全 文 ：487 倍)剂量范围内春砂叶油对哺乳动物体细胞染色体及生
殖细胞无致突变作用，未显示明显遗传毒性。本研究结果为
春砂叶油的开发利用以及临床安全使用提供重要的科学
依据。
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红蓼石油醚部位抗肿瘤化学成分研究
苏峰平， 楼一层* ， 章杜前， 胡佳兴， 王 晨， 赵 玲
(武汉理工大学化学工程学院，湖北 武汉 430070)
收稿日期:2011-07-14
基金项目:国家自然科学基金(30870249，81173509) ;武汉理工大学研究生自主创新项目(2010-ZY-HG-008)
作者简介:苏峰平(1988—) ，男，硕士，从事天然药物化学。E-mail:sufengping2007@ 163． com
* 通信作者:楼一层，博士，教授，主任药师。Tel:13808629228，E-mail:louyiceng@ 163． com
摘要:目的 研究红蓼石油醚部位抗肿瘤化学成分。方法 采用 MTT法测定红蓼石油醚部位对肺癌细胞，神经胶质瘤，
宫颈癌细胞，胃癌细胞，人口腔表皮样癌细胞的抑制作用，并采用气质联用法分析鉴定化学成分。结果 MTT法检测，红
蓼石油醚部位对所选 5 种肿瘤细胞均有一定的抑制作用，经过毛细管色谱分离、气相色谱分析工作站分析，确定了 48 个
化合物，主要化学成分为烯炔烃类、酯类以及醇类。结论 MTT法测定红蓼石油醚部位抗肿瘤活性灵敏度高、重复性好，
利用 GC-MS分析鉴定红蓼脂溶性成分，具有快速、稳定的特点，可用于红蓼成分的分析鉴定。
关键词:红蓼;MTT;化学成分;气质联用
中图分类号:R284． 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)05-0938-03
红蓼为蓼科植物荭草 Polygonum orientale L 的全草，别
名天蓼。除西藏外，广布于全国各地，野生或栽培。红蓼为
中药复方抗癌散中主要组成部分，具有清热解毒、散血消瘀、
消积止痛、健脾利湿、除湿通络的功效;但对于红蓼的有效成
分物质基础研究一直较为薄弱，本实验对红蓼全草的醇提物
中石油醚部位进行抗肿瘤活性成分研究，并对石油醚部位化
学成分采用气质联用的方法进行分析，为红蓼植物的开发利
用和质量标准的制定提供依据［1］。
1 仪器与材料
1. 1 材料 测定细胞:SPAC-1 细胞(肺癌细胞)、SGC7901
细胞(胃癌细胞)、U87 细胞(神经胶质瘤)、HeLa 细胞(宫颈
癌细胞)、KB 细胞(人口腔表皮样癌细胞)、人正常肝细胞
LO2(来源:复旦大学药学院)。红蓼药材(安徽亳州中药材
公司，经武汉理工大学楼一层教授鉴定)。
1. 2 仪器 二氧化碳培养箱(319S /N，Forma Scientific，美
国) ;1550 型全自动酶标仪(德国 BIO-RAD) ;烤箱(深圳市
兴元创电热科技有限公司) ;96 孔细胞培养板(美国 Costar
公司) ;微量加样器(日本立洋公司) ;瓦里安 431GC-210 MS
气质联用仪(美国瓦里安) ;GC-MS solution 色谱工作站和
NIST-05 质谱数据库。
2 方法与结果
2. 1 样品制备 将红蓼药材阴干切段，采用 8 倍的 75%的
乙醇回流提取，提取两次。醇提物回收乙醇，将回收后溶液
以石油醚萃取，回收溶剂，得到石油醚部位浸膏。
2. 2 MTT法测定红蓼石油醚部位的对各种肿瘤细胞的抑
制作用［2-3］ 将处于对数生长期的各种肿瘤细胞用胰酶消
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化后配制成密度为 1. 0 × 104 个 /mL 的细胞悬液，按照1 000
～ 10 000个细胞 /孔接种于 96 孔板上，每孔加 100 μL的细胞
悬液。
将平板置于 37 ℃，5% CO2 的湿度培养箱中培养 24 h
后，分别加入质量浓度为 0. 001、0. 01、0. 1、1. 0、10、100 μg /
mL的红蓼各部位的石油醚部位提取液 100 μL，每个样本的
不同质量浓度设置平行的 6 个孔;对照组加入不含样本的培
养液 100 μL，再放入培养箱中孵育 24 ～ 72 h。
用快速翻板法倒掉培养液，每孔加入用不含血清的
1 640按 5 mg /mL的质量浓度新鲜配制的 MTT溶液 100 μL，
温育 4 h，使 MTT被充分还原为甲瓒，再次倒掉上清液，每孔
加 DMSO(二甲基亚枫)200 μL，用平板摇床摇匀后，使用酶
标仪测定光密度值(OD) (检测波长为 570 nm) ，以溶剂对照
处理的细胞为对照组，按照公式计算红蓼石油醚部位对细胞
的抑制率，实验结果见表 1。
表 1 红蓼石油醚部位对 5 种肿瘤细胞的抑制作用 (n =6)
Log［g /L］ SPAC-1 细胞存活率 /% SGC7901 细胞存活率 /% U87 细胞存活率 /% HeLa细胞存活率 /% KB细胞存活率 /%
－ 6 102. 145 101. 284 3 100. 040 5 104. 782 6 91. 313 65
－ 5 99. 793 81 98. 822 46 98. 098 71 97. 632 85 82. 156 61
－ 4 93. 470 79 93. 251 81 94. 417 48 95. 845 41 81. 985 45
－ 3 91. 649 48 81. 394 93 85. 153 72 83. 913 04 86. 350 02
－ 2 89. 175 26 49. 945 65 79. 669 9 74. 396 14 95. 121 95
－ 1 81. 821 31 39. 918 48 72. 137 4 22. 560 39 79. 246 90
2. 3 红蓼石油醚部位气质联用分析
2. 3. 1 供试品制备 将石油醚部位浸膏采用丙酮溶解，配
成质量浓度为 5 mg /mL的丙酮溶液，作为供试品溶液。
2. 3. 2 GC-MS分析条件［4-9］ 色谱柱为石英毛细管柱:VF-5
MS(30 m × 0. 25 mm) ;载气为高纯氦气，分流比 5 ∶ 1，体积流
量 2. 0 mL /min，进样量为 1 μL，柱前压 50 kPa;质谱接口温度
280 ℃，EI源温度 230 ℃，电子轰击能量为 70 eV，扫描范围
50 ～ 500 amu，无延时，归一化法计算含有量，分析结果见表
2，表 3。
表 2 红蓼石油醚部位 GC-MS成分分析结果
序号 化合物名称 分子式 相对分子量 tR /min 质量分数 /%
1 邻苯二甲酸二甲酯 C10H10O4 194 7. 341 0. 103
2 α-白菖考烯 C15H20 200 8. 566 0. 042
3 十二烷酸乙酯 C14H28O2 288 8. 984 0. 03
4 三环［5，2，2，0(1，6) ］-2-亚甲基-6R，8，8-三甲基十一烷基-3R-醇 C15H24O 220 9. 712 0. 071
5 β-桉叶醇 C15H26O 166. 26 10. 196 0. 211
6 N-(2-(3-吲哚基)乙基)乙酰胺 C12H14 N2O 202 11. 264 0. 05
7 三环［4，4，0，0(2，7) ］-3R-甲醇-8E-癸烯 C15H24O 220 11. 342 0. 079
8 (R)-3-异丙基十二酸甲酯 C17H34O2 270 11. 473 0. 075
9 3R，7R，11S，15R-四甲基-2S-十六碳烯-1-醇 C20H40O 296 12. 759 0. 342
10 扁柏酸乙酯 C16H24O2 248 12. 890 0. 251
11 1-二十碳烯 C20H38 278 13. 266 0. 037
12 邻苯二甲酸 1-丁酯 2R-乙基己酯 C20H30O4 334 13. 363 0. 184
13 7R-甲基-8Z-十六碳烯酸 C17H32O2 268 13. 647 0. 103
14 (2R，5R，6S)-6，10-二甲基-2-(1-甲基醚)-螺［4，5］癸烷-9-烯-6-醇 C15H24O 220 13. 927 0. 378
15 三环［5，1，0，0(2，4) ］3，3，8，8-四甲基-5E-辛烯-5-丙酸 C15H22O2 234 14. 250 1. 534
16 (R)-3-甲基十五烷酸甲酯 C17H34O2 270 14. 722 0. 096
17 (3Z，13E)-3，13-十八碳二烯-1-醇 C18H34O 266 15. 259 0. 055
18 邻苯二甲酸-1-(3-壬炔基)酯 1-丁酯 C21H28O4 344 15. 656 0. 32
19 (R)-2-异丙基十六烷酸 C19H38O2 298 16. 140 4. 808
20 十六烷酸乙酯 C18H36O2 284 16. 642 2. 46
21 (10E，12Z)-10-12-十八碳二烯酸 C19H34O2 294 20. 317 0. 086
22 (6Z，9Z，12Z，15Z)-6，9，12，15-二十二碳四烯酸甲酯 C23H38O2 346 20. 591 0. 109
23 3，7R，11R，15S-四甲基-2E-十六碳烯-1-醇 C20H40O 296 21. 091 0. 902
24 1-亚油酸单甘油酯 C21H38O4 354 23. 020 0. 976
25 1-(9Z-十八烯)酸单甘油酯 C20H40O4 356 23. 370 2. 147
26 油酸乙酯 C20H38O2 310 23. 827 0. 647
27 (R)-2-异丙基十六酸甲酯 C21H42O2 326 24. 202 0. 631
28 4-甲基-7-苄氧基碳酰-L-苯丙氨酸香豆素酯 C27H23NO6 457 31. 862 0. 846
29 4，4-二甲基-22，24-胆甾二烯-5-醇 C29H48O 412 32. 807 1
30 豆甾醇 C29H48O 412 33. 113 0. 272
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续表 2
序号 化合物名称 分子式 相对分子量 tR /min 质量分数 /%
31 1，9-二甲基-7-甲氧基-9-氢-吡啶并［3，4-b］吲哚 C14H14N2O 226 34. 017 0. 075
32 (2R，3R)-(+)-花旗松素 C15H12O7 304 34. 379 0. 052
33 二十醇酸乙酯 C22H44O2 340 34. 594 0. 144
34 β-谷甾醇 C29H50O 414 35. 862 0. 064
35 4-苯基-9-吖啶氨 C19H14N2 270 36. 000 0. 072
36 十六烷 C16H34 226 36. 017 0. 105
37 γ-谷甾醇 C29H50O 514 36. 861 3. 052
38 α-法尼烯 C15H24 204 37. 066 6. 717
39 (1-氧基-1-醛基环丙基)三异丙基硅烷 C13H26O2 Si 242 39. 138 0. 602
40 2-吡咯烷丁酸 C28H44O7N2 520 39. 757 0. 595
41 邻苯二甲酸二(十三烷基)1-酯 C34H58O4 530 40. 687 1. 128
42 二十烷酸 C20H40O2 312 42. 420 3. 428
43 邻苯二甲酸二 1-辛酯 C24H38O4 390 43. 519 1. 188
44 10，11-二甲氧基马钱子碱 C23H26N2O4 394 44. 560 2. 893
45 豆甾醇 C29H48O 412 46. 770 3. 29
46 9-二十炔 C20H38 278 47. 944 11. 443
47 4-豆甾烯-3-酮 C29H48O 412 50. 378 4. 287
48 乙酸羽扇醇酯 C35H52O2 468 51. 286 0. 464
表 3 红蓼中主要挥发性物质的相对质量分数
主要挥发性物质 种类 相对质量分数 /%
烯炔烃类 5 18. 311
烷烃类 4 1. 624
酯类 17 10. 953
醇类 11 9. 645
酸类 6 10. 554
酮类 5 7. 357
3 讨论
3. 1 对于 SPA-C1 细胞，石油醚部位提取物在用药质量浓度
为 100 μg /mL时，随着提取物质量浓度的增加，抑制率逐渐
增加。对于 SGC7901 细胞，石油醚部位有着较好的抑制作
用，随着用药质量浓度的增加，抑制率逐渐增加，当用药质量
浓度达到 100 μg /mL 时，石油醚部位对肿瘤的抑制率达到
60. 09%。对于神经胶质瘤细胞，石油醚部位提取物的抑制
率相对较低，质量浓度为 100 μg /mL 时，抑制率仅为
27. 87%。对于宫颈癌细胞，石油醚部位的抑制作用随着用
药质量浓度的增加而增大，当用药质量浓度为 100 μg /mL
时，其抑制率分别达到 77. 44%，对于人口腔表皮样癌细胞，
低质量浓度石油醚部位基本无抑制作用，当质量浓度增加至
100 μg /mL时，抑制率为 20. 74%。
3. 2 综上所述，红蓼石油醚部位提取物对于各种不同的肿
瘤细胞抑制作用都不相同，石油醚部位对 SGC7901 细胞、宫
颈癌细胞的抑制效果较好，并呈现一定的质量浓度依赖性，
其中具有抗肿瘤活性的单体有待进一步的研究［10］。
3. 3 红蓼石油醚部位中烯炔烃类物质是主要化学成分，其
相对质量分数占总石油醚部位的 18. 311%，酯类成分所占比
例仅次于烯炔烃类物质，烷烃类物质所占成分最少，仅占石
油醚部位的 1. 624%。
3. 4 石油醚部位中化学成分所占前三的物质为 9-二十炔
烃，α-法尼烯，2-异丙基十六烷酸，分别占石油醚部位质量分
数的 11. 443%，6. 717%，4. 808%。
3. 5 将所制备的供试品溶液进行重复性实验，按照气质联
用同一方法进样 6 次，实验过程温度控制严格，结果显示样
品出峰时间 RSD以及峰面积 RSD均在 3%以内，证明此方法
重复性良好，可以满足供试样品的定性和定量要求。
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