全 文 ：物质对健康豚鼠的吸入毒性研究。 这些信息再一次
提示 ,要高度重视化学生物战剂防护谱中“灰色区”
的化学防护研究。
029　试纸膜免疫层析法检测的蓖麻毒素
宋凤卿　郭胜清　郭　军　郝兰群
余　涛　董之海　黄启斌
北京药物化学研究所三所 (北京 102205)
　　蓖麻毒素 ( ricin)是一种从蓖麻子中提取的一
种植物蛋白毒素。分子由 A、 B两条多肽链组成。现
已证明: 蓖麻毒素是一种细胞毒 , B链与细胞表面糖
蛋白结合 , A链通过酶催化灭活核糖体 60S亚基而
抑制细胞蛋白质的合成。由于蓖麻毒素来源广泛 ,毒
性较高 ,已被外军作为武器化的一种毒素加以研究。
禁止化学武器公约把蓖麻毒素列为最为严格的控制
对象之一 ,本身就反映了人们对蓖麻毒素军事价值
的关注。因此 ,无论是从核查角度 ,还是从防护目的 ,
开展对蓖麻毒素的检测研究具有十分重要的意义。
试纸膜免疫层析法是近几年国外兴起的一种快
速免疫检测技术。 它是继同位素、酶、荧光素等三大
传统标记技术以及各种免疫检测法之后 ,应用金标
记 ,带色乳胶及免疫层析原理结合而发展起来的具
有专一性强 ,灵敏度高 ,操作简单 ,反应快速及经济
实用等特点。 此项技术在国内未见有成熟的报道。
本研究应用近几年来国外兴起的一种快速试纸
膜免疫层析技术 ,从以下几个方面入手进行了大量
的实验探索: ( 1)制备并纯化了蓖麻毒素单克隆抗体
和多克隆抗体 ,获得了效价和滴度合格的的生物活
性材料。 ( 2)对不同来源、不同孔径、不同厚度的载体
膜进行了大量筛选实验 ,确定了检测片研制所用的
3种不同的载体。 ( 3)确定了胶体金和金标抗体制备
的最佳方法和工艺条件。 ( 4)确定了检测片中 3种不
同抗体在不同载体上的固定工艺以及检测片的组合
工艺等。 ( 5)对检测片检测灵敏度、显色时间、稳定性
和特异性等性能进行了测试。
经过一年来的原理探索 ,材料制备、筛选和工艺
制作 ,认为胶体金免疫标记抗体技术和膜层析技术
的结合应用是检测毒素和生物战剂的有效技术途
径 ,所研制的检测片具有快速、灵敏、使用操作简单
等显著特点 ,只需要在检测片上加入一定量的待检
样品液 ,就可在几分钟内作出结果判断。这种检测法
把已往对毒素的检测法 (包括需要数天的动物毒性
测定及进行电泳等理化分析 )以及近年来广泛采用
的酶联免疫吸附法 (即 ELISA法 ,一般测定时间 4
～ 8h) ,简化到目前的极为简便的一步法 ,其实用性
极其明显 ,具有很大的推广应用价值。
030　相思子毒素的放射免疫检测方法
李丽琴　张守兰　杜秀宝　林福生
北京药物化学研究所 (北京 102205)
　　相思子毒素是一种有效的蛋白质合成抑制剂 ,
它在抗癌应用方面引起广泛的重视。 对不同的肿瘤
细胞及几种人癌移植物有很强的抑制作用 ,可能成
为一种有前途的抗癌药物。为研究其药代动力学 ,我
们建立了相思子毒素的放射免疫检测方法 ,此方法
的建立 ,对于毒素的临床用药、中毒诊断及法医学鉴
定有重要意义。
为了建立相思子毒素的放谢免疫检测方法 ,必
须首先确定试剂的工作浓度。 我们采用自制的相思
子毒素抗血清 ,工作浓度为 1∶ 100 000,终稀释度为
1∶ 400 000。 采用 Lodogen法对相思子毒素进行标
记 , 125 I标记的相思子毒素保留了完全的免疫活性 ,
工作浓度为 100 000 cpm /ml。采用驴抗兔第二抗体 ,
稀释度为 1∶ 70。 然后选择抗原 -抗体结合反应的最
佳孵温温度和时间等条件 ,并且比较了平衡法和非
平衡法对测定灵敏度的影响。 结果表明非平衡法的
加样顺序可使本方法的测定灵敏度提高十多倍。 实
验还证明了在第二抗体稀释液中加入 5%的 PEG,
可以有效缩短体系的反应时间 ,加快分离速度 ,降低
非特异性吸附 ,从而建立了小鼠血浆体系相思子毒
素的放射免疫检测方法。 相思子毒素在 0. 2～
12. 8μg /L的小鼠血浆浓度范围内呈良好的线性关
系 ,回归方程为 Y= 6. 8245～ 2. 7417X ,相关系数为
r = - 0. 9955,血浆中相思子毒素最小可测浓度为
0. 2μg /L,样品检测的准确度为 103. 8% ～ 104. 2% ,
ng级样品测定的批内变异系数为 ( 4. 32± 0. 33)% ,
批间变异系数为 ( 7. 15± 0. 05)% , 0. 1ng级样品测
定的批内变异系数为 8. 06% ,批间变异系数为
11. 50% 。
血样采集后放置时间和温度对回收率有影响 ,
对于采集的血样应置 4℃条件 , 24h内测定。 小鼠溶
血样品对测定结果也有影响 ,对于溶血样品 ,应在标
准抑制曲线范围内 ,尽可能稀释后测定。根据测定目
的不同 ,以相应体系制作标准曲线 ,结果较为可靠。
综上所述 ,我们建立的相思子毒素放射免疫检测方
法可以灵敏 ,准确 ,专一的检测相思子毒素。
·202· 卫生毒理学杂志 1999年第 13卷第 3期　 J Heal th Toxicology 1999, Vol. 13, No. 3DOI : 10. 16421 /j . cnki . 1002 -3127. 1999. 03. 043