全 文 ：书紫花苜蓿多元杂交后代的遗传多样性
李　哲，师尚礼，王　虹
（甘肃农业大学 草业学院／草业生态系统教育部重点实验室／甘肃省草业工程实验室／中－美草地畜牧业
可持续发展研究中心，甘肃 兰州　７３００７０）
　　摘要：研究了苜蓿品种甘农３号、甘农５号及游客杂交后代与亲本的亲缘关系，选用ＩＳＳＲ分子标记
进行遗传多样性分析，筛选出４条引物检测供试材料的遗传多样性。结果表明：４条引物共扩增出１２２
个位点，均为多态性位点，共扩增出２２条条带，其中，２１条为多态行条带，多态性比率为９５．４５％，供试
材料遗传多样性丰富。通过计算后代株系分别与３个亲本的遗传距离，速生１６＃与３亲本的遗传距离
最小，为０．３２７；与３个亲本的平均遗传距离最大的是大叶１＃，遗传距离为０．７５２。聚类分析结果表明：
３９份材料被聚为５类，Ａ类包括速生１＃、速生６＃等１４个株系；Ｂ类包括速生２＃、速生３＃等５个株系；Ｃ
类包括速生４＃、速生１１＃等１３个株系；Ｄ类包括速生１７＃、速生２６＃等４个株系；速生１８＃单独被聚为
一类。
　　关键词：苜蓿；遗传多样性；简单重复序列间扩增
　　中图分类号：Ｓ　５４１．０３５；Ｑ　７８　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００９－５５００（２０１３）０４－０００１－０６
　　收稿日期：２０１３－０４－１６；修回日期：２０１３－０４－２３
　　 基 金 项 目：农 业 部 “牧 草 种 质 资 源 保 种 繁 殖 项 目”
（ＮＢ２１３０１３５）和国家牧草产业技术体系项目
（ＣＡＲＳ－３５）资助
　　作者简介：李哲（１９８７－），女，在读硕士。
Ｅ－ｍａｉｌ：４１０５６７９３＠ｑｑ．ｃｏｍ
师尚礼为通讯作者。
　　紫花苜蓿由于其优良的营养品质，作为牧草和绿
肥作物，在全世界范围内广泛种植，在我国的栽培历史
也已有２０００多年，主要分布在西北、华北、东北、江淮
流域等地。随着苜蓿的大面积栽培和集约化生产，生
产中亟待解决的是抗虫病、抗逆性、营养成分含量和产
量问题，解决上述问题的最有效方法是培育新品种［１］。
育种突破性的成就取决于对苜蓿关键性基因资源的发
掘和利用，研究种群遗传多样性，形态标记是最简单也
是最直观的方法，但是由于紫花苜蓿是异花授粉，并且
涉及到自然选择与遗传背景的问题，仅仅用形态标记
来分析遗传多样性是有偏差的。随着人类评价种群遗
传多样性方法的改进和提升，分子标记进入研究遗传
多样性的领域，弥补了形态标记的缺陷［２］。１９９４年，
简单重复序列间扩增（ＩＳＳＲ）分子标记技术被提出［３］，
其优点是操作简单、多态性和重复性好，引物随机，
因而被广泛应用于遗传多样性分析、亲缘关系探究
等领域。孟芳等［４］利用ＩＳＳＲ分子标记技术，扩增出
６个与抗褐斑病相关性较大的引物扩增序列；郭计华
等［５］运用ＩＳＳＲ分子标记对２８份香蕉种质材料进行
了遗传多样性检测，筛选出的８个多态性引物，能够
很好的描述种质材料间的遗传多样性和亲缘关系远
近；李红等［６］利用ＩＳＳＲ分子标记技术对国内外的３９
份紫花苜蓿材料进行了遗传多样性研究，共有１０个
引物扩增出多态性条带，再次说明了３９份苜蓿材料
的遗传关系，为改良育种提供了强有力的依据。因
此，此次研究利用ＩＳＳＲ分子标记技术对３亲本及其
杂交后代等３９份紫花苜蓿材料进行更深层次的遗
传多样性分析，辅助形态标记，为了解后代种质构建
和加快育种进程提供依据。
１　材料和方法
１．１　材料
采用紫花苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｓａｔｉｖａ）灌区直立丰产
型品种甘农３号（Ｇａｎｎｏｎｇ　Ｎｏ．３），中度秋眠５－６级
速生型品种游客（Ｔｏｕｒｉｓｔ）和高秋眠８－９级速生抗蓟
马品种甘农５号（Ｇａｎｎｏｎｇ　Ｎｏ．５）为亲本材料。
１第３３卷　第４期　　　　　　　　　　　草 原 与 草 坪２０１３年
DOI:10.13817/j.cnki.cyycp.2013.04.005
２００８年７月，种子以１∶１∶１的比例混合播种，行
距８０ｃｍ，株距２５～３０ｃｍ，２００９年进行天然自由传粉
杂交并收获第１代种子，２００９年７月中旬种植当年收
获的第１代杂交种子，２０１０年开花期依据生长速度、
株高、株型、产量、叶形、叶量、茎叶比等指标进行单株
选择挂签，选择１３５个优良单株，成熟后单独收种子、
单独贮藏，２０１１年春季种植成株系行，初选出３６个株
系与３个亲本作为试验材料（表１）。
表１　供试材料名录和来源
Ｔａｂｌｅ１　Ｔｈｅ　ｌｉｓｔ　ｏｆ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｏｒｉｇｉｎ
编号 株系名称 来源 编号 株系名称 来源 编号 株系名称 来源 编号 株系名称 来源
１ 速生１＃ 杂交后代 １１ 速生１１＃ 杂交后代 ２１ 速生２１＃ 杂交后代 ３１ 白花２＃ 杂交后代
２ 速生２＃ 杂交后代 １２ 速生１２＃ 杂交后代 ２２ 速生２２＃ 杂交后代 ３２ 白花３＃ 杂交后代
３ 速生３＃ 杂交后代 １３ 速生１３＃ 杂交后代 ２３ 速生２３＃ 杂交后代 ３３ 大叶１＃ 杂交后代
４ 速生４＃ 杂交后代 １４ 速生１４＃ 杂交后代 ２４ 速生２４＃ 杂交后代 ３４ 大叶２＃ 杂交后代
５ 速生５＃ 杂交后代 １５ 速生１５＃ 杂交后代 ２５ 速生２５＃ 杂交后代 ３５ 大叶３＃ 杂交后代
６ 速生６＃ 杂交后代 １６ 速生１６＃ 杂交后代 ２６ 速生２６＃ 杂交后代 ３６ 大叶４＃ 杂交后代
７ 速生７＃ 杂交后代 １７ 速生１７＃ 杂交后代 ２７ 多叶１＃ 杂交后代 ３７ 甘农３号
甘肃农业
大学
８ 速生８＃ 杂交后代 １８ 速生１８＃ 杂交后代 ２８ 多叶２＃ 杂交后代 ３８ 甘农５号
甘肃农业
大学
９ 速生９＃ 杂交后代 １９ 速生１９＃ 杂交后代 ２９ 直立１＃ 杂交后代 ３９ 游客 荷兰
１０ 速生１０＃ 杂交后代 ２０ 速生２０＃ 杂交后代 ３０ 白花１＃ 杂交后代
１．２　试验方法
１．２．１　ＤＮＡ提取　采用ＣＴＡＢ法［７］。
１．２．２　ＤＮＡ检测　将提取的ＤＮＡ放在０．８％琼脂
糖胶上电泳，结束后用凝胶成像仪拍照观察；利用紫外
分光光度计测定Ｄ２６０ｎｍ与Ｄ２８０ｎｍ，检测提取出的ＤＮＡ
的质量与浓度［８］。
１．２．３　引物合成与筛选　根据加拿大哥伦比亚大学
公布的引物序列［９］，ＩＳＳＲ引物的合成由上海生工生物
有限公司合成，共１００条，从中筛选了４条ＰＣＲ扩增
产物条带较清晰、多态性较好的ＩＳＳＲ引物用于供试
紫花苜蓿遗传多样性分析。
１．２．４　ＩＳＳＲ扩增和检测　ＩＳＳＲ反应体系为２５μＬ，
包含为模板ＤＮＡ　２μＬ、ＩＳＳＲ引物１μＬ、预混酶１２．５
μＬ、双蒸水９．５μＬ。ＰＣＲ扩增条件为预变性９４℃４
ｍｉｎ，然后，循环９４℃１ｍｉｎ，４５～６０℃４０ｓ，７２℃１～
２ｍｉｎ，共４０轮循环。循环结束后，７２℃１０ｍｉｎ，４℃
保存。取ＰＣＲ产物７μＬ于１．６％琼脂糖胶上电泳，电
泳结束后用凝胶成像仪观察、拍照。
１．２．５　数据统计分析　对强带和清晰弱带进行统计
赋值，有带的计为“１”，无带的计为“０”，统计ＰＣＲ扩增
产物的条带总数和多态性条带数［１０］。
多态性位点比率Ｐ＝ｉ／ｊ×１００％
式中：ｉ为多态性位点数，ｊ为统计出的总位点数［１１］。
　　用 Ｎｔｓｙｓ－ｐｃ２．１软件进行分析，计算 Ｎｅｉ’ｓ遗传
距离，使用 ＵＰＭＧＡ法进行聚类分析，建立聚类图。
遗传相似系数ＧＳ＝２　Ｎｉｊ／（Ｎｉ＋Ｎｊ）
式中：Ｎｉ和Ｎｊ分别为ｉ和ｊ两材料的总等位位点数，
Ｎｉｊ为ｉ和ｊ两材料的共有等位位点数。
遗传距离ＧＤ＝１－ＧＳ［１２］。
２　结果与分析
２．１　ＤＮＡ的检测结果
检测提取出的３９份供试材料的ＤＮＡ样品，各个
材料均有３个重复，挑选每个材料条带最清晰、无降
解、无拖尾现象的ＤＮＡ样品，ＤＮＡ主带清晰，点样孔
干净，表明ＤＮＡ片段大小均一，纯度较高。总 ＤＮＡ
颜色呈无色稍带乳白色，Ｄ２６０ｎｍ／Ｄ２８０ｎｍ值为１．８０％～
１．８８，０．８％琼脂糖凝胶电泳检测的结果理想，符合ＩＳ－
ＳＲ分子标记分析的要求。
２．２　ＰＣＲ扩增产物多态性分析
利用供试材料基因组ＤＮＡ进行预扩增，筛选引
物，共获得了４条扩增效果较理想的引物。用这４条
引物分别对３９份材料进行扩增检测并且进行统计分
析。检测结果（表２），４条引物共检测到２７９个ＤＮＡ
扩增位点，每个引物平均扩增出７０个位点。扩增出多
态性位点２４０个，平均每条引物扩增出６０个多态性位
点。４条引物共检测到２２条ＤＮＡ条带，平均每个引
物扩增出６个条带，其中，多态性条带总数为２１条，每
２ 　　　　　　ＧＲＡＳＳＬＡＮＤ　ＡＮＤ　ＴＵＲＦ（２０１３）　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．４
个引物平均扩增出５条多态性条带，多态性比率比较
高，达到９５．４５％。４条引物产生的带数３～９条，变幅
较大。４条引物中，扩增出片段最多的引物是８４５号
引物，共９条ＤＮＡ条带，全为多态性条带；扩增出片
段最少的８４７号引物，只有３条ＤＮＡ条带，并且多态
性条带仅有２条。除了扩增出条带数最少的８４７号引
物，其余３条引物扩增产物的多态性比率均为１００％，
多态性信息含量较高，说明甘农３号、甘农５号、游客
以及其杂交后代之间的异质性较高，遗传基础相对较
广，有较大的差异，遗传多样性非常丰富。
图１　引物８４５ＰＣＲ扩增检测
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒ　８４５
表２　３９份苜蓿种质的ＩＳＳＲ～ＰＣＲ带谱分析
Ｔａｂｌｅ　２　ＩＳＳＲ－ＰＣＲ　ｓｐｅｃｔｒｕｍ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　３９ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ
引物编号 引物序列 扩增条带数 多态性带 扩增位点数 多态性位点数 多态百分率／％
８４５ ＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＣＴＲＧ　 ９　 ９　 １２２　 １２２　 １００
８４７ ＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＲＣ　 ３　 ２　 ４５　 ６　 ６６．６７
８５５ ＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣＹＴ　 ６　 ６　 ５８　 ５８　 １００
８５９ ＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＴＧＲＣ　 ４　 ４　 ５４　 ５４　 １００
总计 ２２　 ２１　 ２７９　 ２４０　 ９５．４５
平均 ６　 ５　 ７０　 ６０　 ８３．３３
２．３　各供试材料的遗传距离分析
研究多元杂交后代与其亲本之间的亲缘关系与遗
传程度，故计算了各个杂交后代分别与甘农３号，甘农
５号和游客苜蓿之间的距离（表３）。各杂交后代与亲
本甘农３号的遗传距离分布在０．２５０～０．７８９，其中，
速生１７号与甘农３号的遗传距离最小，为０．２５０；而
速生４号与亲本甘农３号之间的遗传距离最大，为
０．７８９。速生１７号与甘农３号遗传距离较近，差异较
小，遗传相似度较高，亲缘关系比较近，很大程度上遗
传了甘农３号的基因；而速生４＃与甘农３号遗传距离
较远，差异较大，遗传相似度较小，亲缘关系比较疏远，
在杂交过程中发生了较大的性状分离。各杂交后代与
亲本甘农５号的遗传距离分布在０．２９４～０．８５７，速生
７号与亲本甘农５号的遗传距离最近，为０．２９４，差异
较小，遗传相似度较高，亲缘关系比较近，遗传甘农５
号基因的程度较高；而大叶１号与甘农５号遗传距离
最远，为０．８５７，差异较大，遗传相似系数仅为０．１４３，
遗传相似度较小，亲缘关系比较疏远，在杂交过程中发
生了较大的性状分离。各杂交后代与亲本游客苜蓿的
遗传距离分布在０．１４３～０．８５７，速生１３号、速生１９
号与亲本游客苜蓿的遗传距离最近，为０．１４３，差异较
小，遗传相似度较高，亲缘关系比较近，遗传游客苜蓿
基因的程度较高；而多叶１号、多叶２号都与游客苜蓿
的遗传距离最远，为０．８５７，差异较大，遗传相似系数
３第３３卷　第４期　　　　　　　　　　　草 原 与 草 坪２０１３年
表３　各株系分别与亲本的遗传距离
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｓｔｒａｉｎｓ　ａｎｄ　ｐａｒｅｎｔｓ
苜蓿材料 甘农３号 甘农５号 游客 苜蓿材料 甘农３号 甘农５号 游客
速生１＃ ０．５７８　 ０．５００　 ０．５３８ 速生２１＃ ０．３６４　 ０．６８４　 ０．３７５
速生２＃ ０．４７３　 ０．５００　 ０．６９２ 速生２２＃ ０．４２９　 ０．４４４　 ０．３３３
速生３＃ ０．６８４　 ０．６２５　 ０．５３８ 速生２３＃ ０．４２９　 ０．５５６　 ０．４６７
速生４＃ ０．７８９　 ０．７５０　 ０．２３１ 速生２４＃ ０．６００　 ０．６４７　 ０．５７１
速生５＃ ０．７７８　 ０．６００　 ０．６６７ 速生２５＃ ０．４２９　 ０．３３３　 ０．２７３
速生６＃ ０．５７８　 ０．３７５　 ０．３８５ 速生２６＃ ０．４００　 ０．５２９　 ０．７１４
速生７＃ ０．４００　 ０．２９４　 ０．７１４ 多叶１＃ ０．４００　 ０．５２９　 ０．８５７
速生８＃ ０．６６７　 ０．６００　 ０．８３３ 多叶２＃ ０．５００　 ０．５２９　 ０．８５７
速生９＃ ０．６４７　 ０．５７１　 ０．６３６ 直立１＃ ０．４００　 ０．６４７　 ０．５７１
速生１０＃ ０．５００　 ０．４１２　 ０．４２９ 白花１＃ ０．３３３　 ０．６８４　 ０．５００
速生１１＃ ０．７５０　 ０．６９２　 ０．２００ 白花２＃ ０．５７８　 ０．６２５　 ０．６９２
速生１２＃ ０．５７８　 ０．５００　 ０．２３１ 白花３＃ ０．７３３　 ０．５００　 ０．７７８
速生１３＃ ０．６００　 ０．６４７　 ０．１４３ 大叶１＃ ０．７６５　 ０．８５７　 ０．６３６
速生１４＃ ０．５２３　 ０．４４４　 ０．２００ 大叶２＃ ０．３６４　 ０．４７４　 ０．３７５
速生１５＃ ０．４１７　 ０．４２９　 ０．３３３ 大叶３＃ ０．３００　 ０．２９４　 ０．５７１
速生１６＃ ０．３６４　 ０．３６８　 ０．２５０ 大叶４＃ ０．２７２　 ０．３６８　 ０．３７５
速生１７＃ ０．２５０　 ０．４２９　 ０．４４４ 甘农３　 ０．２１７　 ０．５７９
速生１８＃ ０．３８５　 ０．３９１　 ０．６００ 甘农５＃ ０．２１７　 ０．５００
速生１９＃ ０．５００　 ０．４１２　 ０．１４３ 游客 ０．５７９　 ０．５００
速生２０＃ ０．３９１　 ０．６００　 ０．４１２
仅为０．１４３，遗传相似度较小，亲缘关系比较疏远，在
杂交过程中发生了较大的性状分离。
研究比较了甘农３号，甘农５号和游客苜蓿３个
亲本之间的亲缘关系远近。甘农３号和甘农５号都与
游客之间的遗传距离较远，甘农３号与甘农５号的遗
传距离较近，这样的亲本的选择，很符合杂交育种的要
求，后代杂种优势比较明显（表３）。
２．４　聚类结果及分析
４条ＩＳＳＲ引物在遗传距离０．５９～１．００处能将
３９份苜蓿材料完全分开。遗传距离为０．５９处，３９份
供试苜蓿材料被分为２个类群；遗传距离为０．６４处供
试苜蓿材料被分为３个类群；遗传距离为０．６６处供试
苜蓿材料被分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ等５个类群。Ａ类群包
括１４份材料，由速生１＃、速生６＃、速生５＃、白花３＃、
速生２４＃、多叶１＃、多叶２＃、速生７＃、速生２５＃、大叶
３＃、大叶４＃、甘农５号、速生２３＃和白花２＃组成；Ｂ类
群包括５份材料，由速生２＃、速生３＃、速生１０＃、速生
８＃和大叶１＃组成；Ｃ类群包括１３份材料，由速生４＃、
速生１１＃、速生１２＃、速生１３＃、游客、速生１９＃、速生
１４＃、速生２２＃、速生１５＃、速生２０＃、速生２１＃、速生
９＃和直立１＃组成；Ｄ类群包括４份材料，由速生１７＃、
速生２６＃、白花１＃和甘农３＃组成。Ｅ类群单独由速生
１８＃组成。供试材料中，速生１８＃单独成为一类群，与
其他４个类群的遗传距离最远，速生１２号与速生１３
号遗传距离最近（图２）。
３　讨论
分子标记是遗传标记中比较重要的一种手段，它
被广泛的应用于品种鉴定、种质资源考察以及遗传多
样性分析中，可以辅助传统的形态学标记方法从ＤＮＡ
的微观水平上揭示受检品种间的相关性和差异性，来
检测品种间的亲缘关系远近、杂交后代筛选［１３］。研究
采用ＩＳＳＲ分子标记技术，对ＰＣＲ扩增结果进行扩增
条带多态性分析和聚类分析，初步揭示甘农３号，甘农
５号和游客以及其杂交后代的遗传多样性，判断出各
株系与亲本之间的亲缘关系远近，反映了三亲本的杂
交过程与遗传情况。
种群多态位点比率是衡量种群内遗传变异程度高
低的重要指标［１４］。一个种群的多态位点比率高，则说
明这个种群适应环境的能力较强；相反，则这个种群适
应环境能力较弱，在长期的进化过程中就有可能被淘
汰［１５］。选取的４条引物中，８４５号引物扩增的效果较
好，多态性程度较高，说明供试材料的遗传多样性比较
丰富。８４５，８５５和８５９号引物多态性比率都是１００％，
４ 　　　　　　ＧＲＡＳＳＬＡＮＤ　ＡＮＤ　ＴＵＲＦ（２０１３）　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．４
图２　３９份供试材料聚类图
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ　ｏｆ　３９ｔｈｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ
扩增出的条带相对８４７号引物较多；而８４７号引物虽
然只扩增出３条条带，但其中有一条条带非多态性条
带，总体多态性比率仅６６．７％，效果不好，不能良好的
揭示受检材料的多态性比率和遗传多样性，故在以后
的试验检测中此类引物不予使用。
遗传距离是衡量材料间综合性状遗传差异大小的
指标［１６］。育种目标所要求的性状不止一个，为了能够
更全面地反映后代间的遗传差异，需要对多个性状进
行综合考虑，因而引伸出计算遗传距离的重要性［１７］。
遗传距离能够从微观角度说明杂交后代与亲本之间的
关系，从遗传距离大小上更能说明３个亲本对后代的
贡献水平。两者之间的遗传距离值越小，说明二者之
间的亲缘关系越近，遗传相似系数也越高，二者的基因
相似度也越高［１８］。若是这二者为亲本与后代某个株
系，则说明后代很大程度上遗传了此亲本的基因。聚
类结果表明，速生１８＃材料单独聚为一类，与其他４个
类群遗传距离较远，分化程度较高。最大的一类是 Ａ
类群，包括１４份材料，由速生１＃、速生６＃、速生５＃、
白花３＃、速生２４＃、多叶１＃、多叶２＃、速生７＃、速生
２５＃、大叶３＃、大叶４＃、甘农５＃、速生２３＃和白花２＃
组成。亲本甘农５号也被聚在这一类中，说明Ａ类群
中的后代株系与甘农５号遗传距离较近，很大程度上
遗传了甘农５号的特性。它们虽然都聚为一大类，但
彼此之间又可以划分为３类，说明Ａ类群间相同中也
有差异。Ｃ类群中包含亲本游客苜蓿，说明此类群的
后代株系与游客苜蓿的亲缘关系较近，遗传距离小。
Ｄ类群中包含亲本甘农３号，它们之间的遗传距离也
较近。孙其信［１９］在研究小麦品种间遗传多样性时得
到品种间遗传距离小，遗传变异也小的结论。亲本间
的遗传差异可以决定后代杂种优势的产生，亲缘关系
越远，杂交后代的杂种优势就越大［２０］。利用分子标记
技术可以查明亲本及其后代株系间的遗传差异大小，
可以在理论上指导如何选配亲本杂交组合、如何充分
地利用杂种优势改良品种［２１］。由于ＰＣＲ反应体系较
小，各组成成分要非常精确，对浓度的要求更加严格，
ＰＣＲ扩增的条件设置也需要严格控制，否则任何一项
的粗心都会对实验结果产生很大影响。应该反复摸索
实验条件、确定ＰＣＲ反应体系，随着对实验越来越熟
练，利用ＩＳＳＲ分子标记技术必定会得出一个好结果。
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ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｉｎｔｅｒ　ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ（ＩＳＳＲ）ｍａｒｋｅｒｓ　ａｓ－
ｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｅｅｄ　ｓｉｚｅ　ｉｎ　ｗｈｅａｔ［Ｊ］．Ｔｈｅ　ｏｒｅｔｉａｌ　ａｎｄ　Ａｐ－
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Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｍｏｎｇｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｈｙｂｒｉｄ
ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ　ｏｆ　ａｌｆａｌｆａ
ＬＩ　Ｚｈｅ，ＳＨＩ　Ｓｈａｎｇ－ｌｉ，ＷＡＮＧ　Ｈｏｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｓｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ／Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇｒａｓｓｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ，
Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ／Ｐｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｇａｎｓｕ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ／Ｓｉｎｏ－Ｕ．Ｓ．Ｃｅｎｔｅｒｓ　ｆｏｒ
Ｇｒａｚｉｎｇｌａｎｄ　Ｅｃｏｓｙｓｔｅｍ　Ｓｕｓｔａｉｎａｂｉｌｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｈｙｂｒｉｄ　ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ　ｏｆ　ａｌｆａｌｆａ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ，
ｉｎｖｏｌｖｉｎｇ　Ｇａｎｎｏｎｇ　３＃，Ｇａｎｎｏｎｇ　５＃，Ｔｏｕｒｉｓｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐａｒｅｎｔｓ，ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｔｈｅ　ｂｙ　ＩＳＳＲ
ｍａｒｋｅｒ　ａｎｄ　４ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｅｓｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　４
ｐｒｉｍｅｒｓ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ａｎｄ　１２２ｓｉｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ａｌ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｓｉｔｅｓ．
２２ｉｎｆｏｒｍａｔｉｖｅ　ＩＳＳＲ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｇｅｎｅｒａｔｅｄ　ａｎｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ　ｂａｎｄ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ　９５．４５％．Ｔｈｅ　ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉ－
ｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｔｅｓｔｅｄ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ　ｗａｓ　ｒｉｃｈ．Ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅｓ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｈｙｂｒｉｄ　ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ　ｐａｒｅｎｔｓ　ｗｅｒｅ　ａｎａ－
ｌｙｚｅｄ，ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｓｔａｎｃｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　１６ ＃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｐａｒｅｎｔｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｓｍａｌｅｓｔ（０．３２７），ｗｈｉｌｅ　ｉｔ　ｂｅ－
ｔｗｅｅｎ　ｂｉｇ　ｌｅａｆ　１＃ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｐａｒｅｎｔｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｉｇｇｅｓｔ（０．７５２）．Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　３９ｍａｔｅｒｉａｌｓ
ｗｅｒｅ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｉｎｔｏ　５ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ，ｔｈｅｒｅ　ｗｅｒｅ　１４ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ　Ａ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　１４ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　１＃，ｆａｓｔ－ｇｒｏｗ－
ｉｎｇ　６＃ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ；５ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ　Ｂ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　２＃，ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　３＃ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ；１３ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ
Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ　Ｃ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　４＃，ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　１１＃ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ；４ｓｔｒａｉｎｓ　ｉｎ　Ｃａｔｅｇｏｒｉｅｓ　Ｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｆａｓｔ－
ｇｒｏｗｉｎｇ　１７＃，ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　２６＃ａｎｄ　ｓｏ　ｏｎ；ｆａｓｔ－ｇｒｏｗｉｎｇ　１８＃ ｗａｓ　ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ　ｉｎ　ｏｎｅ　ｃａｔｅｇｏｒｙ．
　　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ａｌｆａｌｆａ；ｇｅｎｅｔｉｃ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｓｉｍｐｌｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｒｅｐｅａｔ
６ 　　　　　　ＧＲＡＳＳＬＡＮＤ　ＡＮＤ　ＴＵＲＦ（２０１３）　　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３３Ｎｏ．４