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中国民族民间医药
Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy
民 族 医 药
Ethnomedicine and Ethnopharmacy
维吾尔药罗勒不同提取部位对ECV304和Raw264.7
细胞毒性的相关研究
何志琴1　阿布力孜·阿布杜拉2　艾尼瓦尔·吾买尔1　周文婷1　盛　磊2　依巴代提·吐乎提1﹡
1.新疆医科大学药理教研室；2.新疆医科大学生化教研室，新疆　乌鲁木齐　830054
【摘　要】：目的：确定维吾尔药罗勒的不同极性提取部位的细胞毒性，为后续研究提供可靠的实验依据。方法：采用MTT比色法筛
选出最佳的细胞铺板密度及给药浓度，并检测罗勒5个不同提取部位对ECV304和Raw264.7细胞的毒性作用，进而确定各部位药的IC50值。结
果：两种细胞在96孔板中的最佳接种密度均为1×105个/ml，在溶媒DMSO的最大终体积浓度为1%的条件下，OBL-乙醇、OBL-石油醚，OBL-
氯仿，OBL-乙酸乙酯，OBL-正丁醇IC50值分别为320，62.4，29.3，84.8，258μg/ml。结论：维药罗勒各提取部位对ECV304和Raw264.7细
胞有不同的毒性作用，为后续研究提供了较为可靠的实验依据。
【关键词】：罗勒；MTT；细胞毒性；IC50；浓度筛选
【中图分类号】R29　　　　【文献标识码】A　　　　【文章编号】1007-8517（2010）08-162-3
罗勒(Ocimum basilicum L.)是唇形科罗勒属植物，是
维吾尔医[1]应用历史悠久的常用药材之一，有抗炎、抗氧
化、降血脂、祛痰等作用。现代化学研究表明，罗勒的成
份主含挥发油类、黄酮及其苷类、香豆素类，此外还含有三
萜类和生物碱类等成分。目前对维药罗勒药理作用的研究主
要采用的是提取物，研究表明其乙醇提取物往往有更好的效
果，所以本文进一步对维药罗勒的乙醇总提取物及4个不同
萃取部位进行研究，确定其对细胞的毒性作用，并对体外细
胞药物干预实验的主要影响因素进行研究，为后期进行有效
部位的筛选及体外药效学研究提供实验依据，该实验操作流
程对其它体外细胞药物干预实验也有一定的参考作用。
1　材料与方法
1.1　药物
将从新疆吐鲁番采集的罗勒全草阴干后，剪碎，称取
适量药材，用70%乙醇室温密闭浸泡1h后超声30min，提取3
次，合并滤液，减压浓缩回收乙醇得提取物，取部分提取
物加适量水分散后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正
丁醇萃取，包括母液共得到5个不同极性的提取部位，用
OBL-乙醇、OBL-石油醚，OBL-氯仿，OBL-乙酸乙酯，OBL-
正丁醇表示，分别减压浓缩回收各部位溶剂，并进行冷冻
干燥。实验时，用二甲基亚砜(DMSO)溶解干燥物，15000r/
min离心10min，取上清，热压灭菌后，-20℃保存备用，实
验前用DMEM培养基稀释成相应浓度。
1.2　细胞株
ECV304细胞和Raw264.7细胞均购自武汉大学细胞库
（中国典型培养物保藏中心CCTCC）。
1.3　主要试剂与仪器
DMEM干粉（Gibco）；胎牛血清FBS（杭州四季青）；
MTT干粉（Sigma），胰蛋白酶（Sigma），DMSO（Sigma），
其他试剂均为国产分析纯。
低温高速离心机（Beckman CoulterTM，美国）；生
物安全柜（HERA safe，德国）；倒置显微镜（Leica，
德国）；CO2培养箱（HERAEUS，日本）；全自动酶标仪
（BECKMAN COULTER AD340）
1.4　方法
1.4.1　DMSO浓度和细胞铺板密度的筛选
用棋盘滴定法[2]筛选其浓度。对细胞进行常规培养[3]，
取对数生长期的ECV304细胞和Raw264.7细胞，消化离心后制
备成单细胞悬液，将ECV304细胞用含体积分数为10%FBS的
DMEM培养基分别稀释成浓度为1.6×106、8.0×105、4.0×
105、2.0×105、1.0×105、5.0×104个/ml；Raw264.7细胞
分别稀释成5.0×105、4.0×105、3.0×105、2.0×105、1.0
×105、5.0×104个/ml，分别以200μl/孔接种到96孔培养板
中，每个细胞数浓度加一横排，为避免边缘效应的产生，培
养板周围各孔中只加入200μl无菌PBS溶液，置37℃、5%CO2
培养箱中培养24h后，观察细胞生长情况，吸弃孔内液体，
分别加入终体积分数为0、0.25%、0.5%、1%、2%DMSO的培养
基，200μl/孔，每两竖排一个浓度，置37℃、5%CO2培养箱
中培养24h后，吸弃孔内液体，换成180μl/孔的无血清培
养基，然后每孔加入20μl 5mg/ml的MTT溶液，37℃避光温
育4h后吸弃孔内液体，每孔加入150μlDMSO，490nm波长下
测定其吸光度OD值。
1.4.2　罗勒五个提取部位的半数抑制浓度的确定
用含10%FBS的DMEM培养基将OBL-乙醇、OBL-石油醚，
OBL-氯仿，OBL-乙酸乙酯，OBL-正丁醇溶液分别稀释成
196.50，114.5，396，650，359μg/ml，每种药物再分别
以2倍和5倍进行4次倍比稀释，得到两类5种不同浓度梯度
的药物。
取对数生长期的Raw264.7细胞和ECV304细胞，消化离
心后，分别用含10%FBS的DMEM培养基稀释成浓度为1×105个
/ml，以200μl/孔接种到96孔培养板中，置37℃、5%CO2培
养箱中培养24h后，吸弃孔内液体，分别以200μl/孔加入
配制好的五种不同浓度的药物，Raw264.7细胞加入2倍稀释
的一类，ECV304细胞加入5倍稀释的一类。设置1%DMSO溶媒
对照组及空白组，每组设3复孔，置37℃、5%CO2培养箱中
培养24h后，吸弃孔内液体，用PBS洗一次，换成180μl/孔
的无血清培养基，然后每孔加入20μl 5mg/ml的MTT溶液，
37℃避光温育4h后吸弃孔内液体，每孔加入150μlDMSO，
490nm波长下测其OD值，计算细胞存活率，并通过作图确定
各药的IC50值。
1.5　实验结果计算　
存活率=药物OD值/对照组OD值×100%
1.6　统计学处理
数据用SPSS统计软件处理，所有结果用 sx ± 表示，采
用方差分析和两两比较，P＜0.05为有统计学意义。
2　结果
2.1　DMSO浓度和细胞铺板密度的筛选
通过观察发现，两种细胞分别接种于96孔培养板培养
24h后，以2.0×105个/ml和1.0×105个/ml两种细胞密度进
行铺板的Raw264.7细胞长到80%～90%融合状态，适合进行
基金项目：国家自然科学基金（No：30660210）。
作者简介：何志琴，新疆医科大学药理学研究生，研究方向：心血管药理。
通讯作者：依巴代提·吐乎提，新疆医科大学药理教研室教授。
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药物干预实验；而ECV304细胞则在以1.0×105个/ml的密度
进行铺板的细胞适合进行药物干预实验。
MTT结果显示，不同浓度的DMSO对ECV304细胞均无毒性
（P＞0.05）；而对Raw264.7细胞有不同的影响，其中体积
分数为0.25%、0.5%、1%的DMSO组与正常组比较均无统计学
差异（P＞0.05），而体积分数为2%的DMSO组对细胞有较大
毒性，与其它组比较均有显著性差异（P＜0.01）。表明低
浓度的DMSO对细胞的影响较小，实验中配制药物时应注意
DMSO的浓度不能过高。
图1 Ecv304细胞铺板密度与DMSO浓度的筛选
图2 Raw264.7细胞铺板密度与DMSO浓度的筛选
2.2　罗勒五个提取部位的半数抑制浓度的确定
由表1、表2可看出，罗勒不同提取部位对两种细胞的
生长有不同的影响，各部位药高浓度对Raw264.7细胞的毒性
均大于ECV304细胞；低浓度时，OBL-石油醚及OBL-乙醇可促
进Raw264.7细胞增殖，而对ECV304细胞无明显增殖作用。
由图3可看出，极性较大的OBL-正丁醇及OBL-乙醇对
Raw264.7细胞的IC50值最大，OBL-氯仿的IC50值最小，对细
胞有较大的毒性。
1.OBL-石油醚；2.OBL-氯仿；3.OBL-乙酸乙酯；4.OBL-正丁醇；
5.OBL-乙醇
图3 罗勒的五个提取部位对Raw264.7细胞的IC50值
3　讨论
MTT比色实验[4]是一种检测细胞存活和生长的方法，通
过间接反映活细胞数量而广泛用于一些生物活性因子的活
性检测、抗肿瘤药物筛选及细胞毒性实验等。
在MTT比色法中，IC50[5]就是以对照组的吸光度值减少
一半所需的药物浓度，还相当于药物对培养细胞的最小致
死剂量的平均值，作为反映药效的定量指标，在各种药物
的筛选中广泛应用。
表1 罗勒五个提取部位的不同浓度对Raw264.7细胞毒性的影响
组别 加药浓度(µg/ml) OD值( sx ± ) 存活率(%)
空白 0.00 0.990±0.038 100
DMSO 2µl/孔 0.957±0.012 96.7
OBL-石
油醚
12.28 1.131±0.088** 114
24.56 1.024±0.033 104
49.13 0.709±0.018** 71.6
98.25 0.071±0.006** 7.17
196.50 0.065±0.001** 6.53
OBL-氯
仿
7.16 0.955±0.003 96.4
14.31 0.782±0.003** 79.0
28.63 0.502±0.056** 50.7
57.25 0.429±0.009** 43.3
114.50 0.126±0.043** 12.7
OBL-乙
酸乙酯
24.75 0.925±0.015 93.4
49.50 0.738±0.050** 74.6
99.00 0.427±0.033** 43.1
198.00 0.149±0.004** 15.0
396.00 0.054±0.004** 5.49
OBL-正
丁醇
40.63 1.106±0.018 111
81.25 1.015±0.031 103
162.50 0.826±0.011** 83.4
325.00 0.351±0.069** 35.4
650.00 0.126±0.007** 12.7
OBL-乙
醇
22.44 1.250±0.017** 126
44.88 1.188±0.026** 120
89.75 1.033±0.044 104
179.50 0.984±0.078 99.4
359.00 0.369±0.013** 37.2
与空白组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
表2 罗勒五个提取部位的不同浓度对ECV304细胞毒性的影响
组别 加药浓度(µg/ml) OD值( sx ± ) 存活率(%)
空白 0.00 0.585±0.010 100
DMSO 2µl/孔 0.605±0.011 103
OBL-石
油醚
1.54 0.617±0.009 106
6.14 0.618±0.004 106
24.60 0.622±0.006 106
98.30 0.506±0.008 86.5
393.00 0.044±0.005 7.46
OBL-氯
仿
1.79 0.615±0.009 105
7.16 0.573±0.018 98.1
28.60 0.507±0.024 86.6
114.50 0.430±0.004 73.6
458.00 0.100±0.007 17.2
OBL-乙
酸乙酯
3.09 0.627±0.019 107
12.40 0.594±0.018 102
49.50 0.622±0.024 106
198.00 0.182±0.029 31.1
792.00 0.098±0.006 16.8
OBL-正
丁醇
2.54 0.612±0.003 105
10.16 0.564±0.014 96.5
40.63 0.551±0.023 94.1
162.50 0.578±0.031 98.7
650.00 0.148±0.010 25.4
OBL-乙
醇
1.40 0.616±0.004 105
5.61 0.617±0.004 106
22.40 0.609±0.004 104
89.80 0.597±0.014 102
359.00 0.485±0.014 83.0
与空白组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
（下转第170页）
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中国民族民间医药
Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy
护 理 研 究
Nursing Research
妊娠合并二尖瓣病变的围产期保健
许丽旋
晋江市医院妇产科，福建　晋江　362200
【摘　要】：妊娠期合并心脏病占妊娠1%，是导致孕产妇死亡的四大原因，仅次于产后出血对患有心脏病的育龄妇女，分析其病情能
否承担妊娠和分娩的过程，不能胜任者，应劝其避孕或适时终止妊娠；能继续妊娠者，应给予定期产期检查及健康保健，防止心力衰竭。
【关键词】：二尖瓣；妊娠；妊娠合并心脏病；产前检查；保健；分娩；产褥期；护理
【中图分类号】R741.25　　　　【文献标识码】A　　　　【文章编号】1007-8517（2010）08-170-1
妊娠期合并心脏病占妊娠1%，是导致孕产妇死亡的四
大原因，仅次于产后出血。妊娠合并心脏病的种类以风湿性
心脏病最常见，其中又以二尖瓣病变最常见。二尖瓣狭窄最
常见的并发症为肺水肿.心律失常，充血性心理衰竭；单纯
二尖瓣关闭不全多能耐受妊娠及分娩，产褥期心脏负荷的增
加，较少发生肺水肿和心力衰竭。心脏病孕妇最易发生心衰
的时期是妊娠32-34周，分娩期，产后最初3天内，应高度重
视，密切观察监护。
对患有心脏病的育龄妇女应由内科及产科医生共同诊
治，分析其病情能否承担妊娠和分娩的过程，不能胜任者，
应劝其避孕或适时终止妊娠；能继续妊娠者，应给予定期
产期检查及健康保健，防止心理衰竭。
1　妊娠期保健
1.1　加强产前检查　产检应从确定妊娠时开始，在妊娠20
以前，应每2周行产前检查1次。20后，尤其是32周以后，
发生心衰的机会增加，产前检查应每周1次。每次产检应注
意心功能情况及变化，必要时请内科会诊，及时处理，发
现早期心衰征象应住院治疗，二尖瓣狭窄孕妇，即使未出
现症状，亦应于预产期前2周住院待产。
1.2　饮食　注意饮食卫生，应高蛋白、高维生素、低盐、
低脂肪饮食。多吃水果蔬菜，预防便秘。孕16周以后，每
日食盐量不超过4-5g。
1.3　积极防止各种影响心功能的因素　如贫血，维生素B
族缺乏，心律失常，妊高症，预防各种感染，心脏病孕妇，
身体抵抗力差，平时又缺少锻炼，很容易得伤风感冒、腹泻
等感染性疾病，所以要根据气温变化，及时增减衣服，小心
着凉。另外，在怀孕晚期要节制性生活，以免发生产褥期感
染。一旦患病，要及时就医。
1.4　加强心理护理　耐心解答患者和家属的各种疑问，以
消除不良心理因素，减轻心理负担，注意休息。安排好日常
工作和生活，每日至少有10小时睡眠时间，避免过度疲劳，
防止情绪过度激动。
1.5　加强健康教育　健康教育内容包括妊娠与心脏病的相
互影响，心衰的诱因及预防方法，早期心衰的识别及其他
常规产前健康教育的知识等。
2　分娩方式
（1）阴道分娩：心功能I-Ⅱ级，胎儿不大，胎位正
常，宫颈条件良好者，可考虑在严密监护下经阴道分娩。
（2）我院妊娠合并心脏病孕妇分娩方式以剖宫产术为
主，剖宫产率达83.4%，做好围术期的各种护理工作是预防
心衰的关键。术前要及时按医嘱予以支持疗法和预防性抗
生素疗法，以期改善营养和预防感染，进行必要的宣教和
心理护理，同时做好各种物品的准备。术后根据麻醉和心
功能情况置患者于舒适的体位，加强生命体征的观察，并
定时观察切口、宫底、宫缩、恶露等产科情况，根据心功
能予以心电监护，持续监测血氧饱和度、血压等，用输液
泵控制输液滴速和补液量，尤其要加强第1个24h的观察和
护理，以防心衰发生。
3　产褥期护理
（1）产后3日内尤其24小时内仍是发生心衰的危险时
期，产妇须密切监护。保证产妇充足的睡眠和休息，保持
外阴清洁，保持大便通畅，必要时给缓泻剂，产后应观察2
周才能出院，定期产后复查。
（2）哺乳问题 心功能1、2级的产妇提倡母乳喂养。
心功能3级或以上者均予以中药麦芽和芒硝回奶，同时配合
服用大剂量的维生素B6。
参考文献
[1] 魏碧蓉.妊娠合并心脏病[J].高级助产学，2001，9.
[2] 乐杰.妊娠合并内科疾病（第五版）[J].妇产科学.
（上接第163页）
利用体外培养的细胞模型研究中药的药理作用，可以
深入探讨中药的作用机制，并为中药的临床应用提供理论依
据。本实验主要以与血栓和炎症有关的ECV304细胞和Raw264.7
细胞为模型，采用MTT比色法，探讨维药罗勒的5个不同极性
提取部位对细胞的毒性作用，并确定出各部分药的IC50值，
同时，对细胞给药实验有关的条件进行筛选。
通过实验发现，DMSO的含量低于1%时对ECV304细胞和
Raw264.7细胞均无毒性作用，所以各部分药物用DMSO完全
溶解后，以含1%的DMSO的药物浓度作为细胞的最大给药浓
度。通过MTT实验结果并结合细胞的生长状况，确定ECV304
和Raw264.7细胞的接种浓度均为1.0×105个/ml。
通过细胞药物干预实验，进一步证明了Raw264.7细
胞较ECV304细胞对药物的刺激具有更高的敏感性，相同浓
度下，罗勒各提取部位对Raw264.7细胞的毒性均比ECV304
细胞大，OBL-正丁醇及OBL-乙醇对细胞的毒性作用较小，
而OBL-石油醚、OBL-正丁醇及OBL-乙醇低浓度可促进
Raw264.7细胞增殖，对Ecv304细胞无明显增殖作用。本实
验确定了罗勒五个部位对Raw264.7细胞的IC50值，进而推出
各提取部位对ECV304细胞的IC50均比Raw264.7细胞大。该实
验为维药罗勒进一步的有效成分分析及体外药效学研究提
供了较为可靠的实验依据，该实验操作流程对其它体外细
胞药物干预实验也有一定的参考作用。
参考文献
[1] 新疆维吾尔自治区卫生厅.维吾尔药材标准[S].乌鲁木齐：新疆科技卫
生出版社，1993：183-187.
[2] 魏文青，赵满仓，刘晶，等.MTT肿瘤药物敏感试验的方法学研究[J].临
床肿瘤学杂志，2008，13（10）：871-874.
[3] 司徒镇强，吴军正.细胞培养[M].西安：世界图书出版公司，2004：250-2.
[4] 郭以河，张闽峰，孟家榕.MTT法体外药敏试验研究进展及临床应用[J].
东南国防医药，2005，7(1)：77-78.
[5] RI弗雷谢尼.动物细胞培养基本技术指南(分子克隆实验指南系列)（第4
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