全 文 ：基金项目:“重大新药创制专项 ”———中药新药发现与评价技术平台(2009ZX09311-004);教育部新世纪优秀人才计划(985-2-102-113)
作者简介:穆合塔尔·卡德尔哈孜 ,男 ,硕士研究生　　研究方向:中药质量评价　　＊通讯作者:姜勇 ,女 ,副教授　　研究方向:天然活性成
分及新药研究　　Tel:(010)82802719　　E-mail:yongjiang@bjmu.edu.cn
RP-HPLC测定中药赤小豆中儿茶素 -7-O-β -D-吡喃葡萄糖苷的含量
穆合塔尔·卡德尔哈孜1 ,王海涛 2 ,屠鹏飞 1 ,姜勇 1＊(1.北京大学药学院天然药物与仿生药物国家重点实验室 ,北京 100191;2.
中国人民解放军第 306医院药学部 ,北京 100101)
摘要:目的　建立测定中药赤小豆中儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷含量的高效液相色谱法 , 为中药赤小豆质量标准的制定提
供依据。方法　采用体积分数 50%甲醇超声提取 , 以 GracePrevailTMC
18
Column(4.6 mm×250 mm, 5 μm)为固定相 , 乙腈-水
(6∶94)为流动相 ,流速 1.0mL· min-1 , 柱温 30 ℃, 检测波长 230 nm。结果　色谱峰分离度良好 , 线性范围为 0.04 ～ 1.00
mg· mL-1 ,平均加样回收率为 101.2%。结论　本方法操作简单 、准确度高 、重现性好 , 可用于赤小豆药材的质量控制。
关键词:赤小豆;儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R917　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2011)10-0778-03
RP-HPLCDeterminationofCatechin-7-O-β-D-GlucopyranosideinVignaeSemen
KADEERHAZIMuhetaer1 , WANGHai-tao2 , TUPeng-fei1 , JIANGYong1＊(1.StateKeyLaboratoryofNaturalandBio-
mimeticDrugs, SchoolofPharmaceuticalSciences, PekingUniversity, Beijing100191, China;2.DepartmentofPharmacy, The306#
HospitalofPLA, Beijing100101, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　ToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofcatechin-7-O-β-D-GlucopyranosideinVignaeSe-
men.METHODS　TheanalysiswascarriedoutonaGracePrevailTMC
18
column(4.6 mm×250mm, 5μm)at30℃, usingaceto-
nitrileandwater(isocraticelution, 6∶94)asthemobilephaseataflowrateof1.0mL· min-1 , andthedetectivewavelengthwas230
nm.RESULTS　Thestandardcurvewaslinearintherangeof0.04-1.00mg· mL-1 , andthecorrelationcoefficientwas0.999 7.
Theaveragerecoverywas101.2% (n=6).CONCLUSION　Thisestablishedmethodisaccurate, reliable, reproducible, andcan
beusedtocontrolthequalityofVignaeSemen.
KEYWORDS:VignaeSemen;catechin-7-O-β-D-Glucopyranoside;HPLC;contentdetermination
　　赤小豆为豆科豇豆属植物赤小豆(Vignaumbel-
lataOhwietOhashi)或赤豆(VignaangularisOhwiet
Ohashi)的干燥成熟种子 ,味甘酸 ,性平 ,无毒 。具有
利水消肿 ,解毒排脓的功效 ,临床上常用于水肿胀
满 ,脚气肢肿 ,黄疽尿赤 ,风湿热痹 ,痈疮疖毒 ,肠痈
腹痛等症状 [ 1] 。除药用外 ,赤小豆作为食品也被广
泛应用 ,亦被称作 “饭豆 ”,用于制作豆饭 、八宝粥 、
红豆沙 、豆粉等食品 [ 2] 。但是关于赤小豆的质量分
析 ,国内尚未见文献报道 , 2010年版 《中国药典 》也
只是进行了性状和纤维鉴别 ,难以有效保证药材的
质量[ 1] 。国外学者通过对该属植物的化学分析发
现 ,黄酮和皂苷类化合物是该属植物的主要化学成
分类型 [ 3-5] 。本课题组前期对赤小豆的化学成分研
究结果也证实了这点 ,并且发现儿茶素-7-O-β-D-吡
喃葡萄糖苷为其主要成分之一。因此 ,为有效控制
赤小豆的质量 ,本实验利用高效液相色谱 ,建立了赤
小豆中儿茶素 -7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的测定方法。
1　仪器与试药
Agilent1100高效液相色谱仪:二极管阵列检测
器 ,四元低压梯度泵 ,真空脱气机 ,柱温箱 ,自动进样
器;数据处理机:Agilent1100色谱工作站(Agilent公
司);万分之一电子分析天平(BS110S,美国 Sartori-
us);十万分之一电子分析天平(BP211D, 美国 Sar-
torius);超声波清洗器 。
儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品为本实验
室自制 ,纯度经 HPLC分析大于 98%。甲醇为分析
纯;乙腈为色谱纯;自制重蒸水。
收集了不同产地共计 26批赤小豆药材。经本
室屠鹏飞教授鉴定为豆科植物赤小豆(Vignaumbel-
lataOhwietOhashi)或赤豆(VignaangularisOhwiet
Ohashi)的干燥成熟种子。样品信息见表 1。
·778· ChinPharmJ, 2011May, Vol.46 No.10　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2011年 5月第 46卷第 10期
表 1　样品信息及儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的含量测
定结果.n=2
Tab.1　　Sampleinformationandthecontentdeterminationre-
sultsofcatechin-7-O-β-D-Glucopyranoside.n=2
No. Purchasingarea Habitat Source Content/%
1 Beijing Hebei V.angularis 0.143
2 Beijing Hebei V.angularis 0.159
3 Beijing Hebei V.umbelata 0.124
4 Beijing Hebei V.umbelata 0.147
5 Beijing Guangdong V.angularis 0.200
6 Beijing Anhui V.angularis 0.087
7 Hebei Hebei V.angularis 0.141
8 Beijing Hebei V.angularis 0.137
9 Liaoning, shenyang Liaoning, heishan V.angularis 0.104
10 Shandong, bingzhou Shandong V.angularis 0.109
11 Hebei, xingtang Hebei V.angularis 0.124
12 Shandong, shizhao Shandong V.angularis 0.143
13 Hubei, shiyan Hubei V.angularis 0.153
14 Heilongjiang, haerbin Heilongjiang V.angularis 0.106
15 Zhejiang, jinhua zhejiang V.umbelata 0.126
16 Shanghai Heilongjiang V.angularis 0.115
17 Shenzhen Guangdong V.angularis 0.107
18 Anhui Anhui V.umbelata 0.172
19 Heilongjiang Heilongjiang V.umbelata 0.107
20 Jinlin Jilin V.umbelata 0.112
21 Beijing Beijing V.angularis 0.104
22 Anhui Anhui, bozhou V.angularis 0.139
23 Anhui Anhui, bozhou V.umbelata 0.124
24 Guangdong, shenzhen Guangdong V.umbelata 0.135
25 Hebei, anguo Hebei V.umbelata 0.126
26 Hebei, anguo Hebei V.angularis 0.119
2　方法与结果
2.1　色谱条件
GracePrevailTM C18 Column(4.6mm×250mm, 5
μm)色谱柱;流动相为乙腈 -水(6∶94),流速为 1.0
mL· min-1 ,柱温为 30 ℃,检测波长 230 nm,进样
量 10 μL。在上述条件下 ,赤小豆中儿茶素-7-O-β-
D-吡喃葡萄糖苷保留时间为 19.1 min,分离度良好
(图 1)。
2.2　溶液配制
对照品溶液:精密称取儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡
萄糖苷对照品适量 ,加体积分数 50%甲醇制成每 1
mL含儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 150 μg的溶
液 ,即得。
供试品溶液:取 1.0 g样品粉末(过 40目筛),
精密称定 ,置具塞三角瓶中 ,精密量取 10 mL体积分
数 50%甲醇 ,称定重量 ,超声提取 1 h,放冷 ,用体积
分数 50%甲醇补足重量 ,摇匀 , 滤过 , 取续滤液 ,
即得。
图 1　儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品(A)及赤小豆样
品(B)的 HPLC图
Fig.1　HPLCChromatogramsofthereferencesubstanceofcate-
chin-7-O-β-D-Glucopyranoside(A)andthecrudedrugsample
ofVignaeSemen(B)
2.3　线性关系考察
取儿茶素 -7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品储备液
1.00mg·mL-1 ,分别稀释 2、5、10、12.5、25倍 ,依次
进样 ,以对照品浓度 ρ对色谱峰峰面积 Y做标准曲
线 ,得回归方程为 Y=12 944ρ-85.759, r=0.999 7
(n=6)。线性范围为 0.04 ～ 1.00 mg· mL-1。
2.4　精密度实验
取供试品溶液 ,连续进样 6次 ,以儿茶素 -7-O-β-
D-吡喃葡萄糖苷的峰面积为指标 , RSD为 1.47%,
表明仪器精密度良好。
2.5　重复性实验
取同一批赤小豆药材粉末 6份 ,按 “2.2”制备
方法进行制备 ,平行测定 ,以儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡
萄糖苷的含量为指标 , RSD为 2.07%,表明方法重
复性良好 。
2.6　稳定性实验
取供试品溶液 ,分别于 0、2、4、8、12、24 h测定 ,
结果儿茶素 -7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷峰面积的 RSD
为 1.52%,说明供试品溶液 24 h内稳定性良好 。
2.7　回收率实验
取已知含量的赤小豆药材粉末 6份各 0.5 g,精
密称定 ,加入儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷对照品
溶液适量 ,按 “ 2.2”制备方法制备 ,并按含量测定方
法进行测定 ,结果表明 ,儿茶素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖
苷回收率为 101.21%, RSD为 3.03%,说明方法准
确度较高 。
2.8　不同产地样品含量的测定
分别称取不同产地的药材粉末 , 按 “ 2.2”的
制备方法操作 ,分别精密吸取对照品溶液及供试
品溶液各 10 μL, 注入高效液相色谱仪 ,测定 ,即
得(表 1)。
·779·中国药学杂志 2011年 5月第 46卷第 10期　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2011May, Vol.46No.10
3　讨　论
3.1　色谱柱的选择
分别考察了 WaterSymmetryShieldTM RP18 col-
umn(4.6 mm×250 mm, 5 μm), GracePrevailTM C18
column(4.6 mm×250 mm, 5 μm), AgilentExtend-
C18column(4.6mm×250 mm, 5 μm)3种型号的色
谱柱。不同的色谱柱其差别主要在色谱峰的保留时
间上 ,而在峰形 、峰面积上均无明显区别 ,但由于本
实验所采用流动相为含水量较大的流动相 ,常用反
相色谱柱在长期使用的情况下对色谱柱的耗损较严
重 ,故最后采用更能耐水 ,填料不易耗损的 Grace
PrevailTM C18色谱柱。
3.2　检测波长的选择
儿茶素 -7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷最大吸收波长为
203, 280 nm附近 ,另外 ,在 230 nm附近有个肩峰 。
笔者比较了赤小豆样品在上述 3个波长处的检测情
况 ,发现 203和 230 nm处的吸收强度明显高于 280
nm处的吸收 ,但 203 nm由于处于 UV检测器的末
端吸收波长处 ,受干扰的因素较多 ,易引起基线的波
动 ,因此综合考虑选择了 230 nm作为检测波长。
3.3　流动相的选择
考察了甲醇 -水 、甲醇 -磷酸水 、乙腈-水 、乙腈 -磷
酸水 4种流动相系统 ,结果表明 ,乙腈-水 、乙腈 -磷
酸水系统与甲醇-水 、甲醇 -磷酸水系统相比基线噪
音更小 ,且色谱峰保留时间更短 ,最终确定流动相为
乙腈-水。另外 ,由于赤小豆药材中含有多种不同极
性的化合物 ,在本实验报道的色谱条件下 ,很多极性
稍小的一些化合物不被洗脱 ,被吸附在色谱柱上 ,对
下一次的分析工作带来较大的影响 。因此 ,建议在
每针进样的时候 ,除了样品的测定 ,再增加一个采用
高浓度有机溶剂进行洗柱的过程 。通过摸索 ,确定
了洗脱梯度如下:0 ～ 20 min:乙腈-水(6∶94), 20 ～
22 min从乙腈-水 (6∶94)变化到乙腈 -水(100∶0),
22 ～ 27 min用纯乙腈洗柱 , 27 ～ 30 min从乙腈 -水
(100∶0)变化到乙腈 -水(6∶94), 30 ～ 35 min保持乙
腈-水(6∶94)。
3.4　药材的提取方法
考察了超声和回流两种提取方法 ,结果表明 ,二
者之间提取效率相近 ,故选择更易操作的超声提取
法。通过比较体积分数 30%、50%、70%和 100%甲
醇溶液的提取效果 ,发现体积分数 50%甲醇溶液提
取效率最高 ,故确定以体积分数 50%甲醇为提取溶
剂。另外 ,分别考察了 10, 15, 20 mL3种不同的提
取溶剂用量 ,结果表明 ,溶剂用量对测定结果影响不
大 ,故以 10mL为提取溶剂用量。关于提取时间 ,分
别考察了 0.5、1、1.5、2 h4种不同的提取时间 ,发现
除提取 0.5h的样品提取效率较低外 ,其余 3个时间
的提取效率相当 ,因此 ,确定样品的提取时间为 1h。
3.5　不同基原赤小豆药材有效成分的含量比较
中药赤小豆有两种基原植物 ,分别是赤小豆
(V.umbelata)和赤豆(V.angularis)。根据现有的
数据分析结果 ,发现赤豆和赤小豆样品中含有的儿
茶素 -7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷的量相当 , 赤豆为
0.13%(n=17),赤小豆为 0.13%(n=9)。这种指
标性成分含量的一致性为它们临床的等同使用提供
了一定依据。
REFERENCES
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contentofseedflavonoidsinforageandgrainlegumecrops[ J].J
SepSci, 2007, 30(4):491-501.
(收稿日期:2010-11-23)
《中国药学杂志 》 2011年专栏征稿通知
为提高《中国药学杂志》稿件的学术水平 , 为广大药学工作者提供一个展示的舞台 , 经《中国药学杂志》主编扩大会讨论通
过 , 本刊 2011年将组织如下专栏。
①儿科药物的研发与应用;②围孕期和妊娠期用药及安全性评价;③糖尿病治疗药物研发与应用的新进展;④调血脂创
新药物的研发与应用;⑤抗肝炎病毒药物的研发与应用;⑥岛津杯药物分析优秀论文获奖论文选登。
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