ０．１７ ０．２０ ０．１７ ０．１５ ０．１７ ０．１６ ０．１８ ０．２０ ０．２０ ０．２０ ０．１９ ０．４１ ０．２０ ０．１５ ０．６１ ０．２０ ０．２４ ０．２２ ０．４５
１３ ０．００ ０．０８ ０．０４ ０．０７ ０．３０ ０．１３ ０．１４ ０．１２ ０．１１ ０．１３ ０．１９ ０．１３ ０．１１ ０．１５ ０．１３ ０．１４ ０．２５ ０．１８ ０．２０ ０．１３ ０．４２ ０．１６ ０．１２ ０．６３ ０．１９ ０．２５ ０．２３ ０．４８
１４ ０．００ ０．０６ ０．０７ ０．２５ ０．１０ ０．１１ ０．０９ ０．１１ ０．１３ ０．１６ ０．１５ ０．１６ ０．１８ ０．１６ ０．１７ ０．２３ ０．２０ ０．２０ ０．１６ ０．３９ ０．２０ ０．１４ ０．６３ ０．２０ ０．２５ ０．２３ ０．４６
１５ ０．００ ０．０５ ０．２８ ０．１１ ０．１１ ０．１０ ０．１２ ０．１４ ０．２０ ０．１２ ０．１１ ０．１６ ０．１２ ０．１３ ０．２５ ０．１７ ０．１９ ０．１４ ０．４１ ０．１６ ０．１３ ０．６４ ０．１８ ０．２２ ０．２０ ０．４７
１６ ０．００ ０．２８ ０．０６ ０．０８ ０．０８ ０．１２ ０．１２ ０．１６ ０．１６ ０．１５ ０．１７ ０．１４ ０．１３ ０．２４ ０．１９ ０．１９ ０．１２ ０．３９ ０．１６ ０．１０ ０．６４ ０．２０ ０．２４ ０．２２ ０．４７
１７ ０．００ ０．２２ ０．２０ ０．２１ ０．２５ ０．３０ ０．２５ ０．３０ ０．３０ ０．３２ ０．３２ ０．３４ ０．２２ ０．２４ ０．２４ ０．３２ ０．４１ ０．３４ ０．３３ ０．４１ ０．３０ ０．２９ ０．２７ ０．４２
１８ ０．００ ０．０４ ０．０７ ０．１６ ０．１６ ０．１４ ０．１８ ０．１９ ０．２１ ０．１８ ０．１７ ０．２１ ０．１６ ０．１８ ０．１５ ０．４０ ０．２０ ０．１２ ０．５８ ０．１９ ０．２１ ０．２０ ０．４３
１９ ０．００ ０．０７ ０．１９ ０．１９ ０．１３ ０．２０ ０．２１ ０．２２ ０．２０ ０．１８ ０．２２ ０．１７ ０．１６ ０．１６ ０．３９ ０．１９ ０．１３ ０．５７ ０．２１ ０．２０ ０．１９ ０．４２
２０ ０．００ ０．１４ ０．２０ ０．１６ ０．１７ ０．１８ ０．１９ ０．１９ ０．２０ ０．２０ ０．１７ ０．１４ ０．１７ ０．３８ ０．１６ ０．１５ ０．５７ ０．２０ ０．１９ ０．１９ ０．４２
２１ ０．００ ０．０８ ０．１４ ０．０８ ０．０６ ０．１１ ０．１３ ０．１２ ０．２０ ０．１６ ０．１３ ０．１１ ０．３７ ０．１５ ０．１４ ０．５５ ０．１７ ０．１８ ０．１８ ０．４１
２２ ０．００ ０．１２ ０．１１ ０．１１ ０．１５ ０．１５ ０．１１ ０．２５ ０．１８ ０．１８ ０．１０ ０．３９ ０．１６ ０．１２ ０．６０ ０．２０ ０．２１ ０．２０ ０．４８
２３ ０．００ ０．１４ ０．１６ ０．１７ ０．１９ ０．１５ ０．１９ ０．１６ ０．１２ ０．１４ ０．３８ ０．２０ ０．１８ ０．５６ ０．１８ ０．１７ ０．１７ ０．４５
２４ ０．００ ０．０４ ０．０８ ０．１０ ０．１１ ０．２０ ０．１１ ０．１３ ０．１０ ０．４０ ０．１５ ０．１４ ０．５５ ０．１２ ０．１３ ０．１３ ０．４１
２５ ０．００ ０．０７ ０．０９ ０．１０ ０．２２ ０．１２ ０．１４ ０．１１ ０．３９ ０．１４ ０．１３ ０．５６ ０．１３ ０．１６ ０．１６ ０．４２
２６ ０．００ ０．０７ ０．０７ ０．２１ ０．１１ ０．１１ ０．１１ ０．４３ ０．１３ ０．１４ ０．５８ ０．１７ ０．１６ ０．１８ ０．４６
２７ ０．００ ０．０７ ０．２０ ０．０８ ０．１５ ０．１１ ０．４０ ０．１８ ０．１４ ０．５８ ０．１４ ０．１８ ０．１６ ０．４４
２８ ０．００ ０．２２ ０．１１ ０．１４ ０．０７ ０．４１ ０．１４ ０．１１ ０．６２ ０．２１ ０．２０ ０．２０ ０．４７
２９ ０．００ ０．１１ ０．１６ ０．２１ ０．３７ ０．３０ ０．２５ ０．４５ ０．１９ ０．１６ ０．１５ ０．３４
３０ ０．００ ０．１３ ０．１５ ０．３７ ０．２０ ０．１７ ０．５２ ０．１７ ０．１５ ０．１３ ０．３９
３１ ０．００ ０．１０ ０．４０ ０．１６ ０．１４ ０．５３ ０．１７ ０．１５ ０．１５ ０．４１
３２ ０．００ ０．４０ ０．１６ ０．０９ ０．６０ ０．１７ ０．１８ ０．１８ ０．４６
３３ ０．００ ０．４２ ０．４１ ０．４４ ０．３８ ０．３７ ０．３７ ０．２２
３４ ０．００ ０．１１ ０．５７ ０．２２ ０．２０ ０．２１ ０．４６
３５ ０．００ ０．５９ ０．２０ ０．２４ ０．２２ ０．４５
３６ ０．００ ０．４８ ０．４７ ０．４７ ０．３５
３７ ０．００ ０．０９ ０．０７ ０．３７
３８ ０．００ ０．０２ ０．３４
３９ ０．００ ０．３４
４０ ０．００
３ 讨论与结论
影响ＲＡＰＤ分析技术稳定性的原因是多方面
的，如反应体系中 Ｔａｑ ＤＮＡ 聚合酶用量、引物浓
度、Ｍｇ２＋浓度、ｄＮＴＰｓ浓度、模板ＤＮＡ用量；反应
条件中退火温度、循环数、扩增时间，以及实验室条
件和操作者的能力等．所以，利用ＲＡＰＤ标记进一
步研究时，建立稳定的反应体系和条件，筛选多态性
丰富、检测效率高的引物是实验的关键．
该实验利用优化的反应体系和条件，利用来源
地域差异较大的两份模板ＤＮＡ对１００条随机引物
逐一筛选，筛选出１９条重复、稳定的ＲＡＰＤ多态性
６７
第１期 王掌军等：胡卢巴种质资源ＲＡＰＤ遗传多样性分析
随机引物；在４０份胡卢巴种质资源上共扩增出１２２
条清晰且重复性好的条带，平均每条引物扩增６．４２
条带，其中６８条带具有多态性，ＰＰＢ为６０％；计算
出胡卢巴种质资源的ＧＤ变幅为０．０２～０．７０，平均
为０．２２，遗传距离变幅由大到小为：宁夏和国外种
质间、国外种质间、宁夏种质间、国内其他省份种质
间．４０份胡卢巴种质资源被大体上分为了两类：Ｉ类
包括３份国外材料；ＩＩ类包括３７份材料，ＩＩ类又可
分为３个亚类，即来源为宁夏、国内其他省份和国
外．因此，利用ＲＡＰＤ标记技术可从分子水平上对
胡卢巴进行遗传多样性分析，为胡卢巴的起源和遗
传多样性研究提供可靠的分子手段．在今后的研究
中，应加强对国内其他省份材料的收集，以及在同一
省份尽可能利用有价值的不同材料，同时，加大对胡
卢巴航天育种的研究．
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Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｕｓｉｎｇ ＲＡＰＤ ｉｎ ｔｈｅ Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ
Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｔｒｉｇｏｎｅｌａｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ Ｌｉｎｎ．
ＷａｎｇＺｈａｎｇｊｕｎ，Ｌｉｕ Ｐｉｎｇ，Ｙａｎｇ Ｃｕｉ，Ｚｈａｎｇ Ｙｕｎｘｉａ
（Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｎｉｎｇｘｉａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙｉｎｃｈｕａｎ ７５００２１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｗｉｔｈ ＲＡＰＤ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｒｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｔｒｉｇｏｎｅｌａ ｆｏｅｎｕｍ－
ｇｒａｅｃｕｍ Ｌｉｎｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １９ｐｒｉｍｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｄｉｓｔａｎｃｅ（ＧＤ）ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｒｔｙ ｇｅｒｐｌａｓｍ
ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｔ．ｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ．ｗｅｒｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ０．０２ａｎｄ ０．７０，ｔｈｅ ａｍｐｌｉｔｕｄｅ ｏｆ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｏｒｉｇｉｎ ｗａｓ
Ｎｉｎｇｘｉａ ａｎｄ ａｂｒｏａｄ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ，ａｂｒｏａｄ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ，Ｎｉｎｇｘｉａ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ，ｏｔｈｅｒ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ ｉｎ
Ｃｈｉｎａ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｆｏｒｔｙ ｇｅｒｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ｏｆ Ｔ．ｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｔｗｏ ｋｉｎｄｓ：ｔｈｅ
ｆｉｒｓｔ ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ３ａｂｒｏａｄ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ；ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄ ｗａｓ ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ ｏｆ ３７ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ ｔｈａｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ
ｔｈｒｅｅ ｓｕｂ－ｋｉｎｄｓ，ｉｅ，Ｎｉｎｇｘｉａ，ｏｔｈｅｒ ｐｒｏｖｉｎｃｅｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ａｎｄ ａｂｒｏａｄ ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｔｙｐｅ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｔｒｉｇｏｎｅｌａ ｆｏｅｎｕｍ－ｇｒａｅｃｕｍ；ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅ；ＲＡＰＤ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
（责任编辑、校对 高继红）
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