全 文 ： 表 3 姜黄素对血清 HA、LN的影响( x±s, n=8)
组别 剂量(mg/kg) HA(μg/l) LN(μg/l)
正常组 147.88±39.62 131.01±36.30
模型组 548.03±98.47## 363.89±51.79##
姜黄素 50 337.49±66.23＊＊ 287.74±27.66＊
100 249.86±56.07＊＊ 219.56±40.83＊＊
200 201.71±47.86＊＊ 189.44±29.17＊＊
马洛替酯 90 264.97±59.13＊＊ 208.33±28.78＊＊
表 4 各组大鼠肝纤维化程度观察结果
分组 n 纤维化程度(级)
0 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
正常组 8 8 0 0 0 0
模型组 ## 8 0 1 1 4 2
低剂量组 ＊ 9 1 4 2 2 0
中剂量组 ＊＊ 10 2 5 2 0 1
高剂量组 ＊＊ 10 3 5 1 1 0
马洛替酯组 ＊＊ 10 4 4 2 0 0
常结构 ,被重新分割 ,胶原纤维呈宽带状 ,互相连结 ,
细胞变性坏死明显。姜黄素高剂量组肝组织胶原纤
维明显减少 ,肝小叶结构也有所恢复 ,仍有部分点状
细胞坏死。中剂量组肝组织胶原纤维明显减少 ,肝
小叶结构也有所恢复 ,细胞坏死明显。马洛替酯组
肝组织胶原纤维明显减少 ,肝小叶结构基本恢复正
常 ,残存少量点状细胞坏死 。
3 讨论
二甲基亚硝胺(DMN)为一种诱癌剂 ,现常用来
制作实验性肝纤维化模型 ,其机制主要与毒性产物
引起核酸和蛋白质甲基化从而导致坏死有关 。该模
型死亡率相对较低 ,周期短 ,肝纤维化形成相对稳
定 ,其致变类似人类肝病病理改变 ,是以免疫低下尤
其是体液免疫明显低下为特征的动物实验模型。
实验结果表明:姜黄素对 DMN诱导的肝纤维
化具有较明显的预防作用。肝功能的检测提示姜黄
素可以减轻肝细胞的变性和坏死 ,并改善肝细胞功
能。近期的研究表明氧化应激及脂质过氧化是引起
肝细胞损伤与星状细胞活化的重要机制 ,本研究通
过检测肝组织匀浆中 SOD、MDA、GSH-Px含量发
现 ,姜黄素各剂量组的 SOD及 GSH-Px较模型组明
显升高 ,而 MDA显著降低 ,说明姜黄素有直接降低
自由基生成 ,减轻脂质过氧化的作用 。同时在实验
中我们也发现姜黄素也可以抑制细胞外基质的合
成 ,可以明显降低血清中 HA、LN水平 ,说明姜黄素
具有保护肝细胞 ,抑制肝纤维化的作用 ,其作用机制
可能与姜黄素抑制肝星状细胞活化和脂质过氧化有
关。
参 考 文 献
1 刘永刚 ,等 .姜黄素对小鼠实验性肝损伤的保护作用 .
中国中药杂志 , 2003, 8(8)∶756
2 刘永刚 ,等 .姜黄素对四氯化碳损伤原代培养肝细胞的
影响 .中成药 , 2003, 25(3)∶222
3 刘永刚 ,等 .姜黄素抗大鼠肝星状细胞氧应激脂质过氧
化作用的研究 .中成药 , 2004, 26(10)∶829
4 王宝恩 ,等 .中药复方丹参不同剂量治疗肝纤维化实验
研究与临床观察 .肝脏病杂志 , 1993, 1(1)∶67
(2005-06-25收稿)
铁箍散有效成分研究及其抗病毒作用
韩定献 1 倪 芳 1 周志彬1 周 军1 王诗宏 1 杨占秋 2 张国安 3
(1.华中科技大学化学系 ,武汉 430074;2.武汉大学医学院病毒学研究所 ,武汉 430071;3.湖北民院医学
院附属医院 ,武汉 430074)
摘要 目的:对鄂西民族药铁箍散的有效成分及其抗病毒作用进行研究。方法:采用硅胶柱层析分离 , IR、MS
等方法鉴定其结构 , 并进行抗病毒实验。结果:从铁箍散中分离出 1个化合物 , 鉴定为尿囊素 , 抗病毒研究表明它
有抑制流感病毒的作用 。结论:尿囊素为首次从铁箍散中分离得到 , 抗病毒研究为铁箍散临床应用提供了有力的
理论基础。
关键词 铁箍散;尿囊素;病毒;多糖
铁箍散又名拦路虎 、铁板道 、牛舌头草 ,为紫草
科植物琉 璃草 (Cynoglosum zeylanicum(Vahl)
Thunb.)的根 ,为鄂西土家族自治州民间常用草药 ,
且药用历史悠久 ,疗效确切 ,味苦甘平 ,性寒凉 ,具活
血化瘀 、清热解毒 、消肿止痛 、利胆 、拔毒生肌功
效〔1〕。民间主要用于治疗疮疖痈肿 、毒蛇咬伤 、跌
·1096· 中药材第 28卷第 12期 2005年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2005.12.022
打损伤 、骨折等病症 ,尤其是外用治疗化脓性感染 ,
具有消肿止痛 、祛腐生新的独特疗效。但其化学成
分及有效成分尚未见报道 。本研究组自湖北恩施产
铁箍散中提取获得一针晶 ,经 IR、MS等鉴定 ,该化
合物为尿囊素(alantion)。本化合物多发现于非灵
长类动物的嘌呤代谢产物 ,实验证实具有抗炎 、促进
肉芽组织增生 、加速创伤和溃疡愈合的作用 ,我们的
研究发现铁箍散有抑制流感病毒的作用 ,为铁箍散
临床应用提供了有力的理论基础。
1 材料与方法
1.1 材料 琉璃草系从湖北恩施州采得 ,经湖北
中医学院药学系陈科力 、潘宏林教授鉴定为 Cyno-
glosumzeylanicum(Vahl)Thunb.。 MDCK细胞购自
中国医学科学院医药生物技术研究所 , Hep-2细胞
为武汉大学医学院病毒学研究所保存 。病毒:流感
病毒购自北京中国预防医学科学院。单纯疱疹病毒
Ⅰ型 、Ⅱ型 ,柯萨奇病毒 B3型为武汉大学医学院病
毒学研究所保存 。
1.2 实验方法
1.2.1 提取与分离:将铁箍散 5 kg粉碎 ,过 10目
筛 ,以 65%乙醇 4000ml提取三次 ,每次回流 2h(沸
后计时)。合并三次提取液 ,过滤 ,滤液减压回收乙
醇至无醇味 。残留液以乙醇乙酯 1500 ml萃取三
次 ,合并乙醇乙酯液 ,过滤 ,滤液回收尽乙酸乙酯 。
浸膏以甲醇 300ml溶解 ,过滤 ,滤液以硅胶 80 g拌
样 ,干燥 ,研细 ,湿法上柱 ,以氯仿:甲醇(7∶3, V/V)
混合溶剂洗脱 ,分别收集各流份 。其中 72 ～ 97流份
为单一成分 ,合并 ,回收溶剂 ,经氯仿甲醇混合溶剂
反复重结晶 ,得一针状化合物。
1.2.2 药物细胞毒测定:在 96孔微量培养板上 ,
加 0.8×105 / ml浓度的 MDCK或 Hep-2细胞 0.1
ml/孔 , 37℃5%CO2 ,培养 24 h。弃去上清液 ,加不
同浓度含药维持液 ,继续 37℃5%CO2培养 48 h,以
MTT法检测细胞存活率 ,每组浓度重复 4孔 ,并设
正常细胞对照。
1.2.3 药物对病毒增殖的抑制作用:在 24孔培养
板上 ,加 0.8×105 /ml的细胞悬液 1ml/孔 , 37℃5%
CO2培养 24 h。用 1000 TCID50 /0.1ml的病毒攻击
细胞 , 0.1ml/孔 , 37℃5%CO2吸附 1.5 h,加含不同
浓度的含药培养基 , 37℃5%CO2培养 5天观察结果
(流感病毒感染细胞)或 37℃5%CO2培养 24 h(柯
萨奇 B3病毒)/48 h(疱疹病毒感染细胞)观察结
果 ,同时设未感染正常细胞 、病毒感染细胞和阳性药
物对照 , MTT法测定病毒感染细胞存活率 。
1.2.4 细胞存活率测定:采用改良的 MTT法 ,即
吸取细胞上清 ,用 PBS洗一次细胞 ,加入无血清的
MEM培养基(含 MTT5 mg/ml)200 μl/孔 ,继续培养
3h。弃去上清 ,加二甲基亚砜 200 μl/孔 ,振动 ,充
分溶解后 ,在 570 nm波长下记录 OD值(A值)。细
胞存活率 =药物组平均 A值 /细胞对照组平均 A值
×100%。
2 实验结果
2.1 结晶物的鉴定 针状结晶 , mp:238 ～
239.5℃, IRυKBrmaxcm-1:3450, 3330, 2940, 1790, 1720,
1640, 1610, 1520, 1470, 1370, 1320, 1280, 1190,
1010, 810, 780;EIMSm/z(%)150(M), 141, 130,
115, 87(100), 70, 55, 44。与尿囊素标准品的 MS数
据吻合 ,鉴定为尿囊素。
2.2 尿囊素对细胞的毒性作用 将尿囊素以 17.8
μg/ml至 712 μg/ml分别处理 MDCK、Hep-2细胞 ,
未见明显细胞毒作用 ,细胞形态与正常未加药对照
细胞无差异 , MTT法测定细胞存活率亦无显著差
异 ,见表 1。
表 1 尿囊素对细胞的毒性作用
细胞类型 药物浓度(μg/ml)
17.8 89 178 267 356 445 534 712 细胞对照
MDCK 0.19 0.21 0.21 0.20 0.21 0.19 0.21 0.20 0.21
Hep-2 0.21 0.24 0.27 0.22 0.21 0.19 0.24 0.25 0.26
注:表中数字为细胞吸光值(490nm波长)
2.3 尿囊素的抗病毒作用 将尿囊素分别以不同
浓度做抑制单纯疱疹病毒 、柯萨奇病毒 、流感病毒试
验 ,结果显示该药仅对流感病毒有抑制作用 ,并显现
剂量依赖性(表 2),而对单纯疱疹病毒 、柯萨奇病毒
未见抑制作用 。
表 2 尿囊素对不同病毒增殖的抑制作用
病毒种类 药物浓度(μg/ml)
20 40 80 160 320 640
病毒对照
HSV-1 0.01 0.05 0.08 0.07 0.03 0.05 0.03
HSV-2 0.03 0.03 0.07 0.05 0.07 0.02 0.02
CVB3 0.09 0.03 0.07 0.08 0.11 0.13 0.07
流感病毒 0.14 0.15 0.21 0.20 0.20 0.21 0.07
注:表中数字为病毒吸光值(490nm波长)
表 3 尿囊素对病毒复制增殖滴度的影响
病毒种类 药物浓度 (μg/ml)
20 40 80 160 320 640
HSV-1 5.3 5.4 5.2 5.4 5.5 5.3
HSV-2 5.2 5.2 5.4 5.5 5.1 5.0
CVB3 5.1 5.2 5.6 5.4 5.2 5.1
流感病毒 4.7 4.5 3.7 3.5 3.7 4.1
注:表中数字为病毒滴度(logTCID50 /ml)
·1097·中药材第 28卷第 12期 2005年 12月
3 讨论
从本文结果可以看出 ,尿囊素毒性很低 ,从我们
的结果可知在 712 μg/ml仍无毒性 ,说明该药安全
性很大 。由表 2、表 3可见 ,该药在一定浓度下对不
同病毒有不同的效果 。我们的研究表明 ,该药在 20
μg/ml～ 640 μg/ml时对疱疹病毒 、柯萨奇病毒无抑
制作用 ,但在此浓度内 ,对流感病毒有抑制作用 ,值
得深入研究 。
致谢:本文红外光谱图 、质谱系国家药物及代谢产物分析中心代
测 ,谨致谢意。
参 考 文 献
1 江苏新医学院编 .中药大辞典.上海:上海科学技术出
版社 , 1992∶1864
(2005-04-28收稿)
活络止痛膏活血通络作用的实验研究
刁飞宇1 李沛波2 苏薇薇 2
(1.中山大学附属第二医院 ,广州 510120;2.中山大学生命科学学院 ,广州 510275)
摘要 目的:研究活络止痛膏活血通络的作用。方法:观察活络止痛膏对小鼠耳廓微循环的影响 、对急性血瘀
大鼠血液流变学指标的影响以及对大鼠皮肤毛细血管通透性的影响。结果:活络止痛膏能明显促进小鼠耳廓微血
管的扩张 , 具有改善急性血瘀大鼠血液流变性的作用 , 能明显抑制组胺诱发的大鼠皮肤通透性的增加。结论:活络
止痛膏具有活血通络的作用 ,本研究为其临床应用提供了实验依据。
关键词 活络止痛膏;活血通络;药效研究
活络止痛膏是用多种名贵中药挥发油制成的外
用制剂 ,笔者研究了活络止痛膏活血通络的作用 ,现
报道如下。
1 实验材料
1.1 药物 活络止痛膏(中山大学广州现代中药
质量研究开发中心提供);万应止痛膏(岭南药厂香
港有限公司提供);复方丹参片(四川康福来药业集
团有限公司生产 ,批号 030602);醋酸泼尼松片(广
西桂南制药集团公司生产 ,批号 041012)。
1.2 动物 昆明种小鼠 ,雌雄各半 ,体重 18 ～ 22
g, SPF级 ,由第一军医大学实验动物中心提供 ,动物
合格证号:2004A063号;SD大鼠 , 雌雄各半 ,体重
170 ～ 220 g, 清洁级 , 由中山大学实验动物中心提
供 ,动物合格证号:粤检证字 2003A070。
1.3 试剂与仪器 乌拉坦(国药集团化学试剂有
限公司生产 ,批号:E60521);盐酸肾上腺素注射液
(上海禾丰制药有限公司产品 ,规格:1 mg/支 ,批
号:31021062);伊文思蓝(中国医药公司北京采购
站分装 ,批号 871225);组胺(上海丽珠东风生物技
术有限公司 ,批号 020351);双光束紫外可见分光光
度计(北京普析通用仪器有限责任公司 ,型号:TU-
1901);BV-100悬丝式血液流变仪(北京同理大众科
技有限公司)。
2 方法与结果
2.1 对小鼠耳廓微循环的影响 参照文献方
法〔1〕 ,将昆明种小鼠随机分为正常对照组(不给予
赋形剂和药物)、赋形剂对照组(赋形剂由凡士林和
石蜡以 1∶1比例配制而成)、活络止痛膏低剂量组
(实验前取活络止痛膏 ,加赋形剂稀释至原药浓度
的 25%)、活络止痛膏中剂量组(实验前取活络止痛
膏 ,加赋形剂稀释至原药浓度的 50%)、活络止痛膏
高剂量组(活络止痛膏不加赋形剂稀释)、万应止痛
膏阳性对照组 、复方丹参片阳性对照组(实验前取
复方丹参片 , 用生理盐水制成 0.09 g/ml的混悬
液),共 7组 ,每组 12只。用乌拉坦 1.0 g/kg麻醉
后 ,将小鼠仰位固定在小鼠耳托上 ,调节显微镜上观
测台的高度 ,使耳廓平展在耳托上 ,表面滴液体石
腊 ,调节冷光源适当亮度 ,在透射光下 ,并使照明光
线与耳廓平面成 45°～ 60°夹角 。正常对照组不给
药物和赋形剂 ,复方丹参片阳性对照组按 0.1ml/10
g体重灌胃给药 ,其余各组小鼠耳廓给予 0.2 g药物
或赋形剂后 ,先在低倍镜下观察耳廓全貌 ,选择适当
部位 ,换用高倍镜进行定点连续观察 。记录各组小
鼠耳廓血管在给药前及给药后 30min时动 、静脉口
径及血流速度 。结果见表 1。
2.2 对急性血瘀大鼠血流流变学指标的影响 参
·1098· 中药材第 28卷第 12期 2005年 12月