全 文 ：HPLC法测定大血藤中红景天苷的含量
施伶俐 1 ,桂双英 1, 2, 3 ,周金凤 1
(1.安徽中医学院药学院;2.安徽省中药制剂工程技术研究中心;
3.现代中药安徽省重点实验室 ,安徽 合肥　230031)
摘要:目的　建立中药大血藤中的红景天苷含量测定方法。方法　采用高效液相色谱法(HPLC)测定。色谱柱:Phenomenex
C18 ,流动相:乙腈-0.05 mol· L-1磷酸二氢钾溶液(12∶88), 流速:1.0 ml· min-1 ,柱温:30℃,检测波长:275 nm。结果　红景天
苷在 57～ 912mg· L-1线性关系良好 ,平均加样回收率为 99.30%, RSD为 1.52%。结论　该方法可靠 、稳定 、重现性好 , 且操作
简单 , 可用于大血藤中红景天苷的含量测定。
关键词:大血藤;红景天苷;HPLC
DeterminationofsalidrosideinSargentodoxacueatabyHPLC
SHILing-li1 , GUIShuang-ying1, 2, 3 , ZHOUJin-feng1
(1.DepartmentofPharmacy, AnhuiColegeofTraditionalChineseMedicine;2.AnhuiTechnologyandEngineeringResearch
CenterforChineseMedicinePreparation;3.AnhuiKeyLaboratoryofModernChineseMedicine, Hefei, Anhui　230031, China)
Abstract:Aim　ToestablishanHPLCmethodforthedeterminationofSalidrosideinSargentodoxacuneata.Methods　TheHPLCwas
conductedonphenomenexC18 columnwithACN-KH2PO4(12∶88)asamobilephase.Theflowratewas1.0ml· min-1 , thetemperaturewas30℃ andthedetectionwavelengthwas275nm.Results　Salidrosidehadagoodlinearrelationshipwithintherangebetween57and
912mg· L-1.Theaveragerecoverywas99.30%, andtheRSDwas1.52%.Conclusion　Themethodisaccurate, stableandsimple,
anditmaybeusedforthequalitycontrolofSargentodoxacuneata.
Keywords:Sargentodoxacuneata;Salidroside;HPLC
　　大血藤(Sargentodoxacuneata)又名红藤 , 始载于公元
1061年 《图经本草》, 其后古典《本草纲目》 、《简易草药》等均
有记载 [ 1] 。据《中国药典》(2010年版)记载 , 其正品为木通
基金项目:康缘中医药科技创新基金项目(NoKYCX201004)
作者简介:施伶俐 ,女 ,硕士研究生
通讯作者:桂双英 ,女 ,博士 ,教授 ,研究方向:中药药剂 , E-mail:guish
y0520@yahoo.com.cn
科(Lardizabalaceae)大血藤属(SargentodoxaRehd.etWils.)落
叶木质藤本大血藤 SargentodoxacuneataRehd.etWils.的干燥
藤茎根。味苦性平 , 归大肠 、肝经。具有清热解毒 、活血 、祛风
止痛之功效 , 用于肠痈腹痛 ,热毒疮疡 , 经闭 ,痛经 , 跌扑肿痛 ,
风湿痹痛 [ 2] 。现代研究表明 , 大血藤具有抗菌 、抗病毒 、消
炎 、抗肿瘤 、抗辐射等作用 , 临床用于治疗慢性盆腔炎 、消化性
溃疡 、阑尾炎等 [ 3]。
丝体完全可以替代冬虫夏草。
表 2　腺苷的含量测定(n=3)
组别 含量 /mg· g-1
冬虫夏草 0.182±0.005
菌丝体 5.435±0.108
3　讨论
本文对冬虫夏草及菌丝体中腺苷成分进行了比较 , 在
TLC和 HPLC定性定量的方法检测下 , 结果显示两者均含有
腺苷成分 , 并且菌丝体中腺苷的含量高于冬虫夏草 , 因此提
示 , 从主要效应成分腺苷含量的角度评价 , 菌丝体完全可以替
代冬虫夏草。但这仅是药学角度的评价结果 , 还需要从药效
学和临床疗效的角度得到进一步证实。
目前液体发酵虫草菌丝体的工艺已成熟 , 国内有多个厂
家从事虫草菌丝体的生产。由于从冬虫夏草中获得的菌种来
源(至今从天然虫草中提取分离和鉴定的真菌菌株多达十余
种)不同 ,加上菌株在发酵过程中存在变异 , 不同菌株发酵的
虫草菌丝体中腺苷的含量存在差异 [ 9] 。 本文所用的菌丝体
为本院目前使用的品种 , 腺苷含量与文献报导的冬虫夏草发
酵液冻干粉不一致 [ 10] ,这可能是由于菌丝体发酵所用的菌种
或发酵工艺的不同引起的。
参考文献:
[ 1] 　石　岩 ,王钢力 , 秦文杰 ,等.冬虫夏草的化学成分综述 [ J].中
医研究 , 2006, 19(7):54-6.
[ 2] 　范志华 ,汤卫华 , 林　霖.HPLC法测定冬虫夏草发酵菌丝粉中
腺苷的含量 [ J] .现代食品科技 , 2007, 23(7):94-7.
[ 3] 　申　倩.高效液相色谱法测定虫草发酵茵丝粉中腺苷的含量
[ J] .天津化工 , 2007, 21(1):54-7.
[ 4] 　国家药典委员会.中国药典:一部 [ S].北京:化学工业出版社 ,
2005:75-6.
[ 5] 　何新发 ,赵淑蓉.人工虫草菌丝粉的开发研究与展望 [ J] .青海
医药志 , 1999, 29(10):60.
[ 6] 　陈万群 , 陈古蓉.冬虫夏草代用品研究 [ J] .中草药 , 1994, 25
(5):269.
[ 7] 　邢增涛 ,李光平 ,孟范贵 ,等.虫草制品中腺苷和虫草素含量的
RP-HPLC分析 [ J] .天然产物研究与开发 , 2007, 19:256-9.
[ 8] 　许　永 ,赵　成.HPLC法测定灵芝益寿胶囊中腺苷的含量 [ J] .
安徽医药 , 2008, 12(11):1057-8.
[ 9] 　吴迎春, 吴喜民 ,潘一峰 ,等.不同菌种 /菌株发酵虫草菌丝体的
化学成分比较 [ J] .时珍国医国药 , 2010, 21(5):1060-1.
[ 10] 王海霞 ,胡高升 ,蒙　娅.RP-HPLC法测定冬虫夏草发酵液冻干
粉中虫草素和腺苷含量 [ J] .中国食品卫生杂志 , 2007, 19(4):
309-12.
(收稿日期:2010-09-08)
·441·安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2011 Apr;15(4)
　　国内外对于大血藤化学成分的研究不多 , 现有研究表明
大血藤主要含有蒽醌类 、三萜类 、甾体类 、木质素类等化合
物 [ 4] 。文献报道大血藤中含有红景天苷 [ 5] , 而红景天苷有抗
疲劳 、抗衰老 、免疫调节 、抗辐射 、抗肿瘤等多种药理作用 [ 6] ,
可能是大血藤的活性成分之一。为考察大血藤药材中红景天
苷含量 , 本研究建立 HPLC法测定红景天苷含量的方法 , 为进
一步研究大血藤药材质量提供一定的参考。
1　仪器与试药
　　日本岛津 LC-20A高效液相色谱仪(SPD-M20A紫外检测
器 , LC-20AB泵 , LC-solution色谱工作站);甲醇(上海苏懿化
学试剂有限公司)、乙腈(上海申豪化学试剂有限公司)均为
色谱纯 , 磷酸二氢钾(国药集团化学试剂有限公司)为分析
纯;水为纯化水;红景天苷对照品购自成都曼斯特生物制品有
限公司(批号 A0076);大血藤饮片购自亳州千草药业饮片厂。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱:PhenomenexC18 (250 mm×4.60
mm, 5 μm);流动相:乙腈-0.05 mol· L-1磷酸二氢钾溶液(12
∶88);流速:1.0ml· min-1;检测波长:275nm;柱温:30℃。对
照品和供试品色谱图见图 1。
图 1　红景天苷 HPLC图(注:A为对照品 , B为供试品)
2.2　线性关系考察　精密称取红景天苷对照品 11.4 mg, 置
10 ml容量瓶中 ,用甲醇溶解并定容至刻度 ,得到 1 140 mg·
L-1的对照品溶液。精密量取对照品溶液(1 140 mg· L-1)
50、100、200、400、600、800 μl, 置 1 ml容量瓶中 , 加甲醇至刻
度 , 制成系列浓度的对照品溶液。在选定的色谱条件下 , 进样
20 μl, 测定峰面积 , 以峰面积对浓度进行线性回归 , 回归方程
为 Y=3 956.2 X-138 295, r=0.999 9, 结果表明 , 红景天苷
在 57 ～ 912mg· L-1范围内线性关系良好。
2.3　供试品溶液的制备　 取大血藤药材 , 粉碎 , 过三号筛 ,
称取 1.0 g,精密称定 , 置具塞试管中 ,精密加入甲醇 10 ml,密
塞 , 摇匀 ,称定重量 , 超声处理 30 min, 放冷 ,再称定重量 , 用甲
醇补足减失的重量 , 摇匀 ,滤过 ,取续滤液 , 作为供试品溶液。
2.4　精密度试验　取线性关系考察项下对照品溶液(556 mg
· L-1),精密吸取 20 μl,重复进样 6次 , 测定峰面积 ,结果其
RSD为 0.74%,表明该方法精密度良好。
2.5　稳定性试验　精密吸取供试品溶液 20 μl, 分别于 0、 1、
2、4、 8、12h进样 , 测定红景天苷峰面积 ,结果 RSD为 1.97%,
表明供试品溶液在 12h内基本稳定(n=6)。
2.6　重复性试验　取同一批药材 6份 ,分别按供试品溶液的
制备方法进行制备 , 分别进样 20 μl, 测定红景天苷含量 , 结果
RSD为 1.91%。
2.7　加样回收率试验　取已知含量的大血藤药材 6份 , 每份
0.5 g,精密称定, 分别精密加入红景天苷对照品溶液(1 140 mg
· L-1)1 ml, 按供试品溶液制备方法进行制备 , 依法测定, 计算
回收率。结果见表 1。平均回收率 99.30%, RSD为 1.52%。
表 1　加样回收率试验结果
编号 称样量/g
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
RSD
/%
1 0.490 6 1.142 6 1.14 2.245 4 96.736 8
2 0.490 8 1.143 1 1.14 2.279 1 99.649 1
3 0.491 1 1.143 8 1.14 2.284 5 100.061 4
4 0.490 5 1.142 4 1.14 2.297 0 101.280 7
5 0.490 9 1.143 3 1.14 2.272 8 99.078 9
6 0.491 7 1.145 2 1.14 2.273 4 98.964 9
2.8　样品测定　取三批大血藤药材约 1.0 g, 精密称定 , 按
照上述方法制备供试品溶液 , 分别精密吸取供试品溶液 20
μl,进高效液相色谱仪 , 测定峰面积 , 计算红景天苷含量。结
果见表 2。
表 2　药材含量测定结果(n=3)
编号 红景天含量 /% RSD/%
1 0.272 2 1.19
2 0.232 9 1.01
3 0.253 6 1.36
3　讨论
实验对流动相进行了考察 , 首先采用甲醇-水系统 , 其基
线不太稳 , 峰形不好 ,后采用乙腈-水系统发现基线较稳 , 但色
谱峰较宽 , 分离度不理想 , 且出峰时间比较长 , 加入 0.05 mol
· L-1磷酸二氢钾溶液后色谱峰明显改善 , 峰形对称 , 分离度
较好 , 最终选用乙腈-0.05mol· L-1磷酸二氢钾溶液(12∶88)
为流动相。
实验中考察了供试品制备方法 , 分别采用回流提取法 、超
声提取法和索氏提取法等进行了提取。结果表明回流提取
法 、超声提取法和索氏提取法效果相当 ,而超声提取法操作更
加简单易行 , 且节省时间。
《中国药典》(2010年版)大血藤项下尚无含量测定项 ,而
研究表明大血藤中含有红景天苷 [ 5] , 且其抗辐射 、抗肿瘤等
活性与大血藤相一致 , 因此本文建立大血藤药材中红景天苷
的含量测定方法 , 为药材质量控制提供有益的参考依据。但
目前大血藤的活性成分研究还较少 , 而大血藤的药理作用广
泛 , 因此应进一步加强大血藤的活性物质基础研究 , 为合理评
价大血藤药材的质量奠定基础。
参考文献:
[ 1] 　陆连英.《本草纲目 》中红藤本草考证 [ J] .时珍国医国药 , 2000,
11(2):70.
[ 2] 　国家药典委员会.中国药典:一部 [ S].北京:中国医药科技出版
社 , 2010:19.
[ 3] 　蒋　洪 ,刘乐乐 ,王宏伟 ,等.中药红藤化学成份及临床作用的
研究进展 [ J] .内蒙古科技与经济 , 2002, 131(3):120, 127.
[ 4] 　毛水春 ,崔承彬 ,顾谦群.中药大血藤化学成分和药理活性的研
究进展 [ J] .天然产物研究与开发 , 2003, 15(6):559-62.
[ 5] 　毛水春.中药大血藤 Sargentodoxacuneata抗癌活性成分的分离
与鉴定 [ D] .中国海洋大学 , 2003.
[ 6] 　龚小军 ,陈素红 ,吕圭源.红景天 “益气活血 ”功效相关药理作用
研究进展 [ J] .安徽医药 , 2008, 12(4):292-4.
(收稿日期:2010-11-04)
·442· 安 徽 医 药　AnhuiMedicalandPharmaceuticalJournal　2011 Apr;15(4)