全 文 ：【药学研究】
　　基金项目:国家科技基础平台项目 , [ 2004DKA30410] 。
作者简介:杨红兵 (1963-), 男 , 湖北中医学院药学院副教授。
湖北蕲春产凹叶厚朴的质量研究 Ⅱ
杨红兵 , 石　磊 , 詹亚华 , 乔　明 , 潘洪林
(湖北中医学院药学院 , 湖北 武汉 430065)
　　摘要:目的　研究湖北蕲春产凹叶厚朴的质量。方法　对蕲春产凹叶厚朴 10批样品 (干皮)的 HPLC图谱进行
图谱相似度比较和特征性分析。结果　蕲春凹叶厚朴的个体间指纹图谱相似度较差 , 但与对照用指纹图谱的相似度较
高 (>0.9)。共有峰 (特征峰)6个 , 其中厚朴酚与和厚朴酚峰面积的比值 、 厚朴酚与和厚朴酚峰面积之和总峰面积
的比例 , 可分别作为蕲春凹叶厚朴 (干皮)的 HPLC图谱特征 (特征Ⅰ 、 Ⅱ )。结论　本研究为湖北蕲春凹叶厚朴药
材的品质鉴定提供了依据。
关键词:蕲春凹叶厚朴;厚朴酚;和厚朴酚;指纹图谱
中图分类号:R282.71　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1008-987X(2007)04-0026-03
TheQualityStudyonHouBuoftheConcave
LeafPlantedinQichun, HubeiI
YANGHong-bing, SHILei.ZHANYa-hua, QIAOMing, PANHong-lin
(HubeicolegeofTraditionalChineseMedicine, Wuhan430061, China)
Abstract:Objective:TostudythequalityofHouBuwithconcaveleafplantedinQichun, Hubei.Methods:Thesiminari-
tiesandcharacteristicsofHPLCfingerprintsof10 batchesofsmaples(drypeels)werecomparedandanalyzed.Results:There
existslitleindividualdiferencesofHPLCfingerprintsamongsamples, however, thereexistshighlysiminaritesofthatinthecon-
trolgroup(>0.9).Therearefivecharacteristicabsorptionbands, amongthem, thearearatioofthemagnololpeaktothe
honokiolpeak(characteristicⅠ )andthearearatioofthemagnololpeakandthehonokiolpeaktothetotalpeakareas(charac-
teristicⅡ)arecharacteristicsoftheHPLCchromatogramofHouBusamples.Conclusions:Thisstudycanprovidethebasisfor
theHoubuIandHoubuIIsqualityidentification.
Keywords:Keywords:QichunHoubuwithCancaveLeaf;Cortex;Magnolol;Honokiol;Fingerprint
　　在对湖北蕲春凹叶厚朴质量研究 [ 1]的基础上 , 又进行了
HPLC指纹图谱的研究。现将结果报告如下。
1　仪器与试药
Waters600-2996高效液相色谱仪;甲醇为色谱纯 , 水为重
蒸馏水。
2　方法
2.1　色谱条件
CosmosilC18 -MS-Ⅱ色谱柱 (4.6mm×250mm, 5μm);
流动相甲醇 -水 (67∶33)溶液;流速 1.0ml· min-1;柱温
25℃;检测波长 230nm。
2.2　参照峰的选择
通过比较对照品的保留时间和光谱图 , 对供试品色谱峰的
归属进行分析 , 其中和厚朴酚出峰时间适中 , 与相邻峰分离较
好 , 且含量较大 , 故定为参照峰 , 以计算其它共有峰的相对保
留时间和相对峰面积。
2.3　精密度
取同一供试品 (蕲春凹叶厚朴)溶液 , 按色谱条件连续进
样 5次 , 所得色谱图中各共有峰相对保留时间 (RRT)的相对
标准偏差 (RSD)≤ 1.35%, 相对峰面积 (RA)的 RSD≤
1.84%, 表明仪器精密度良好。
2.4　稳定性
取同一供试品 (蕲春凹叶厚朴)溶液 , 按色谱条件分别于
0、 2、 4、 8、 12、 24、 48h进行测定 , 各共有峰相对保留时间
的 RSD≤1.12%, 相对峰面积的 RSD≤1.85%, 表明供试品在
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48h内稳定。
2.5　重复性
取同一批药材 (蕲春凹叶厚朴)样品 5份, 分别对所制备的
供试品溶液进行检测, 图谱图中各共有峰相对保留时间的 RSD≤
0.83%, 相对峰面积的RSD≤1.85%, 表明方法的重复性良好。
2.6　相似度计算方法
采用国家药典委员会编制的 “中药色谱指纹图谱相似度评
价系统 A版” 计算相似度 , 并生成蕲春凹叶厚朴的对照用指纹
图谱。
3　结果
3.1　HPLC指纹图谱相似度
10批蕲春凹叶厚朴干皮样品 HPLC色谱图比较见图 1, 其
色谱图相似度计算结果见表 1, 蕲春凹叶厚朴 (干皮)的对照
用指纹图谱见图 2。另外 , 蕲春 、 庐山凹叶厚朴与恩施 、 罗田 、
蕲春凹叶厚朴间色谱图相信度计算结果见表 2。
表 1　蕲春凹叶厚朴干皮样品色谱图相信度计算结果
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 对照指纹图谱
S1 1
S2 0.991 1
S3 0.994 0.997 1
S4 0.96 0.985 0.981 1
S5 0.867 0.911 0.907 0.968 1
S6 0.981 0.99 0.988 0.982 0.912 1
S7 0.974 0.99 0.986 0.989 0.931 0.998 1
S8 0.797 0.851 0.845 0.929 0.988 0.866 0.89 1
S9 0.759 0.817 0.812 0.905 0.977 0.838 0.862 0.998 1
S10 0.768 0.823 0.822 0.906 0.98 0.823 0.848 0.986 0.985 1
对照指纹图谱 0.932 0.964 0.961 0.995 0.988 0.962 0.974 0.959 0.94 0.943 1
图 1　 10批蕲春凹叶厚朴 (干皮)HPLC色谱图比较 (230nm)
图 2　蕲春凹叶厚朴 (干皮)对照用指纹图谱 (230nm)
　　由图 3可见 , 蕲春凹叶厚朴干皮各样品间 HPLC色谱图中
峰数 、 峰形 、 峰位 (保留时间)等基本一致。 由表 1可知 , 样
品间色谱图相信度较差 , 但与对照用指纹图谱的相似度均大于
0.9。说明共有峰的保留时间或相对保留时间较为一致 , 而峰
面积或相对峰面积有所差异。
表 2　不同产地 、 品种厚朴干皮样品色谱相似度计算结果
恩施
厚朴
罗田
厚朴
蕲春
厚朴
蕲春凹
叶厚朴
庐山凹
叶厚朴
恩施厚朴 1
罗田厚朴 0.993 1
蕲春厚朴 0.921 0.929 1
蕲春凹叶厚朴 0.808 0.757 0.836 1
庐山凹叶厚朴 0.829 0.775 0.829 0.896 1
　　由表 2可知 , 品种上 , 蕲春凹叶厚朴与庐山凹叶厚朴相
似 , 而与蕲春厚朴以及恩施 、 罗田产厚朴不同。
3.2　指纹图谱的建立
蕲春凹叶厚朴药材甲醇浸提物的所有色谱峰在 45min内全
部出现 , 记录 45min色谱图即得。比较 10批供试品溶液的色谱
图 , 确定 6个共有峰 (特征峰), 其中强峰 3个:峰 2 (未知且
并非单一成分)、 峰 4 (和厚朴酚)、 峰 6 (厚朴酚)、 以 4号峰
作为参照峰 , 计算各共有峰相对保留时间 (RRT)和相对峰面
积 (RA), 分别见表 3、 4, 结果符合指纹图谱要求。蕲春凹叶
厚朴 , 以及不同产地 、 不同品种间厚朴酚与和厚朴酚峰面积之
比 (特征Ⅰ )、 厚朴酚与和厚朴酚峰面积之和占总峰面积的比
例 (特征Ⅱ)分别见表 5、 6。
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表 3　蕲春凹叶厚朴 (干皮)的 HPLC共有峰RRT
峰号 样品S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 均值 RSD(%)
1 0.0785 0.0806 0.0812 0.0822 0.0819 0.0818 0.0816 0.0826 0.0819 0.0814 0.0814 1.34
2 0.1112 0.1118 0.1131 0.1133 0.1114 0.1114 0.1137 0.1151 0.1151 0.1132 0.1129 1.23
3 0.2158 0.2181 0.2200 0.2206 0.2206 0.2214 0.2220 0.2221 0.2266 0.2231 0.2209 1.20
4 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 0
5 1.4767 1.4748 1.4787 1.4761 1.4801 1.4789 1.4733 1.4788 1.4841 1.4801 1.4782 0.20
6 1.5842 1.6094 1.6097 1.6086 1.6131 1.6098 1.6079 1.6061 1.6221 1.6150 1.6086 0.57
表 4　蕲春凹叶厚朴 (干皮)的 HPLC共有峰 RA
峰号 样品S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 均值 RSD(%)
1 0.2962 0.4697 0.3085 0.6337 0.9505 0.2557 0.4350 0.1815 0.5053 0.8156 0.5825 59.98
2 1.5636 4.1487 2.1009 6.5055 9.9405 2.8446 4.0798 15.6603 7.6301 12.9138 6.7388 67.36
3 0.1079 0.4643 0.1929 0.5406 0.5914 0.1262 0.4898 0.8420 0.4013 0.6133 0.4370 51.12
4 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 1.0000 0
5 0.0446 0.2433 0.0561 0.7392 0.8258 1.3250 1.6066 3.1063 0.0750 2.8497 1.0872 99.00
6 6.4581 12.2166 6.2518 11.9395 10.6555 7.9930 9.9710 13.2790 5.6366 9.6850 9.4086 27.33
由表 3、 4可知蕲春凹叶厚朴共有峰 (特征峰 6个)相对保留时间较为一致 (RSD<1.4%), 而相对峰面积有所差异 , 与图 3、 表 1结果相同。
表 5　蕲春凹叶厚朴 (干皮)HPLC图谱的特征Ⅰ 、 Ⅱ值
特
征
样品
S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 均值
Ⅰ 6.46 12.22 6.25 11.9410.66 7.99 9.97 13.28 5.64 9.68 9.41
Ⅱ 0.73 0.70 0.71 0.59 0.46 0.65 0.62 0.40 0.43 0.38 0.57
表 6　不同产地厚朴 (干皮)HPLC图谱的特征Ⅰ 、 Ⅱ均值 (n=10)
特征
产地 , 品种
恩施
厚朴
罗田
厚朴
蕲春
厚朴
蕲春
凹叶厚朴
庐山
凹叶厚朴
Ⅰ 0.93 3.64 4.43 9.41 5.58
Ⅱ 0.74 0.79 0.72 0.57 0.49
　　由表 5、 6可知 , 不同产地 、 品种厚朴酚与和厚朴酚峰面
积的比值 、 厚朴酚与和厚朴酚峰面积之比和占总峰面积的比例
存在明显差异 , 这两个指标可作为厚朴药材 , 包括蕲春凹叶厚
朴 (干皮)的 HPLC图谱特征 (特征Ⅰ 、 Ⅱ)。
4　讨论
(1)酚类成分特别是厚朴酚与和厚朴酚是中药厚朴的主要
有效成分 , 含量较高。因此 , 厚朴酚与和厚朴酚的含量是评价
厚朴药材质量的重要指标。同时以厚朴酚与和厚朴酚为主 , 综
合多种成分及相互之间的数量 、 比例的 HPLC色谱指纹图谱 ,
能够有效地表征厚朴内在品质 , 为厚朴药材的质量控制与品质
鉴别提供有效的方法 。蕲春凹叶厚朴个体间指纹图谱相似度较
差 , 但与对照用指纹图谱的相似度较高 (>0.9)。根据国家药
典委员会编制的 “中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版” 生
成的对照用指纹图谱可作为蕲春产凹叶厚朴的标准指纹图谱。
共有峰 (特征峰 6个), 其中厚朴酚与和厚朴酚峰面积的比值 、
厚朴酚与和厚朴酚峰面积之和占总峰面积的比例 , 可分别作为
蕲春凹叶厚朴 (干皮)的 HPLC图谱特征 (特征Ⅰ 、 Ⅱ)。
(2)本研究对 HPLC指纹图谱的提取方法 , 流动相及洗脱
方式 , 检测波长及色谱柱的选择等都经过了大量的实验探索 ,
并比较了不同产地厚朴药材的图谱特征 , 所建立的方法精密
度 、 稳定性 、 重复性等均符合指纹图谱研究的技术要求。提取
方法有:①药典方法 [ 2] (0.2g样品加甲醇浸提 24h, 定容);
②0.2g样品加甲醇浸提 24h后超声处理 30min再定容;③以
65%乙醇溶液代替甲醇 , 余同①法;④以 65%乙醇溶液代替甲
醇 , 余同②法;⑤1g样品加 65%乙醇溶液 20ml回流 120min,
取续滤 3ml用 65%乙醇溶液定容 100ml。结果显示 , 药典方法
出峰适中且分离好;超声处理会使厚朴酚 、 和厚朴酚含量降
低 , 并使峰数减少 , 有破坏或改变成分之嫌;65%乙醇溶液提
取得到的成分 、 种类和数量均较甲醇有所增加 , 特别是回流提
取 , 但极性杂质陡增 , 除厚朴酚 、 和厚朴酚以外 , 色谱峰分离
较差 , 甚至无法分开。
流动相及洗脱方式的实验中 , 考察了甲醇 -水 、 水腈 -
水 、 甲醇 -水 -冰醋酸等多种流动相及其配比 , 并比较了等度
与梯度洗脱 , 结果表明 , 以甲醇 -水 (67∶33)为流动相 , 等
度洗脱时 , 基线较平稳 , 色谱峰得到了较好分离。
检测波长的选择中 , 采用二级管阵列检测器获取不同波长
的色谱图 , 重点比较了 294nm、 252nm与 230nm波长处的色谱
图。结果 230nm指纹图谱中各色谱峰分离良好 , 峰数较多 , 厚
朴酚 、 和厚朴酚的吸收较大 , 故选择 230nm进行检测。同时对
CosmosilC18 -MS-Ⅱ色谱柱和 AichromBond-AQC18色谱进行
考察 , 前者出峰峰形良好 , 整体基线较平。
致谢:湖北中医学院 2007届本科实习生李德婧 、 蓝晓庆 、
吴联华 、 柳海罗 、 陈传波 、 张友恒等参与部分工作。
参考文献:
[ 1] 　杨红兵 , 石磊 , 詹亚华 , 等 .湖北蕲春凹叶厚朴的质量研究
[ J] .湖北中医杂志 , 2007, 29 (12):50.
[ 2] 　国家药典委员会 .中国药典 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005.176.
(收稿日期: 2007-04-10　编辑:郑晓屏)
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