全 文 ：Chin J Convalescent Med , Sep . 2010 , Vol . 19 , No . 9
存在，而且糖尿病的病情与自身抗体异常程度一致；这些
自身抗体的意义不仅是区分糖尿病的类型，也反映了病
人免疫功能的异常及机体对胰岛素的不敏感和 /或效力
减低。
由于该阶段的异常指标可受多种因素的影响，其发
展趋势会有所不同。一般可演变为：一是不良刺激反复作
用，疾病从无症状到有症状，至临床阶段或慢性病阶段；
二是通过调理或相应的干预措施，可转为正常；三是停留
在某阶段呈蛰伏状。因此对异常指标患者做针对性的预
防措施，做到疾病的早发现、早治疗、早预防，对减少疾病
及慢性并发症的进一步发生发展有重要意义。
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(收稿日期：2009- 12- 25 )
文章编号：1005- 619X(2010 )09- 0840- 03
相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法的建立与评价
266071 济南军区青岛第二疗养院 张立营 孙英姿
250014 济南军区联勤部疾病预防控制中心 赵怀龙 傅兴伦
【摘要】 目的 建立相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法并进行方法学评价。方法 优化最佳相思子毒素多抗包被浓度后
建立了相思子毒素双抗夹心ELISA检测方法，鉴定其检测灵敏度、线性范围、特异性、重复性、回收率等。结果 双抗夹心
ELISA方法检测相思子毒素的最小检出限为1 ng/mL，标准曲线在10～100 ng/mL范围内线性良好。血清中加入已知量的标
准毒素蛋白，测得平均回收率为89%。结论 本方法检测相思子毒素的可测范围广、特异性强、灵敏度高、变异系数较小，表
明其灵敏、特异、可靠。
【关键词】 相思子毒素；双抗体夹心ELISA；方法学评价
【Abstract】 Objective To establish a double antibody sandwich ELISA method for detection of abrin and analyze the methodology.
Methods After the optimal coating concentration of polyclonal antibody of abrin was optimized；a double antibody sandwich ELISA
method was established.Detection sensitivity，linear range，specificity，repeatability and recovery rate were assayed.Results The mini-
mal detection limit of abrin was 1 ng/mL and the linearity of standard curve was fine in the range of 10 to 100 ng/mL.The average
recovery was 89% when the known amounts of standard toxin protein was added into blood samples.Conclus ion This method for
detection of abrin is sensitive，specific and reliable because of its wide measure range，high sensitivity，good specificity，small coeffi-
cient of variability.
【Key words】 Abrin；Double antibody sandwich ELISA；Methodological evaluation
相思子毒素 (abrin) 是存在于豆科植物相思子 (Abrus
precatorius)种子中的一种毒蛋白，与蓖麻毒素(ricin)同为Ⅱ
型核糖体失活蛋白(RIP)家族成员，是迄今为止所发现的毒
性最强的植物毒素之一，毒性是普通化学武器的几百倍。
相思子毒素已经成为一个成功的天然毒素战剂 [1- 2]。
由于相思子毒素天然资源比较丰富，制备比较容易，
并且相思子毒素中毒后无特异症状，出现症状时已经造
成机体严重的器质损害，具备生物毒素武器典型特征，因
此历来为外军所高度重视 [3]。在2001年世界生物及毒素武
器大会(BTWC)上，相思子毒素再次被列入重点核查清单。
因此，无论是从核查、应用治疗，还是从防护目的，开展对
相思子毒素的研究具有十分重要的意义 [4- 5]。
本研究利用相思子毒素的多抗和单抗建立相思子毒
素的双抗夹心ELISA检测方法，并对检测方法进行了方法
学评价。本方法对建立相思子毒素检测试剂盒具有重要
的现实意义与应用价值。
1 材料与方法
1.1 材料 相思子毒素、相思子毒素单抗和多抗由本实
验室保存，HRP标记的羊抗鼠抗体购自北京华美公司。
1.2 检测过程 ①样品稀释：将相思子毒素进行如下稀
释，1 μg/mL、100 ng/mL、10 ng/mL、1 ng/mL、100 pg/mL、
10 pg/mL、0 g/mL。②包被：加入包被液稀释的相思子毒素
多抗 (1∶1 000稀释 )，100 μL/孔，4 ℃过夜。甩干包被
液，PBST缓冲液洗涤液洗涤3次，3 min/次。③封闭：加入
1%BSA封闭液，100 μL/孔，37 ℃ 60 min，甩干；PBST洗
涤液洗涤3次，3 min/次。④加样：加入相思子毒素蛋白，
100 μL/孔，每个样品重复3个孔，同时设阳性对照、阴性
样品和空白对照，37 ℃ 60 min甩干液体，洗涤液洗涤3次，
3 min/次。⑤加相思子毒素单抗(1∶4 000稀释)：100 μL/孔。
37 ℃ 60 min甩干液体，洗涤液洗涤3次，3 min/次。⑥每孔加
入100 μL辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG抗体 (1∶5 000)，
37 ℃恒温0.5 h，洗板3次(同前)，每孔加入100 μL底物溶
液显色15 min，加入2.0 mol/L H2SO4 100 μL终止反应，于
酶标仪上读取450 nm吸收波长处的OD值。⑦结果判断：
基金项目：青岛市公共领域科技支撑计划项目 ( 09- 1- 1- 28- nsh )
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DOI:10.13517/j.cnki.ccm.2010.09.020
中国疗养医学 2010 年 9 月第 19 卷第 9 期
以P(待测样本OD值)/(阴性样本OD值)大于2.1判为阳性。
2 结果
2.1 相思子毒素多抗包被浓度的确定 包被不同浓度
相思子毒素多抗的酶标板，在相同条件下进行间接
ELISA实验，结果 (图1)。当相思子毒素多抗的包被浓度
在1.0～50.0 μg/mL范围时，OD450值呈上升趋势；浓度高
于50.0 μg/mL时OD450值趋于饱和，故相思子毒素多抗的
最佳包被浓度为50.0 μg/mL。
2.2 检测方法的灵敏度和线性范围的确定 将相思子
毒素进行梯度稀释，在优化的实验条件下，采用以上双
抗体夹心ELISA法测定相思子毒素。得出双抗体夹心
ELISA法测定相思子毒素的检出限为1 ng/mL。当相思子
毒素的浓度在10～100 ng/mL范围时，相思子毒素浓度与
吸光度之间呈线性关系，线性回归方程为y=0.049x+0.407
(即A=0.407C+0.049)，线性相关系数r=0.997 6。在此浓度
范围内，相思子毒素可进行定量分析。
2.3 检测方法的特异性分析 用优化的检测体系分别检
测相思子毒素、蓖麻毒素和蒴莲根毒素，以验证该检测体
系的特异性。结果表明，检测相思子毒素时，随着相思子毒
素浓度增加，OD450值呈增加趋势。而检测相思子毒素和蒴
莲根毒素时，OD450值与相思子毒素浓度为零时的OD450值接
近，表明该方法对相思子毒素具有很好的特异性。
2.4 检测方法的重复性分析 采用变异系数表示法，在
同一次测定中对3个浓度水平的样品分别重复测定3次计
算批内变异系数。分别测定3个浓度水平的样品在3个不
同批次测定之间的变异系数(批间变异系数)，结果(表1)。
图1 相思子毒素多抗包被浓度的确定
表1 重复性测定结果
测试样品
批内变异系数 批间变异系数
x±s CV(％) x±s CV(％)
1 0.49±0.037 7.6 0.47±0.057 13.4
2 0.58±0.024 8.3 0.74±0.077 12.8
3 1.06±0.077 6.6 1.46±0.061 8.9
注：x为平均值，s为标准差，CV为变异系数
2 .5 回收率的分析 向血液样品中分别添加 5、10、
20 ng/mL的相思子毒素，每个浓度做3个平行，同时做3个
空白对照，测定相思子毒素含量，计算回收率，结果(表2)。
表2 回收率测定结果
添加浓度(ng·mL-1) 测定浓度(ng·kg-1) 回收率(%) 平均回收率(%) CV(%)
4.3 86 87 6.4
4.2 84
4.5 90
9 90 89 5.4
8.8 88
8.9 89
18.0 90 91 5.7
18.2 91
18.2 91
20
10
5
3 讨论
相思子毒素是从豆科藤本植物相思子(Abrus precato-
rius)的种子中提取的一种剧毒性高分子蛋白毒素，其含
量约占种子2.8%～3.0%。相思子毒素存在4种同族毒素
(isoabrins)，即abrin- a、abrin- b、abrin- c、和abrin- d，相对分子
质量介于63～67 ku之间，它们由不同的基因所编码，但
同属于一个多基因家族；其中abrin- b、abrin- c由于其B链
凝集活性低而只有较弱的细胞毒性作用；而 abrin- a、
abrin- d则有极强的细胞毒性，小鼠的LD50为0.04 μg/kg，
成年人摄入的致死剂量为5.0～7.0 μg/kg，其毒性强度是
蓖麻毒素 (小鼠LD50 3.0 μg/kg)的70多倍，已被列为潜在
的重要毒素战剂和生物恐怖病原物质之一 [6- 7]。
目前检测相思子毒素的方法通常有免疫分析法和生
物质谱法。生物质谱法需要使用昂贵的基质辅助激光解
吸电离质谱或电喷雾质谱，目前普及还较困难。而免疫分
析法具有灵敏度高、便于检测生物样品等优点。其中，酶
联免疫技术由于操作简便、方法快速、仪器相对简单等优
点应用日益广泛 [8- 10]。
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Chin J Convalescent Med , Sep . 2010 , Vol . 19 , No . 9
图1 便携式简易人体测量装置基本组成设计
本研究利用相思子毒素的单抗和多抗建立了相思子
毒素的双抗夹心ELISA检测方法，能在几小时内检测几十
到上百个样品，且不需要复杂的仪器设备，样品预处理简
单，检测成本低，检测结果准确可靠，在现场监控和基层
检测中有着广阔的推广应用前景。
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(收稿日期：2010- 05- 25 )
文章编号：1005- 619X(2010 )09- 0842- 02
便携式简易人体测量装置的组合创新
510515 广州军区广州疗养院 谭莉 向忠民 郑军
【摘要】 目的 组合创新一种用于心血管危险评估及筛查的便携式简易人体测量装置。方法 将小型人体磅秤、微量血糖
血脂仪、电子计算器及分别经过改良的踝肱电子血压计、人体周径测量尺、使用说明、评估卡整装于一个具有拉杆式身高测
量仪的便携箱内，用于基层部队心血管危险筛查。结果 该便携式简易人体测量装置设计轻巧，使用方便，对于心血管危险
因素评估及分层可获得与实验及特诊检查后综合评估同样的效果。结论 该便携式简易人体测量装置大大提高了基层部
队医疗单位预测评估心血管代谢危险的能力，值得进一步研究推广。
【关键词】 便携式；简易人体测量；心血管危险；研制
【Abstract】 Objective To innovate a simple and portable human body measuring device and technology for evaluating cardiovascu-
lar diseases.Methods The portable human scale，mini blood sugar and blood fat instrument，electronic calculator，manuals as well as
improved electric sphygmomanometer for measurement of ankle-brachial index，body-perimeter measurement ruler and manuals assess-
ment manual were placed into a box and used in screening for cardiovascular diseases in the basic-level military officers.Results
This device is characterized by delicate design and convenient use，which can get the same result as generalized assessment with labo-
ratory test and special detection for the risk assessment and layering of cardiovascular diseases.Conclus ion This device greatly im-
proves the ability of the basic-level military hospitals to evaluate the risk of cardiovascular diseases，which is worth for further study
and development.
【Key words】 Portable；Simple human body measurement；Risk of cardiovascular diseases；Develop
1 引言
随着社会经济的发展和生活方式的转变，心血管疾
病已经成为威胁人们健康的第一大杀手 [1]。早期预防和
干预心血管疾病，尤其是心血管代谢危险的发生和发展，
是心血管医学领域研究的重点和热点，也是保证我军担
负军事斗争重要使命的需要。预防、预测心血管疾病及危
险，在医院条件下可采用检验、特诊等医疗手段。近年来
的研究证实，简易人体测量对于心血管代谢危险也能起
到同样的预测评估作用 [2]。基层部队大多驻扎在边远的
区域，急需一种携带方便的人体测量装置及技术组合，根
据这一需要我们在临床实践的基础上研制了一套便携式
简易人体测量装置，现介绍如下。
2 基本组成设计(图1)
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