全 文 ：甘肃不同产地黄芩提取物的抗肿瘤作用研究
耿广琴，杨志军，杨秀娟，李 晶
(甘肃中医药大学，甘肃 兰州 730000)
摘 要 目的:研究甘肃不同产地黄芩提取物对肝癌 H22模型小鼠的抑瘤作用。方法:将 H22瘤株接种于
小鼠，建立移植瘤模型。将实验动物分为正常组，模型组，5 － Fu 组，陇西、漳县、渭源、岷县产黄芩提取物
组。于小鼠接种 H22瘤株第 2 d开始给药，黄芩组每 d每只灌服黄芩提取物 6 g /kg，每 d1 次，5 － Fu 组按
25 mg /kg剂量隔日给药 1 次，正常对照组和模型组每 d每只给予 0. 2 mL /10 g的生理盐水，给药 10 d。观
察给药后小鼠体质量变化，计算肿瘤抑制率;ELISA法检测血清白细胞介素 － 2(IL － 2)和肿瘤坏死因子
－ α(TNF － α)含量;比色分析法检测血清 T － AOC活力和 MDA含量;单细胞凝胶电泳检测外周血淋巴细
胞 DNA损伤程度。结果:不同产地黄芩提取物对肿瘤的生长均有一定的抑制作用，抑瘤效果:陇西产黄
芩提取物 ＞漳县产黄芩提取物 ＞渭源产黄芩提取物 ＞岷县产黄芩提取物;同时，明显升高移植瘤小鼠血
清 IL － 2 水平和降低 TNF － α水平，升高血清 T － AOC活力和降低 MDA含量，减轻外周血淋巴细胞 DNA
损伤。结论:不同产地的黄芩提取物不但可以抑制肿瘤的生长，而且可以通过调节 IL － 2 和 TNF － α等细
胞因子的表达，改善或增强机体的免疫功能，以及通过提高机体的抗氧化能力，减轻自由基对脂质、淋巴
细胞 DNA的过氧化损伤，发挥其抗肿瘤作用。
关键词 肿瘤;黄芩提取物;甘肃;@不同产地
Study on Anti － tumor Effect of Huangqin (Scutellaria Baicalensis Georgi)Extracts
from Different Areas of Gansu Province
GENG Guangqin，YANG ZhiJun，YANG Xiujuan，LI Jing
(Gansu University of Chinese Medicine，Lanzhou，Gansu 730000)
ABSTＲACT Objective:To study the inhibition effect of Scutellaria baicalensis Georgi extracts from different
areas of Gansu Province on H22 transplanted tumor in mice. Methods:The H22 transplanted mouse models were
established. Mice were randomly divided into 7 groups:normal，model，5 － Fu positive control，Scutellaria ba-
icalensis Georgi extracts from Longxi，Zhangxian，Minxian and Weiyuan groups. Two days after being inoculated
with H22 tumor cells，mice were treated with 6 g /kg extracts from Scutellaria baicalensis Georgi once daily for 10
d，and with 25 mg /kg 5 － Fu every other day for five times. The model and normal control groups were administra-
ted with 0. 2 mL /10 g saline，then the body weight change and tumor growth inhibitory rate were calculated;the
serum interlekin － 2 (IL － 2)and tumor necrosis factor － α (TNF － α)levels were determined with ELISA
method;the activity of T － AOC and the content of MDA in serum were detected by colorimetric method，as well
as DNA damage of peripheral blood lymphocytes was observed by single cell gel electrophoresis (SCGE).
Ｒesults:Extracts of Scutellaria baicalensis Georgi from different areas of Gansu Province inhibited the growth of
transplanted tumor at different degree(Longxi ＞ Zhang county ＞ Weiyuan ＞ Min county)，in addition，extracts
could elevated the serum IL － 2 level，reduced the serum TNF － α level，promoted the T － AOC activity and de-
creased the MDA content in serum，as well as notably reduced DNA damage of peripheral blood
lymphocytes. Conclusion:Extracts from Scutellaria baicalensis Georgi have an anti － tumor effect on H22 trans-
planted tumor in mice，regulating the IL － 2 and TNF － α expressions to raise immunologic function;as well as
improving anti － oxidant capability of H22 － bearing mice to light peroxidative damages of lipid and DNA from free
radicals，all maybe the mechanisms of extracts from Scutellaria baicalensis Georgi. on H22 cells.
Key words:cancer;Scutellaria baicalensis Georgi extract;Gansu;different areas of production
基金项目:2012 甘肃省高校基本科研业务费项目(BH2012 － 020)
通信作者:杨志军，E － mail:yangzhijun@ yeah． net
黄芩为唇形科草本植物黄芩的干燥根，史载于《神农本
草经》，其味苦，性寒，具有清热燥湿、泻火解毒之功效，为临
·372·中国中医药科技 2016 年 5 月第 23 卷第 3 期 May 2016 Vol． 23 No． 3
床常用中药［1］。近年来对黄芩药理作用研究表明，黄芩具
有抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、镇痛等作用［2 － 6］。黄芩主产于
北方，虽非甘肃道地药材，但近年来随着栽培面积的扩大、产
量的提高，黄芩已被确定为甘肃“十大陇药”。甘肃陇西、漳
县、渭源、岷县为黄芩的主产区。为客观评价甘肃产黄芩的
药用价值，本文采用肝癌 H22移植瘤小鼠为模型，探讨甘肃
不同产地黄芩提取物对模型小鼠的抑瘤效果。
1 材料与方法
1. 1 实验药物 黄芩，两年生，11 月初采自甘肃陇西、漳
县、渭源、岷县，经甘肃中医药大学药学院杜弢教授鉴定为唇
形科植物黄芩 Scutellaria baicalensis Georgi。将黄芩用蒸馏
水洗净后切片，置于烘箱(40 ℃)烘干至恒重，分别粉碎过
14目筛，按 1:5 的溶剂量加入 70%乙醇溶液，置沙氏提取器
加热回流 3 次，每次回流 2 h，第 2 次、第 3 次按 1:2. 5 的溶
剂量加入 70%乙醇溶液，将 3 次提取液合并浓缩至无醇味，
再用蒸馏水调至 1∶ 1 浓度，4 ℃冰箱保存。分光光度法测得
4 个不同产地黄芩提取物中总黄酮含量分别为:陇西
17. 38%、漳县 16. 32%、渭源 15. 21%、岷县 15. 14%。
1. 2 细胞株及实验动物 小鼠肝癌 H22瘤株:由北京中国医
学科学研究院药物所提供。2 月龄昆明种小鼠 84 只(SPF
级)，体质量(20 ± 2)g，雌雄各半，由甘肃中医药大学实验
动物中心提供，动物许可证号:SCXK(甘)2011 － 0001。
1. 3 试剂 小鼠白细胞介素 － 2(IL － 2)(批号:20130718)、
肿瘤坏死因子 － α(TNF － α)(批号:20130620)ELISA 试剂
盒:北京普尔伟业生物科技有限公司;考马斯亮蓝测定试剂
盒(批号:20130819)、总抗氧化能力(T － AOC)测定试剂盒
(批 号:20130402)、丙 二 醛 (MDA)试 剂 盒 ( 批 号:
20130726):均购自南京建成生物工程研究所;正常熔点的琼
脂糖(NMA)、低熔点的琼脂糖(LMA):均为美国 Sigma 公司
产品;台盼兰、三羟甲基氨基甲烷(Tris)、二甲基亚砜(DM-
SO)、溴化乙锭(EB)等均为国产分析纯。
1. 4 仪器 BS224S型电子天平:赛多利斯科学仪器有限公
司产品;HH － 4 数显恒温水浴锅:郑州杜甫仪器厂产品;
XYJ80 － 20 型离心机:金坛市恒丰仪器厂产品;XW － 80A 型
旋涡混匀器:上海精科实业有限公司产品;DYY －Ⅲ型电泳
仪:北京六一厂产品;CKX41 － F32FL 荧光倒置显微镜:日本
奥林巴斯公司出品;VIS － 723N 型紫外可见分光光度计:北
京瑞利分析仪器有限公司产品;MODEL680 －酶标仪:美国
伯乐公司。
1. 5 H22移植瘤模型制备 常规方法复苏小鼠肝癌 H22细
胞，取 0. 2 mL细胞悬液注射到小鼠腹腔内，连续传两代。无
菌操作取第 2 代腹水，0. 4%台盼蓝染色，计数活细胞率 ＞
90%，再用无菌生理盐水稀释，调整细胞密度为 1 × 107 个 /
mL，取 0. 2 mL瘤细胞悬液接种到 72 只昆明种小鼠的右前
肢腋窝皮下。
1. 6 动物分组及处理 接种后第 2 d，将 72 只小鼠，随机分
为 6 组，每组 12 只，雌雄各半，分别为模型组，5 － Fu阳性对
照组，陇西、漳县、渭源、岷县产黄芩组;另取 12 只正常小鼠
设为正常对照组。黄芩组每 d 每只灌胃黄芩提取物 6 g /kg
(根据临床使用剂量折算得出)，每 d1 次，5 － Fu组按 25 mg /
kg剂量隔日给药 1 次，正常对照组和模型组每 d 每只给予
0. 2 mL /10 g的生理盐水。各组动物连续给药 10 d。
1. 7 观察指标检测
1. 7. 1 抑瘤率 末次给药后，禁食不禁水 16 h，各组小鼠称
量体质量，剖取瘤块，生理盐水洗净表面残血，称质量，计算
抑瘤率。抑瘤率 = (模型组平均瘤质量 －用药组平均瘤质
量)/模型组平均瘤质量。
1. 7. 2 血清 IL － 2、TNF － α水平及 T － AOC活力MDA含量
测定 摘眼球取血，处死小鼠，分离血清，4 ℃冷藏;ELISA
法检测血清 IL － 2、TNF － α 水平;比色分析法检测血清 T －
AOC活力和 MDA含量。
1. 7. 3 外周血淋巴细胞 DNA 损伤检测 采用单细胞凝胶
电泳法(single cell gel electrophoresis，SCGE)。具体流程参照
Singh［7］描述的方法稍加改进，选择尾长(tail length，TL)、尾
矩(tail moment，TM)、Olive 尾矩(Olive tail moment，OTM)为
DNA损伤指标。
1. 8 统计学处理 采用 SPSS13. 0 软件对数据进行统计与
分析，实验结果以(珋x ± s)表示，组间差异采用 one － way
ANOVA分析。
2 结果
2. 1 各组小鼠体质量及肿瘤生长情况的比较 结果见
表 1。
表 1 各组小鼠体质量及肿瘤生长情况的比较(珋x ± s)
组别
动物数
(只)
体质量(g) 瘤质量
(g)
抑瘤率
(%)实验前 实验后
正常组 12 19. 83 ± 1. 03 28. 86 ± 0. 81 － －
模型组 12 20. 17 ± 1. 21 28. 12 ± 0. 79 1. 86 ± 0. 13 －
5 － Fu组 12 20. 21 ± 1. 06 25. 65 ± 0. 70##＊＊ 0. 86 ± 0. 15＊＊ 53. 76
陇西产黄芩组 12 19. 86 ± 1. 48 27. 90 ± 0. 95△△ 1. 25 ± 0. 10＊＊△△ 32. 8
漳县产黄芩组 12 19. 78 ± 1. 11 28. 04 ± 0. 74△△ 1. 28 ± 0. 08＊＊△△ 31. 18
渭源产黄芩组 12 19. 87 ± 1. 26 28. 07 ± 0. 74△△ 1. 33 ± 0. 06＊＊△△ 29. 49
岷县产黄芩组 12 20. 16 ± 0. 99 27. 85 ± 0. 87#△△ 1. 34 ± 0. 05＊＊△△ 27. 96
与正常组比较#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01;与模型组比较* P ＜ 0. 05，
＊＊P ＜ 0. 01;与 5 － Fu组比较△P ＜ 0. 05，△△P ＜ 0. 01
2. 2 各组小鼠血清 IL － 2、TNF － α 水平的比较 结果见
表 2。
表 2 各组小鼠血清 IL － 2、TNF － α水平的比较(珋x ± s，ng /L)
组别 动物数(只) IL － 2 TNF － α
正常组 12 231． 57 ± 12． 13 60． 28 ± 6． 15
模型组 12 166． 33 ± 5． 25## 81． 66 ± 6． 16##
5 － Fu组 12 206． 81 ± 8． 38##＊＊ 70． 35 ± 3． 68
##
＊＊
陇西产黄芩组 12 195． 65 ± 10． 27##＊＊△△ 72． 60 ± 3． 19
##
＊＊
漳县产黄芩组 12 182． 02 ± 4． 83##＊＊△△ 72． 85 ± 3． 66
##
＊＊
渭源产黄芩组 12 180． 40 ± 5． 55##＊＊△△ 75． 52 ± 2． 37
##
*
岷县产黄芩组 12 180． 00 ± 4． 70##＊＊△△ 75． 94 ± 3． 89
##*
△
与正常组比较#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01;与模型组比较* P ＜ 0. 05，
＊＊P ＜ 0. 01;与 5 － Fu组比较△P ＜ 0. 05，△ △P ＜ 0. 01
2. 3 各组小鼠血清 T － AOC 活性和 MDA 含量的比较 结
果见表 3。
·472· 中国中医药科技 2016 年 5 月第 23 卷第 3 期 May 2016 Vol． 23 No． 3
表 3 各组小鼠血清 T － AOC活性、MDA含量的比较(珋x ± s)
组别 动物数(只)T － AOC(U /mg) MDA(nmol /mg)
正常组 12 6. 34 ± 0. 14 3. 49 ± 0. 12
模型组 12 5. 82 ± 0. 10## 4. 65 ± 0. 16##
5 － Fu组 12 5. 71 ± 0. 11## 4. 78 ± 0. 12##
陇西产黄芩组 12 6. 20 ± 0. 08##＊＊△△ 3. 83 ± 0. 14
##＊＊
△△
漳县产黄芩组 12 6. 19 ± 0. 07##＊＊△△ 3. 86 ± 0. 12
##＊＊
△△
渭源产黄芩组 12 5. 87 ± 0. 11##△△ 4. 07 ± 0. 16
##＊＊
△△
岷县产黄芩组 12 5. 89 ± 0. 09##△△ 4. 09 ± 0. 12
##＊＊
△△
与正常组比较#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01;与模型组比较* P ＜
0. 05，＊＊P ＜ 0. 01;与 5 － Fu组比较△P ＜ 0. 05，△ △P ＜ 0. 01
2. 4 各组小鼠外周血淋巴细胞 DNA 损伤情况的比较 结
果见表 4。
表 4 各组小鼠外周血淋巴细胞 DNA损伤情况的比较(珋x ± s，μm)
组别
动物数
(只)
尾长
(TL)
尾矩
(TM)
Olive尾矩
(OTM)
正常组 12 3. 08 ± 0. 17 0. 74 ± 0. 10 0. 59 ± 0. 12
模型组 12 5. 61 ± 0. 25## 3. 13 ± 0. 15## 3. 24 ± 0. 11##
5 － Fu组 12 6. 02 ± 0. 16##＊＊ 3. 99 ± 0. 14##* 4. 11 ± 0. 11
##
＊＊
陇西产黄芩组 12 3. 37 ± 0. 16＊＊△△ 2. 52 ± 0. 15
##＊＊
△△ 2. 75 ± 0. 14
##＊＊
△△
漳县产黄芩组 12 3. 65 ± 0. 22＊＊△△ 2. 65 ± 0. 27
##＊＊
△△ 2. 88 ± 0. 15
##＊＊
△△
渭源产黄芩组 12 3. 73 ± 0. 31＊＊△△ 2. 84 ± 0. 23
#＊＊
△△ 2. 94 ± 0. 17
##＊＊
△△
岷县产黄芩组 12 3. 73 ± 0. 31＊＊△△ 2. 84 ± 0. 25
#＊＊
△△ 2. 96 ± 0. 177
##＊＊
△△
与正常组比较#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01;与模型组比较* P ＜ 0. 05，
＊＊P ＜ 0. 01;与 5 － Fu组比较△P ＜ 0. 05，△△P ＜ 0. 01
3 讨论
近年来，肿瘤的发病率一直呈上升趋势。据报道，目前
我国每 10 万人中有 286 人患癌，每年的新发癌症 309. 3 万
例，肿瘤已经成为了一种常见疾病。因此，研究开发抗肿瘤
效果确切、安全低毒的抗肿瘤药物，对延长我国肿瘤患者的
生存时间和提高生活质量具有重要的意义。
对移植瘤小鼠肿瘤生长影响的实验结果表明，5 － Fu、不
同产地的黄芩提取物对小鼠 H22肝癌移植瘤生长均有一定
抑制作用。从抑瘤效果看，陇西产黄芩提取物 ＞漳县产黄芩
提取物 ＞渭源产黄芩提取物 ＞岷县产黄芩提取物，这与分光
度法测定不同产地的黄芩提物物中总黄酮含量高低相吻合，
表明黄芩的抑瘤作用与其所含的总黄酮的含量密切相关。
与模型组相比，5 － Fu 组小鼠体质量明显减轻，而不同产地
的黄芩提取物各组小鼠体质量下降不明显，表明黄芩提取物
对小鼠的毒性小。
大量研究表明，肿瘤的发生、发展与机体的免疫功能失
调密切相关［8］。在肿瘤发生和发展过程中，机体免疫机制
受到严重损害［9］。IL － 2 又称 T 细胞生长因子(TCGF)，是
机体免疫调节中最重要的细胞因子之一［10］，能够激活 NK
细胞与细胞毒性 T淋巴细胞，及促进 B 细胞分化与增殖，诱
导 LAK细胞的产生，从而达到杀伤肿瘤作用。IL － 2 水平在
某种程度上反映了细胞的免疫能力［11］。TNF － α 是具有生
物活性的细胞因子，可启动炎症连锁反应，促进其它细胞因
子的持续性释放(如 IL － 2、IL － 6、IL － 8、PAF)，这些细胞因
子可以调节肿瘤细胞的生长［12］。本研究结果表明，肝癌 H22
移植瘤小鼠血清 IL － 2 水平较正常小鼠明显降低，血清 TNF
－ α水平较正常小鼠明显升高，给予不同产地的黄芩提取物
后，移植瘤小鼠血清 IL － 2 水平明显升高，TNF － α水平明显
降低，表明黄芩提取物可通过调节 IL － 2、TNF － α 等免疫相
关因子的表达，发挥其抗肿瘤作用。
肿瘤的发生发展与机体的自由基水平密切有关［13］。自
由基是极强的氧化剂，参与体内各种生理、病理过程，其在体
内或细胞内非正常聚集可导致脂质过氧化作用，可损伤蛋白
质、核酸等生物大分子。氧自由基造成的 DNA 损伤被认为
是肿瘤发生和发展的重要原因［14 － 15］。本实验结果显示，与
正常对照组相比，肝癌 H22移植瘤小鼠血清 T － AOC 活力明
显降低，血清 MDA含量明显升高，外周血淋巴细胞 DNA 损
伤、Olive明显增高，表明肿瘤的发生，导致小鼠体内自由基
的产生与消除失衡，小鼠机体抗氧化能力减弱，脂质过氧化
作用加强，产生大量自由基不能被及时清除，造成了脂质过
氧化产物的增多、DNA 的损伤。给予不同产地的黄芩提取
物后，移植瘤小鼠血清 T － AOC活力升高，血清 MDA含量明
显降低，外周血淋巴细胞 DNA损伤明显减轻，表明黄芩提取
物可通过提高血清总抗氧化能力，减轻自由基对脂质、淋巴
细胞 DNA的过氧化损伤。
综上所述，不同产地的黄芩提取物对小鼠 H22肝癌移植
瘤均有一定的抑制作用，黄芩提取物不但可以抑制肿瘤的生
长，而且可以通过调节 IL － 2 和 TNF － α 等细胞因子的表
达，来改善或增强机体的免疫功能，以及通过提高机体的抗
氧化能力，减轻自由基对脂质、淋巴细胞 DNA 的过氧化损
伤，来发挥其抗肿瘤作用。
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(收稿日期:2015 － 03 － 30)
丹参酮ⅡA磺酸钠对神经病理性疼痛
大鼠痛阈影响的研究
周奇韬1，李 军2
(1 温州医科大学第二临床学院·浙江 温州 325035;2 温州医科大学附属第二医院·浙江 温州 325000)
摘 要 目的:探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(SSI)抑制大鼠神经病理性疼痛的效果及其可能的分子机制。方
法:雄性清洁级 Wistar 大鼠 45 只，随机分为正常对照组，模型组，丹参酮ⅡA 磺酸钠高(SSIH)、中
(SSIM)、低(SSIL)剂量组，每组 9 只。模型组和 SSI组大鼠应用坐骨神经慢性压迫损伤建立神经病理性
痛模型，正常对照组行模拟手术。SSI高、中、低剂量各组大鼠术后开始腹腔注射丹参酮ⅡA磺酸钠 12. 5、
25、50 mg /kg，每 d 1 次，正常对照组和模型组注射生理盐水 25 mL /kg，每 d 1 次。5 组大鼠分别于术前及
术后第 3、6、9、12、14 d测定机械痛和热痛阈值;术后 14 d处死各组大鼠，采用实时荧光定量 PCＲ方法检
测各组大鼠腰椎脊髓 CX3CＲ1 和 NF － κBmＲNA表达水平。结果:与正常对照组比较，模型组和 SSI 组大
鼠各时点机械痛和热痛阈显著降低(P ＜ 0. 05);与模型组比较，SSI高中剂量组各时点机械痛和热痛阈显
著升高(P ＜ 0. 05)，但 SSI低剂量组各时点痛阈与模型组比较无统计学差异(P ＞ 0. 05)。与正常对照组
比较，模型组和 SSI组大鼠 CX3CＲ1 和 NF － ＲBmＲNA 表达水平明显升高(P ＜ 0. 05);与模型组比较，SSI
高剂量组和中剂量组 CX3CＲ1 和 NF － κBmＲNA 表达明显降低，而低剂量组与模型组比较无统计学差异
(P ＞ 0. 05);SSl高剂量组 CX3CＲ1 和 NF － κBmＲNA表达明显低于 SSI低剂量组。结论:丹参酮ⅡA磺酸
钠可通过抑制 NF － κB信号通路提高神经病理痛大鼠痛阈值。
关键词 疼痛;丹参酮ⅡA磺酸钠;痛阈;信号通路;大鼠
基金项目:浙江省中医药科学研究基金项目(201ZB142)
通讯作者:李军，E － mail:jlwzmz@ sina. com
Study on Effects of Tanshinone Ⅱ Sulfotashinone Sodium on Ｒat’s Pain
Threshold of Neuropathic Pain
ZHOU Qitao1，LI Jun2
(1 Second Clinical College of Wenzhou Medical University，Wenzhou，Zhejiang 325035;
2Second Affiliated Hospital of Wenzhou Medical University，Wenzhou，Zhejiang 325027)
ABSTＲACT Objective:To observe the effects of Tanshinone Ⅱ Sulfotashinone Sodium on the pain threshold
and explore the potential molecular mechanism. Methods:Wistar rats were divided into control group，model
group，SSI high dosage group(SSIH)，SSI moderate dosage group(SSIM)and SSI low dosage group(SSIL)with
9 rats in each group. Ｒats in SSI and model group were induced by chronic constrictive injury to build neuropath-
ic pain model and rats in normal control group received sham operation. Ｒats in the SSI high，moderate and low
groups were given Tanshinone II Sulfotashinone Sodium 12. 5 mg /kg，25 mg /kg and 50 mg /kg，once a day intra-
peritoneal injection，and rats in the normal control group and model group were given physiological saline，once a
day intraperitoneal injection. The mechanical withdraw
threshold and thermal withdraw latency were recorded
before surgery and in the time point of day 3，6，9，12 and
·672· 中国中医药科技 2016 年 5 月第 23 卷第 3 期 May 2016 Vol． 23 No． 3