全 文 ：2015年 第 3期 广 东 化 工
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青牛胆中巴马汀、药根碱的含量测定
陈旭冰 1,2，皱育刚 3，杨秀 1，缪菊连 1*
(1．大理学院药学院，云南 大理 671000；2．云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南 大理 671000；
3．中国石油吉林石化公司电石厂，吉林 吉林 132021)
[摘 要]采用高效液相色谱法，使用 YMC-Pack Pro C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 µm)，流动相为水(含 0.5 %醋酸)-甲醇洗脱，流速为 1.0
mL/min，检测青牛胆的不同部位中巴马汀和药根碱的含量。实验结果表明，青牛胆块根和藤茎中均含有巴马汀和药根碱。该检测结果可为青牛
胆和宽筋藤的物质基础研究提供参考。
[关键词]青牛胆；巴马汀；药根碱；高效液相色谱法
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2015)03-0121-02
Determination of Palmatine and Jatrorrhizine Contents between Tinospora
Sagittata
Chen Xubing1,2, Zhou Yugang3, Yang Xiu1, Miu Julian1*
(1. College of Pharmacy, Dali University, Dali 671000；2. The Key Laboratory of Medical Insects and Spiders Resources for Development &
Utilization Yunnan Province, Dali 671000；3. Calcium Carbide Plant of Jilin, Petrochemical company, Petrochina, Jilin 132021, China)
Abstract: To determinate the contents of palmatine and jatrorrhizine in the rhizom and ratan of Tinospora sagittata. HPLC was applied. The ginsenoside
palmatine and jatrorrhizine were separated on YMC-Pack Pro C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 µm) with water and methanol as mobile phase, at a flow rate of 1.0
mL/min. The palmatine and jatrorrhizine were found in the rhizom and ratan of Tinospora sagittata. The data will be important guide of the studies on material basis
of Tinospora sagittata.
Keywords: tinospora sagittata；palmatine；jatrorrhizine；HPLC
青牛胆 Tinospora sagittata(Oliv. Gagnep.)为防己科青牛胆属
常绿藤本植物的块根，别名九龙胆、金牛胆、青鱼胆、地苦胆、
金果榄等。青牛胆属植物有 20多种，其中我国有 7种，主要分布
于江西、湖南、广西、福建、四川、贵州和云南等地。青牛胆用
于治疗扁桃体炎、急性咽喉炎、口腔炎、急性胃肠炎、菌痢、胃
痛等症[1,2]。青牛胆还用来治疗毒蛇咬伤[3]、糖尿病[4]，并具有免
疫调节作用[5]。《中华本草傣药卷》记载，中华青牛胆的藤茎名
为宽筋藤，味苦，性凉，具有调补气血，镇心安神，舒经活络的
功效，主治气血虚，乏力，心悸心慌，风湿性关节炎，肢体关节
酸痛，跌打损伤等症[6,7]。此外，宽筋藤还具有抗炎[8]、抗辐射作
用[9]。青牛胆块根富含黄酮[10]、二萜类化合物和生物碱，其中巴
马汀和药根碱含量最高[11-14]，而中华青牛胆的藤茎中含有挥发油
[15]。可见青牛胆不同部位的化学成分存在差异，在疗效上也并不
一致，块根主要用来治疗胃肠炎，而藤茎主要用来治疗风湿性关
节炎，其物质基础尚不明确。为了探究青牛胆不同部位的化学成
分的异同，本文检测了贵州产青牛胆中巴马汀和药根碱的含量。
1 仪器与试药
青牛胆块根、青牛胆藤茎和青牛胆叶(采自贵州黔东南州剑河
县革东镇)，经大理学院生药学教研室周浓副教授鉴定为防己科植
物青牛胆 Tinospora sagittata(Oliv. Gagnep.)，样品于 50℃下烘干
后粉碎，过 20目筛，备用；巴马汀和药根碱对照品(自制)经熔点、
LC-MASS、1H-NMR和 13C-NMR证实；水为去离子水，甲醇为
色谱纯，其他试剂均为国产分析纯。Agilent1200高效液相色谱仪
(美国安捷伦)；紫外可见光检测器(美国奥泰)；RE-2000型旋转蒸
发仪(上海亚荣仪器有限公司)；AE240天秤[梅特勒-托利多仪器
(上海)有限公司]。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取巴马汀和药根碱对照品适量，加甲醇制成每 1 mL
含巴马汀 0.019 mg和药根碱 0.011 mg的混合对照品溶液。
2.2 供试品溶液的制备
分别取青牛胆块根、茎和叶样品各 3份，干燥，粉碎(过四号
筛)。精密称取样品各 1.0 g，各加入 80 %乙醇 60 mL，置 80℃水
浴上保持微沸 2 h，减压过滤，滤液用旋转蒸发仪蒸干后用乙醇溶
解，转移至 25 mL容量瓶中，并定容至刻度，用 0.45 µm微孔滤
膜过滤，取续滤液作为样品供试液。
2.3 色谱条件
色谱柱为 YMC-Pack Pro C18(250 mm×4.6 mm，5 µm)；流动
相：用水(含 0.5 %醋酸)-甲醇洗脱，洗脱程序见表 1；检测波长 345
nm，流速 1.0 mL/min；柱温 25℃；进样量 20 µL。理论塔板数以
巴马汀峰计不低于 4000。检测结果见图 1对照品 HPLC图谱。
表 1 流动相洗脱程序
Tab.1 Mobile phase elution program
时间/min 甲醇/% 水/%
0~20 36 64
1．巴马汀；2．药根碱
图 1 对照品 HPLC图谱
Fig.1 HPLC of reference substance
图 2 青牛胆块根的 HPLC图谱
Fig.2 HPLC of Tinospora sagittata root
[收稿日期] 2014-12-17
[作者简介] 陈旭冰(1978-)，女，云南大理人，副教授，主要研究方向为天然药物化学。*为通讯作者。
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2.4 系统适用性试验
分别取对照品溶液和供试品溶液各 20 µL进样测定。在 2.3
项色谱条件下，巴马汀色谱峰与样品中其他相邻组分色谱峰达到
基线分离，理论塔板数＞4000。
2.5 线性关系考察
分别取对照品的储备液 0.2，0.4，0.8，1.6，3.2 mL，用乙醇
定容到 5 mL，摇匀，得到系列浓度的对照品溶液。分别进样 20 µL，
记录峰面积。以对照品峰面积(Y)对浓度(X，µg/mL)做线性分析，
得到巴马汀和药根碱的回归方程分别为：Y=1757.2X+67.5，
r=0.9996；Y=1445.1X+78.2，r=0.9994。线性范围分别在 0.15~0.82
µg和 0.13~0.71 µg。
2.6 精密度考察
在同一色谱条件下，取对照品溶液重复进样 6次，测得巴马
汀和药根碱峰面积的 RSD分别为 0.42 %、0.31 %。
2.7 稳定性考察
取供试液，在同一色谱条件下，于 0，4，8，12 h分别测定
巴马汀和药根碱峰面积，计算峰面积的 RSD分别为 0.56 %、0.64
%，即供试液在 12 h内基本稳定。
2.8 重复性考察
精密称取同一批块根样品 5份，按“2.3”项下方法制备，依
法测定，巴马汀和药根碱峰面积积分值的RSD分别为 1.41 %、1.44
%，表明方法重复性较好。
2.9 加样回收率考察
采用加样回收法，精密称取青牛胆块根样品(巴马汀和药根碱
的含量分别为 0.14 %和 0.10 %)粉末 1.0 g，共 6份，精密加入巴
马汀和药根碱对照品适量，按 2.2项下供试品制备方法制备，进
样 20 µL，按上述色谱条件测定，分别计算巴马汀和药根碱的平
均加样回收率和 RSD，结果见表 2和 3。测得平均回收率分别为
97.41 %、98.47 %，RSD分别为 0.90 %、0.49 %。
2.10 样品含量测定
采集不同生长年限的青牛胆植株及时干燥处理(50℃)，依法
制备供试液、测定含量，见图 2青牛胆块根的 HPLC图谱。结果
见表 4。
表 2 巴马汀加样回收率试验
Tab.2 Recovery test of palmatine
取样量/g 样品中含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1.009 1.421 1.432 2.823 97.91
1.017 1.432 1.457 2.858 97.87
1.012 1.422 1.446 2.811 96.06 97.41 0.90
1.014 1.451 1.439 2.862 98.05
1.006 1.463 1.465 2.899 98.02
1.015 1.478 1.443 2.871 96.53
表 3 药根碱加样回收率试验
Tab.3 Recovery test of jatrorrhizine
取样量/g 样品中含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
1.009 1.034 1.062 2.083 98.77
1.017 1.057 1.043 2.077 97.79
1.012 1.028 1.056 2.073 98.96 98.47 0.49
1.014 1.079 1.034 2.098 98.55
1.006 1.093 1.071 2.142 97.95
1.015 1.064 1.081 2.132 98.80
表 4 不同生长年限青牛胆中巴马汀和药根碱的含量
Tab.4 Palmatine and jatrorrhine contents of Tinospora sagittata
生长
年限/年
块根/% 藤茎/% 叶/%
巴马汀 药根碱 巴马汀 药根碱 巴马汀 药根碱
1 0.13 0.08
2 0.10 0.05
3 0.10 0.04
4 0.14 0.10
5 0.13 0.04 0.04 0.01 - -
注：含量均以干品计；n=3
3 讨论
不同生长年限青牛胆块根中巴马汀和药根碱的含量有明显变
化，在第一年时含量均较高，随着生长年限的增加，含量逐渐降
低，生长到第四年时(块根长到 3.0克以上)含量达到最大值，之后
含量略有下降。实验同时检测了生长年限为 5年的青牛胆的藤茎
和叶中巴马汀和药根碱的含量(其它生长年限青牛胆的茎和叶所
采样品太少，未进行检测)，从藤茎中检测出巴马汀和药根碱，其
中巴马汀和药根碱的含量比块根中低，叶中未检测到巴马汀和药
根碱。该检测结果表明，巴马汀和药根碱主要集中在块根部分。
青牛胆的块根主要用来治疗肠胃炎，而藤茎主要用于治疗风湿性
关节炎，它们的疗效是否与巴马汀和药根碱有关，还需作进一步
的研究。该检测结果可为青牛胆和宽筋藤的物质基础研究提供参
考。
实验过程中流动相分别采用水(含 0.5 %醋酸)-甲醇和水(含
0.5 %醋酸)-乙腈进行洗脱，发现水(含 0.5 %醋酸)-甲醇的分离效果
优于水(含 0.5 %醋酸)-乙腈，故选用水(含 0.5 %醋酸)-甲醇作为流
动相。此外，实验过程中还发现，巴马汀和药根碱对温度比较敏
感，当外界温度升高时，分离效果显著降低，甚至两个峰完全重
合，因此，在检测时需选择合适的柱温并考虑外界温度对实验的
干扰。
参考文献
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(下转第 126页)
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2.4作图及结果计算[1C)]
2.4.1 <的推算
；《+,(2-啊+…
根据‘ 2 M ,暂忽略后面项，选取
^ 卜)_[]
a=7�8(即：<1)范围内的几组滴定值，以(“)[〃]对（“）作图
v « v (2~n)[H] y n-^{\-n)[H] ^ (3-啊
(注：令,=_W; 2_ wm ； 2_iR
r n-p^{\-n)[H]-p!!{2-n){H]2 (4^)[/f]
(3-)[孖]3 ； 3 (H )，（见图 2)，
直线的截距为爲“，斜率为A�
Fig.2 The calculating curve of
由曲线方程可得：fy.UxlO1��A=2.52><1021(粗值）
2.4.2 A的推算
；；普例 M[+] ~“-、「 ^-,2~-Pi +A ~7—^“ + •••
根据丨2-”)!^」 丨2-) ，暂忽略后辱项，选
取a=6~7(即1<«<2)范围内的几组滴定值，以卩)!^] 对
(“)[-]
卜)作图(见图3)，直线的截距为A,斜率为(粗值)。
由曲线方程可得：A=1.67X1021�A=2.47X103°(粗值）
KajL
以此类推，分别推算出<、P, 再经过1对，
Ka2=^- Ka^-L
P,...， 辟换算，计算结果为：
^/=4.96xl03, ^2=2.70x103, Kas^M^W4, Ka4=232><\0\
Ka5=5.72x\0\ Ka6=\.62x\0\ Ka7=4.27><\0u, miO]1
3结果与讨论
本论文用pH法来测定乙二胺四亚甲基膦酸的电离常数。最后
通过图表分析和用形成函数法处理相关的数据。最终算得乙二胺
四亚甲基膦酸的电离常数为：^/=4.96xl(T3�^=2.70x10^,
K^lMxW4 , Ka4=232x\0-6 f 愚尸5.72><108，ATfl(5=1.62xlO9,
Ka7=4.27x\0-l\ /^尸1.40><10]1。由推算得到的&/到/^的数值可
知，电离常数逐渐变小，这是由于同离子效应，上一级电离生成
的氢离子对下一级电离起到抑制作用所致，由此可知，实验结果
具有一定的合理性；另外，在没加入氢氧化钾溶液的情况下，乙
二胺四亚甲基膦酸溶液的pH为2.38，[//]= 5.02x10、与用pH法测
得的/^=4.96xl(T3接近，因此应用该方法推算得的数据与理论相
符，具有较高的可靠性。因此，应用pH电位法来测定EDTMPA的
电离常数，方法可行，实验结果可信。该实验结果进一步完善了
多元弱酸——乙二胺四亚甲基膦酸的基本性质参数，为该物质的
进一步研究应用提供理论参考。
Fig.3 The calculating curve of A
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