全 文 ：第 32 卷 第 7 期
2 0 1 4 年 7 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 7
Jul． 2 0 1 4
中
华
中
医
药
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学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 07． 039
石香薷总黄酮的大孔树脂动态吸附纯化工艺研究
施群1，施淑琴2，俞文英3，钟宇森3
(1．金华市中心医院，浙江 金华 321000;2．金华职业技术学院，浙江 金华 321007;
3．浙江省医学科学院，浙江 杭州 310013)
摘 要:目的:确定 HPD300大孔吸附树脂吸附纯化石香薷总黄酮的工艺条件。方法:采用静态吸附和动态吸
附分离法，确定石香薷总黄酮的纯化工艺条件。结果:HPD300大孔树脂对石香薷总黄酮有良好的吸附分离性能，其
动态吸附分离工艺条件为:石香薷总黄酮上样液(pH =3． 0)浓度为 5． 5 mg /mL，最大吸附量为 41． 58 mg /g，吸附流速
为 2． 0 mL/min，以 8倍柱体积 60%乙醇(pH =8． 0)洗脱，树脂可重复使用 4次。此工艺下石香薷总黄酮的回收率达
89． 12%，纯度为 90． 77%。结论:采用 HPD300大孔树脂吸附分离石香薷总黄酮简便有效，回收率高。
关键词:石香薷;总黄酮;大孔树脂
中图分类号:Ｒ284 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)07-1655-04
On the Purification of Total Flavonoids from Mosla Chinensis by Macroporous Ｒesin
SHI Qun1，SHI Shuqin2，YU Wenying3，ZHONG Yuseng3
(1． Jinhua Municipal Central Hospital，Jinhua 321000，Zhejiang，China;
2． Jinhua College of Profession ＆ Technology，Jinhua 321007，Zhejiang，China;
3． Zhejiang Academy of Medical Sciences，Hangzhou 310013，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To investigate the purification of total flavonoids extracted from Mosla chinensis by HPD300
macroporous resin． Method:The dynamic conditions of adsorption and separation were analyzed with HPD300 macroporous
resin． The flavonoids adsorption capacity was used as the evaluation criteria． Ｒesult:HPD300 had the good performance
for adsorbing and separating total flavonoids from M． chinensis under the following technological conditions:the concentra-
tion of the flavonoids sample extract (pH = 3． 0)was 5． 5 mg /mL． The maximum adsorbing capacity was 41． 58 mg /g;the
current velocity was 2． 0 mL /min;the elutingreagent was 60% ethanol (pH = 8． 0，and eight times as the volume of the
resin)． And HPD300 resin could be used four times． Under these conditions，the experimental yield was 89． 12% and the
contents of total flavonoids in the extract were detected to be 90． 77% ． Conclusion:It is a simple and efficient method to
separate total flavonoids from M． chinensis and the total flavone recovery rate is high．
Key words:Mosla chinensis;total flavonoids;macroporous resin
收稿日期:2014 － 02 － 04
基金项目:浙江省自然科学基金项目(Q12H280035，Y2111058) ;浙
江省科技厅项目(2010Ｒ410055)
作者简介:施群(1975 －) ，男，浙江金华人，副主任中药师，学士，研
究方向:中药学及临床药学研究。
作者简介:施淑琴(1975 －) ，女，浙江金华人，讲师，硕士，研究方
向:中药学教学及研究。E-mail:2950048743@ qq． com。
石香薷为唇形科植物石香薷 Mosla chinensis Maxim．的
地上干燥部分，又名华荠苧，主要产于江西、河北、河南等地
区，其中以江西产量最大、品质最佳［1］。其味辛，性温，归
肺、胃经，具有发汗解表、祛暑化湿、利水消肿之功效，临床
主要用于治疗暑湿感冒、恶寒发热、头痛无汗、腹痛吐泻、小
便不利等症［2］。现代研究表明，其主要含有挥发油，黄酮
类等成分［3 － 5］，具有广谱抗菌、抗氧化、抗炎镇痛、免疫调
节、抑制中枢神经系统等作用［6 － 8］。目前有关香薷挥发油
的研究报道较多，但关于非挥发性部位的研究报道较少。
本课题组前期研究发现，香薷非挥发性部位主要含有黄酮
类成分，具有显著的抗菌、抗病毒活性，具有一定的研究价
值和开发价值。
近年来，大孔树脂已被广泛应用于各种中药药效物质的
分离纯化。尤其是黄酮类化合物分子中常含有羟基和糖苷
键等极性基团，易通过范德华力和氢键作用力，被大孔树脂
吸附［9 －12］。前期静态吸附动力学研究发现，HPD300 大孔树
脂对石香薷总黄酮的吸附分离效果较好(另文发表)。因
此，本文以石香薷总黄酮为考察指标，采用动态吸附法，利用
HPD300大孔树脂分离和富集石香薷总黄酮，为大孔吸附树
脂分离纯化石香薷总黄酮的工艺研究提供实验依据。
1 仪器与试药
BS224S精密电子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公
司);TU －1900双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪
器有限公司);ZHWY －200B恒温震荡器(上海智城分析仪有
限公司);Ｒ －201旋转蒸发仪(上海申顺科技仪器公司)。
芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所(批号:
100080 － 20030) ，所用试剂均为分析纯。HPD300 大孔树脂
购于沧州宝恩化工有限公司。石香薷(批号 100413)购于
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浙江中医药大学中药饮片厂，经本人鉴定为石香薷 A． de-
cumbens Thunb．的干燥全草。
2 方 法
2． 1 石香薷总黄酮提取物的制备
称取石香薷干燥粗粉(过 4目筛)200 g，加 16 倍量0． 1%
HCl －60%乙醇回流提取 4 h，提取 1次，提取液减压浓缩至含
醇量 10%左右抽滤，除去杂质［13］，继续回收溶剂至无乙醇味，
加蒸馏水定容至 100 mL，作为供试品溶液，备用。
2． 2 线性关系考察
精密称取干燥恒重的芦丁对照品 15． 0 mg，加 60%乙
醇溶解定容于 25mL容量瓶，得浓度为 0． 60 mg /mL对照品
溶液，备用。精密吸取标准品溶液 0． 5、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、
5． 0 mL，分别置 25 mL容量瓶中，加入 5%NaNO21． 0 mL，摇
匀，放置 5 min后加入 10% Al(NO3)31． 0 mL，摇匀，放置 5
min后加入 10% NaOH 10 mL，再加 60% 乙醇稀释至 25
mL，混匀，静置 15 min，于最大吸收波长处 506 nm 测定吸
光度，同行试剂空白，以吸光度值为横坐标，以对照品溶液
浓度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程:Y = 3． 2026X +
0． 0346 (r = 0． 9993) ，结果表明芦丁在 0． 3 ～ 3． 0 mg /mL范
围内呈良好的线性关系。
2． 3 大孔树脂的静态吸附和解吸性能研究
2． 3． 1 大孔树脂的筛选 分别称取经预处理的上述各种
大孔树脂 2． 5 g，置 100 mL 具塞磨口锥形瓶中，分别加入
浓度为 3． 70 mg /mL 石香薷总黄酮溶液 25 mL，置温度为
30 ℃的恒温振荡器上振荡吸附 8 h 后，过滤，收集树脂和
滤液。取各滤液 0． 5 mL，按“2． 2”项下方法分别测定其总
黄酮的含量，计算各树脂的吸附量和吸附率。
将上述吸附饱和后收集的树脂分别置 100 mL 具塞磨
口锥形瓶中，分别加入 25 mL 60%的乙醇溶液，置温度为
30℃的恒温振荡器上振荡 8 h 进行静态解吸，收集滤液。
取各滤液 0． 2 mL，按“2． 2”项下方法测定解吸液中总黄酮
的含量，计算各树脂的解吸率和回收率。计算公式如下:
吸附量 =(初始浓度 －平衡浓度)×溶液体积
树脂质量
吸附率 =(初始浓度 －平衡浓度)
初始浓度
× 100%
解吸率 =(解吸液浓度 －解吸液体积)
吸附量 ×树脂质量
× 100%
回收率 =(解吸液浓度 －解吸液体积)
初始浓度 ×吸附液体积
× 100%
结果见表 1。
表 1 不同型号树脂对石香薷总黄酮的
静态吸附和解吸结果(n = 3)
树脂型号
吸附量
(mg /g)
吸附率
(%)
解吸率
(%)
回收率
(%)
HPD100 28． 74 77． 67 94． 28 73． 22
HPD300 30． 91 83． 54 91． 70 76． 60
HPD450 23． 75 64． 18 78． 51 50． 39
HPD600 25． 86 69． 89 81． 42 56． 90
HPD750 27． 18 73． 45 80． 39 59． 04
D101 28． 20 76． 22 82． 77 63． 08
AB － 8 28． 70 77． 57 76． 97 59． 70
由表 1 可知，在相同的实验条件下，不同种类大孔树
脂，对石香薷总黄酮的吸附能力和解吸能力各不相同。综
合吸附量、吸附率、解吸率和回收率比较，HPD300 大孔树
脂的吸附量、吸附率和回收率为最大，解吸率也仅次于
HPD100 大孔树脂，具有良好的吸附性能。故实验选用
HPD300 大孔树脂对石香薷总黄酮进行分离纯化工艺的研
究。
2． 3． 2 pH对 HPD300 大孔树脂的吸附性能的影响 称取
经预处理的 HPD300 大孔树脂 8 份，每份 2． 5 g，置 100 mL
具塞磨口锥形瓶中，分别加入 20 mL 不同 pH 的石香薷总
黄酮溶液，置温度为 30℃的恒温振荡器上振荡 8 h，过滤，
收集滤液。取各滤液 1． 0 mL，按“2． 2”项下方法测定不同
滤液中总黄酮的含量，按“2． 3． 1”项下方法计算树脂的吸
附率，结果见表 2。
表 2 pH对 HPD300 大孔树脂吸附率的影响结果(n = 3)
pH 3． 0 4． 0 5． 0 6． 0 7． 0 8． 0 9． 0 10． 0
吸附率(%) 94． 26 89． 53 86． 33 83． 64 82． 21 80． 28 76． 40 74． 03
由表 2 可知，HPD300 大孔树脂对石香薷总黄酮的吸
附率随着 pH值的增大而逐渐降低，pH = 3． 0 时最大。故
选择上样液 pH为 3． 0。
2． 3． 3 pH对 HPD300 大孔树脂解吸性能的影响 称取经
预处理的 HPD300 大孔树脂 8 份，每份 2． 5 g，置 100 mL具
塞磨口锥形瓶中，分别加入 20 mL浓度为 3． 70 mg /mL (pH
= 3． 0)的石香薷总黄酮溶液，置温度为 30℃恒温振荡器上
振荡 8 h，过滤，收集滤液。取各滤液 1． 5 mL，按“2． 2”项下
方法分别测定滤液中总黄酮的含量，按“2． 3． 1”项下方法
计算吸附量。然后分别加 20 mL上述不同 pH的 60%乙醇
溶液，置温度为 30℃恒温振荡器上振荡 8 h 进行解吸，过
滤，收集滤液。取各滤液 0． 3 mL，依法计算树脂的解析率，
结果见表 3。
表 3 pH对 HPD300 大孔树脂解吸率的影响结果(n = 3)
pH 3． 0 4． 0 5． 0 6． 0 7． 0 8． 0 9． 0 10． 0
解吸率(%) 73． 48 75． 18 78． 77 86． 95 91． 07 94． 24 88． 12 82． 38
由表 3 可知，当解吸液的 pH≤7 时，HPD300 树脂对石
香薷总黄酮随着 pH值的增加而增大，pH = 8． 0 时最大，pH
＞ 8． 0 后，解吸率随着 pH值的增加而降低。故选择解吸液
pH为 8． 0。
2． 4 动态吸附研究
2． 4． 1 上样液质量浓度对吸附量的影响 分别取不同浓
度的上样液，以 1 mL /min 流速通过 HPD300 树脂柱(径高
比 1 ∶ 1)进行动态吸附。测定洗脱液中总黄酮的含量。结
果如图 1 所示。
由图 1 可知，在 1． 11 ～ 5． 55 mg /mL 浓度范围内，洗脱
液浓度上升缓慢，树脂对石香薷总黄酮的吸附率随着上样
液浓度的增加而升高;当上样液浓度超过 5． 55 mg /mL 时，
洗脱液浓度急速上升，树脂对总黄酮的吸附率明显下降。
故选择上样液浓度为 5． 55 mg /mL。
2． 4． 2 上样液流速的考察 称取预处理后的 HPD300 树
脂 2． 5 g，湿法装柱，分别取 20 mL浓度为 5． 55 mg /mL(pH
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图 1 上样液浓度对树脂吸附性能的影响
图 2 动态吸附泄露曲线
= 3． 0 ± 0． 01)的石香薷总黄酮溶液，以 1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、
5． 0 mL /min的流速通过树脂柱，室温下进行动态吸附，分
别收集洗脱液。取各洗脱液0． 5 mL，依法计算树脂的吸附
量，结果见表 4。
表 4 上样液流速对 HPD300
大孔树脂吸附量的影响结果(n = 3)
流速(mL /min) 1 2 3 4 5
吸附量(mg /g) 41． 02 39． 45 36． 43 32． 99 30． 77
由表 4 可知，树脂对总黄酮吸附量随着上样液流速的
增大而逐渐下降。当流速为 1． 0 mL /min时吸附效果最好，
但流速为 2． 0 mL /min时的吸附量和 1． 0 mL /min时相差不
大。为提高吸附效率，故选择上样液流速为 2． 0 mL /min。
2． 4． 3 上样量的考察 称取经预处理后的 HPD300 树脂
2． 5 g，湿法装柱，取浓度为 5． 55 mg /mL(pH = 3． 0 ± 0． 01)
的石香薷总黄酮溶液 300 mL，室温下以 2． 0 mL /min 的流
速通过树脂柱，每 10 mL 收集 1 管，共 30 管。取各管洗脱
液 0． 2 mL，测定其总黄酮的含量，绘制动态吸附泄露曲线，
结果见图 2。
由图 2 可知，洗脱液中石香薷总黄酮的含量随着上样
量的增加而增大。上样量在 10 ～ 50 mL时吸附透过曲线上
升缓慢，此阶段为吸附过程;上样量超过 50 mL 后，吸附透
过曲线陡然上升，说明出现明显泄露;上样量为 210 mL时，
树脂几乎不再吸附样品，此时树脂柱吸附饱和。故样品溶
液最大上柱体积为 50 mL。
2． 4． 4 洗脱剂浓度的考察 取 7 份 20 mL 浓度为 5． 55
mg /mL(pH = 3． 0 ± 0． 01)的石香薷总黄酮溶液，以 2． 0 mL /
min流速在室温下分批加样于 2． 5 g HPD300 树脂柱后，分
别用不同浓度乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。各取洗脱液0． 5
mL，依法计算树脂的吸附量。然后用 80 mL 蒸馏水洗脱
(实验发现用 80 mL蒸馏水即可将树脂柱洗脱至洗脱液无
色) ，再分别加上述乙醇溶液以 2． 0 mL /min流速洗脱，直至
洗脱液无色，分别收集洗脱液。取各洗脱液 0． 5 mL，计算
洗脱率，结果见表 5。
表 5 洗脱剂浓度对石香薷
总黄酮洗脱率的影响结果(n = 3)
乙醇浓度(%) 30 40 50 60 70 80 90
洗脱率(%) 64． 46 75． 24 86． 63 93． 46 89． 03 83． 35 79． 00
由表 5 可知，60%乙醇的洗脱率最高，故确定 60%为
乙醇的最佳洗脱浓度。
2． 4． 5 洗脱剂流速的考察 取 5 份 20 mL 浓度为 5． 55
mg /mL(pH = 3． 0 ± 0． 01)的石香薷总黄酮溶液，以 2． 0 mL /
min流速在室温下分批加样于 2． 5 g HPD300 树脂柱，收集
洗脱液，各取 0． 5 mL，依法计算树脂柱的吸附量。用 80 mL
蒸馏水洗脱，再加浓度为 60%(pH = 8． 0 ± 0． 01)的乙醇溶
液，各以 1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0 mL /min 的流速洗脱，直至
洗脱液无色，分别收集洗脱液。取各洗脱液 0． 2 mL，计算
其洗脱率，结果见表 6。
表 6 洗脱剂流速对
石香薷总黄酮洗脱率的影响结果(n = 3)
洗脱剂流速
(mL /min)
1 2 3 4 5
洗脱率(%) 95． 52 94． 09 89． 90 82． 19 74． 00
由表 6 可知，随着洗脱剂流速的增加，总黄酮的洗脱率
逐渐下降。由于流速为 1． 0 mL /min和 2． 0 mL /min时的洗
脱率相差不大，为提高洗脱效率，故最终选择洗脱剂流速为
2． 0 mL /min。
2． 4． 6 洗脱终点的确定 取 5 份 20 mL浓度为 5． 55 mg /
mL(pH = 3． 0 ± 0． 01)的石香薷总黄酮溶液，以 2． 0 mL /min
流速在室温下分批加样于 2． 5 g HPD300 树脂柱，蒸馏水
洗脱柱子至洗脱液无色，再用 60%(pH = 8． 0 ± 0． 01)的乙
醇溶液以 2． 0 mL /min 的流速进行洗脱，每 10 mL 收集 1
管，共收集 15 管。取各管洗脱液，测定洗脱液中石香薷总
黄酮含量，绘制其动态洗脱曲线，结果见图 3。
图 3 动态洗脱曲线
由图 3 可知，在乙醇用量为 0 ～ 10 mL 时，洗脱液中总
黄酮的含量逐渐增加;当乙醇用量继续加大时，洗脱液中总
黄酮的浓度逐渐降低;当乙醇用量为 60 ～ 70 mL时，石香薷
总黄酮基本洗脱干净。故确定洗脱剂体积为 70 mL。
2． 4． 7 树脂重复使用次数的考察 按上述确定的分离纯
化工艺条件，在同一树脂柱上重复操作 6 次，结果见表 7。
由表 7 可知，HPD300 树脂重复使用 4 次后，对石香薷
总黄酮的吸附率和回收率明显下降，提示重复使用 4 次后
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应对树脂进行再生处理。故树脂重复使用以 4 次为宜。
表 7 树脂重复使用次数的考察结果(n = 3)
使用次数
吸附量
(mg /g)
吸附率
(%)
洗脱率
(%)
回收率
(%)
1 41． 58 93． 64 95． 16 89． 12
2 41． 00 92． 35 91． 67 84． 65
3 40． 24 90． 63 88． 14 80． 11
4 38． 34 86． 36 85． 38 73． 73
5 35． 89 80． 84 82． 07 66． 34
6 34． 34 77． 33 76． 83 59． 42
2． 4． 8 分离纯化前后石香薷总黄酮纯度的考察 按照优
化的工艺进行吸附、洗脱，将所收集的洗脱液减压浓缩回收
乙醇，低温真空烘干至恒重，得纯化后的石香薷总黄酮粉
末;直接浓缩石香薷总黄酮提取液，低温真空烘干至恒重，
得未经纯化的石香薷总黄酮粉末，测定纯化前后石香薷总
黄酮的含量，计算石香薷总黄酮纯度，结果见表 8。纯化后
样品总黄酮含量较纯化前增长了 2． 46 倍。
表 8 石香薷总黄酮纯化前后纯度测定结果(n = 3)
样品
纯度(%)
1 2 3
平均纯度
(%)
纯化前 36． 96 36． 90 36． 84 36． 90
纯化后 90． 75 91． 11 90． 45 90． 77
3 讨 论
树脂的极性和空间结构(孔径、比表面、比容)是影响
吸附性能的重要因素［14 － 16］。有机物是通过扩散到树脂的
孔径而被吸附，因此孔径大小直接影响吸附效果，同时比表
面积的大小也会影响树脂的吸附性能。HPD300 大孔树脂
为聚苯乙烯型非极性树脂，比表面积 800 m2 /g，孔径 50。
经实验发现，其对石香薷总黄酮具有良好的吸附性能。同
时物质在溶剂中的溶解度与树脂对此物质的吸附能力成反
比。因此，本实验研究针对黄酮类化合物易溶于乙醇，而微
溶于水的特点，采用乙醇回流提取，浓缩，加水溶解，再上大
孔树脂柱进行吸附纯化，显著增加了大孔树脂对石香薷总
黄酮的吸附能力。
由于石香薷粗提液中含有大量叶绿素及其它大分子杂
质，易吸附在大孔树脂上，造成树脂柱的污染、堵塞，故需对
粗提液进行减压抽滤等预处理，以提高大孔树脂对总黄酮
的吸附率。大孔树脂吸附法广泛应用于中药有效成分的离
纯化研究，具有操作简便、条件温和、树脂再生容易、有机溶
剂用量少等特点。采用此法分离纯化总黄酮时，回收率一
般为 85% ～95%，纯度为 60% ～90%。本实验采用静态吸
附和解吸实验筛选出 HPD300 大孔树脂为分离纯化石香薷
总黄酮的最佳树脂，并对其进行动态吸附和解吸实验的研
究。在此工艺条件下，总黄酮的回收率和纯度均较高，分别
为 89． 12%和 90． 77%，表明 HPD300 大孔树脂可有效的分
离纯化石香薷总黄酮。
参考文献
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168 － 170．
伟哥可能对治心脏衰竭无效
一项新的研究显示，通常称为能治疗勃起功能障碍的
药“伟哥”，可能对治疗心脏衰竭没有效果。不应为此服用
此类药。这项研究结果与先前较小型的研究结果不符。
发表在最近出版的《美国医学会》期刊上的这项研究
称，过去有部分研究显示，“伟哥”能增加身体其他部位的
血液流量，也许对舒张性心脏衰竭患者有益。舒张性心脏
衰竭的患者由于心室腔壁硬化，泵血功能变差，导致呼吸急
促。
研究人员对北美 26 个地点的 216 名患者进行随机测
试后发现，这种被称作“西地那非”的药物在提升运动能力
或改善心脏疾病的临床症状方面，其效果并不会比安慰剂
好。此外，“西地那非”组的受试者，出现严重药物不良反
应的比例也比对照组高，促使研究人员呼吁医师停止以
“西地那非”作为心脏疾病患者的用药。
研究对象的平均年龄 69 岁，其中 48%为女性。医生
们在 24 周后检查了他们的心血管的改善情况，但没发现任
何积极进展。
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