全 文 ：收稿日期:2013-09-09; 修订日期:2014-02-07
基金项目:国家自然科学基金( No． 81360673)
作者简介:陈玉兰( 1977-) ，女( 蒙古族) ，内蒙古通辽科左中旗人，内蒙古
民族大学在读硕士研究生，学士学位，主要从事蒙药与方剂学研究工作．
* 通讯作者简介:巴根那( 1960-) ，男( 蒙古族) ，内蒙古通辽人，内蒙古民
族大学教授，博士研究生导师，学士学位，主要从事蒙药方剂及新药研发
工作．
蒙药肋柱花总黄酮提取工艺研究
陈玉兰，叶日贵，佟玉凤，巴德日胡，巴根那*
(内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000)
摘要:目的 优化蒙药肋柱花中总黄酮提取工艺。方法 首先单因素试验法考察肋柱花中总黄酮提取的主要影响因素，然
后采用正交试验法，以肋柱花总黄酮含量为指标，优化肋柱花总黄酮最佳提取工艺。结果 肋柱花总黄酮提取的最佳工
艺为乙醇浓度 60%，溶剂量 150ml，提取时间 8h。结论 该方法工艺合理，稳定可行，为该药进一步研究奠定基础。
关键词:肋柱花; 总黄酮; 单因素试验; 正交试验; 提取工艺
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 07． 003
中图分类号:Ｒ284． 2; Ｒ29 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 07-1544-03
Study on the extraction technology of total flavonoids from Lomatogonium rotatum ( L． )
Fries ex Nym
CHEN Yu-lan，YE Ｒi-gui，TONG Yu-feng，BA De － ri-hu，BA Gen-na*
( College of Traditional Mongolian Medicine，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，
China)
Abstract: Objective To optimize the extraction process of total flavonoids from Lomatogonium rotatum ( L． ) Fries ex Nym
Methods The single factor test was used to study the main factors affecting the extraction of total flavonoids from Lomatogonium
rotatum ( L． ) Fries ex Nym ，then with the amount of total flavonoids as index，the optimum extraction process of total flavonoids
from Lomatogonium rotatum ( L． ) Fries ex Nym was optimized by orthogonal test． Ｒesults The optimum process of total fla-
vonoids from was ethanol concentration 60%，solvent volume 150mL，extraction time 4 h． Conclusion The method was reasona-
ble and practicable，which can be used as experimental basis for the total flavonoids from Lomatogonium rotatum ( L． ) Fries ex
Nym and the industrialized production．
Key words: Lomatogonium rotatum ( L． ) Fries ex Nym; Total flavonoids; Single factor test; Orthogonal test; Extraction
process
肋柱花，蒙药名哈比日根 －地格达，系龙胆科植物肋柱花 Lo-
matogonium rotatum (L．)Fries ex Nym 的干燥全草，是蒙医临床
常用的蒙药之一，具有平息协日、清热、健胃、愈伤之功能，主要用
于清协日热、瘟疫、流感、伤寒、中暑头痛、肝胆热、黄疸、胃协日、
伤热等病［1 ～ 3］。肋柱花主要含有黄酮类化合物和三萜类化合
物［4，5］，其中黄酮类化合物在抗炎、抑菌、保肝作用等方面均有明
显的疗效［6，7］。这一作用与该药临床疗效基本一致。本文采用
正交实验法，以总黄酮含量为指标，选取最佳提取条件，为该药进
一步研究奠定基础。
1 材料
1． 1 仪器 UV － 2501 型紫外 － 可见分光光度计(岛津)，
ISO9001 电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)，ＲE － 52A
旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，SHZ － D 循环水式真空泵
(巩义市英峪予华仪器厂)。
1． 2 试剂 芦丁 20086569(中国药品生物制品检定所);硝酸铝，
亚硝酸钠，氢氧化钠和乙醇等均为分析纯。
1． 3 药材 肋柱花采集于内蒙古锡林郭勒盟西乌旗，经内蒙古民
族大学蒙医药学院布和巴特尔教授鉴定为龙胆科植物肋柱花 Lo-
matogonium rotatum (L．)Fries ex Nym的全草。
2 方法与结果［8 ～ 10］
2． 1 总黄酮测定方法
2． 1． 1 对照液的制备 精密称取干燥至恒重的芦丁对照品6． 0
mg，置于 10ml容量瓶中，并用乙醇溶解至刻度，摇匀，即得。
2． 1． 2 样品总黄酮溶液的制备 称取肋柱花粉末 25g，精密称
定，用石油醚连续回流脱脂 10h，滤过，药渣中石油醚自然挥干。
称取已脱脂的肋柱花粉末 5． 0g，置于 250ml圆底烧瓶中，加 60%
乙醇 100ml，回流提取 4h，滤过。吸取滤液 1ml，置于 25ml容量瓶
中，加 60%乙醇至刻度，即得。
2． 1． 3 标准曲线的绘制 分别取对照液 0． 0，0． 25，0． 5，1． 0，2． 0，
3． 0ml，于 50ml容量瓶中，加 5%亚硝酸钠溶液 1． 5ml，摇匀，放置
6min，加 10%硝酸铝溶液 1． 5ml，摇匀，放置 6min，加 4%氢氧化
钠 20ml，加水至刻度，摇匀，放置 20 min 后以第 1 管为空白对照
参比按分光光度法，在 510 nm 波长处测定吸光度，以吸光度为横
坐标，浓度为纵坐标，回归方程得 Y = 0． 012 7X + 0． 046 4，相关
系数为 0． 999 4，线性范围为 5． 0 ～ 60μg /ml。
2． 1． 4 测定方法 分别精密吸取单因素试验和正交试验项下溶
液 1． 0ml，置于 50ml容量瓶中，按标准曲线的绘制项下操作，测
定其吸光度并计算总黄酮含量。
2． 1． 5 稳定性试验 精密吸取样品液 1． 0ml，置于 50ml 容量瓶
中，按标准曲线的绘制项下测定其吸光度，每隔 30min测定 1 次，
连续 3h，测得吸光值的 ＲSD为 2． 44%。
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 7
2． 1． 6 精密度试验 样品液 5 份，每份 1． 0ml，按“2． 1． 3”项下测
定其吸光度，测得吸光值的 ＲSD为 1． 65%。
2． 1． 7 重复性试验 称取已脱脂的肋柱花粉末 5 份，每份 25g，精
密称定，按“2． 1． 2”项下制备供试液。分别取供试液 1． 0ml，照
“2． 1． 3”项下测定其吸光度，测得吸光值的 ＲSD为 2． 23%。
2． 1． 8 加样回收试验 精密吸取样品液 5 份，每份 0． 5ml，分别加
对照品溶液 0． 5ml，其他试剂加入量及时间同“2． 1． 3”项下操作。
测定其吸光度，计算平均加样回收率为 102． 1%，ＲSD为2． 03%。
2． 2 单因素试验
2． 2． 1 提取方法选择 分别称取已脱脂的肋柱花粉末 5． 0g，精密
称定，加 60%乙醇 100ml，分别用超声法、回流法和连续回流法，提
取 2h，过滤。精密吸取滤液 1． 0ml，其他试剂加入量及时间同“2．
1． 3”项下操作。测定其吸光度，计算其百分含量。结果见表 1。
表 1 不同提取方法实验结果 %
编号 超声法 回流法 连续回流法
1 1． 59 2． 26 1． 08
2 1． 57 2． 32 1． 06
3 1． 54 2． 29 1． 05
均值 1． 57 ± 0． 025 2． 29 ± 0． 030 1． 06 ± 0． 015
n = 3
由表 1 可看出，回流提取法优于连续回流提取法和超声提取
法，结果有显著性差异，故本实验用回流提取法。
2． 2． 2 乙醇浓度对肋柱花总黄酮含量的影响 称取已脱脂的肋
柱花粉末 6 份，每份 5． 0g，于 250ml圆底烧瓶中，分别加入不同浓
度的乙醇溶液 (40%、50%、60%、70%、80%、90%)100ml，回流
提取 2h，滤过。分别精密吸取滤液 1． 0ml，其他试剂加入量及时
间同“2． 1． 3”项下操作。测定其吸光度，计算其百分含量，结果
见图 1。
图 1 乙醇浓度对肋柱花总黄酮的影响
由图 1 可知，随着乙醇浓度增高总黄酮含量也增高，但是当
乙醇的浓度 ＞ 60%时，总黄酮含量反而下降，这可能是由于肋柱
花总黄酮在 60%的乙醇溶液中溶解性好，故乙醇浓度确定为
60%。
2． 2． 3 提取时间对肋柱花总黄酮含量的影响 称取已脱脂的肋
柱花粉末 5 份，每份 5． 0g，于 250ml圆底烧瓶中，分别加 60%
乙醇 100ml，于同一温度下分别回流提取 2，4，6，8，10h，每份
提取 1 次，滤过。分别精密吸取滤液 1． 0ml，其他试剂加入量
及时间同“2． 1 ． 3”项下操作。测定其吸光度，计算其百分含
量。结果见图 2。
由图 2 可以看出，总黄酮的含量随着提取时间的增长而增
高，当提取时间 ＞ 6h 时，总黄酮含量基本保持不变，可能是由于
药材内外的总黄酮浓度逐渐达到平衡的缘故。
图 2 提取时间对肋柱花总黄酮的影响
2． 2． 4 溶剂量对肋柱花总黄酮含量的影响 称取已脱脂的肋柱
花粉末 5 份，每份 5． 0g，于 250ml 圆底烧瓶中，分别加 60%乙醇
50，75，100，125，150ml，回流提取 6h，滤过。分别精密吸取滤液
1． 0ml，其他试剂加入量及时间同“2． 1． 3”项下操作。测定其吸
光度，计算其百分含量。结果见图 3。
图 3 溶剂量对肋柱花总黄酮的影响
由图 3 可知，当溶剂量 100ml时，总黄酮含量最高，故溶剂量
选择为 100ml。
2． 2． 5 提取次数对肋柱花总黄酮含量的影响 称取已脱脂的肋
柱花粉末 3份，每份 5． 0g，于 250ml圆底烧瓶中，第一份先加 60%
乙醇 50ml，回流提取 2h，过滤，药渣上再加 60%乙醇 50ml 分两次
提取，每次 25ml，滤过，合并滤液。第二份用 60%乙醇 100ml 分两
次提取，滤过，合并滤液。第 3 份用 60%乙醇 100ml 一次提取，滤
过。分别精密吸取滤液 1． 0ml，其他试剂加入量及时间同“2． 1． 3”
项下操作。测定其吸光度，计算其百分含量。结果见表 2。
表 2 提取次数对肋柱花总黄酮的影响 %
次数 总黄酮含量
1 1． 68
2 2． 32
3 2． 24
由表 2 可知，提取两次时，总黄酮量较高，故提取次数选择为
2 次。
2． 3 正交试验结果与分析
2． 3． 1 影响因素及水平的确定 根据单因素试验结果，确定提取
时间、溶剂量、乙醇浓度作为考察因素，以总黄酮含量为考察指
标，用 L9(3
4)正交表安排实验，数据经正交软件处理。因素水平
见表 3。
表 3 因素水平表
水平
A
提取时间 /h
B
溶剂量 /ml
C
乙醇浓度(%)
1 4 50 40
2 6 100 60
3 8 150 80
2． 3． 2 试验结果 称取已脱脂的肋柱花药材粉末共计 9 分，每份
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 7 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 7 期
5． 0g，按正交试验表安排试验，以肋柱花总黄酮含量为考察指标。
结果见表 4。
表 4 提取工艺正交试验设计表及结果
实验
号
因素
A B C D
结果
1 1 1 1 1 2． 42
2 1 2 2 2 2． 88
3 1 3 3 3 3． 29
4 2 1 2 3 2． 48
5 2 2 3 1 2． 86
6 2 3 1 2 3． 16
7 3 1 3 2 2． 47
8 3 2 1 3 2． 91
9 3 3 2 1 3． 47
K1 8． 5900 7． 3700 8． 4900 8． 7500 G =∑Ⅰj +Ⅱj + Ⅲj
K2 8． 6500 8． 6500 8． 8300 8． 5100 = 25． 94
K3 8． 6300 9． 9200 8． 6200 8． 6800 CT = G2 /9 = 74． 76
Ｒj 8． 5000 2． 5500 0． 3400 0． 2400
Sj 8． 4900 1． 0838 0． 0196 0． 0102
2． 3． 3 结果分析 将正交试验评价指标综合评分进行方差分析。
结果见表 5。
表 5 方差分析结果
方差来源 离差平方和 自由度 方差 F值 P
A 8． 4900 2 4． 2450 835． 9956 ＜ 0． 01
B 1． 0838 2 0． 5419 106． 7155 ＜ 0． 01
C 0． 0196 2 0． 0098 1． 9322 ＞ 0． 05
误差(D) 0． 0102 2 0． 0051 1． 0000 ＞ 0． 05
F(1 － 0． 1)(2，2)=9． 00，F(1 － 0． 05)(2，2)=19． 00，F(1 － 0． 01)(2，2)=99． 00
从表 4 中可以直观看出，9 号样品方案 A3B3C2 为较佳组合，
总黄酮提取率最高。肋柱花总黄酮含量与提取条件之间的关系
可从方差分析表 5 看出，A 因素提取时间、B 因素溶剂量对提取
率影响极显著(P ＜ 0． 01)，故提取时间 8h、溶剂量 150ml为最佳;
C因素影响不显著(P ＞ 0． 05);D 因素影响甚微(在方差分析中
作误差估计用)，故直观分析与方差分析结果一致，因此确定肋
柱花总黄酮提取最佳工艺为 A3B3C2，即溶剂量为 150ml，提取时
间为 8h，乙醇浓度为 60%。
2． 3． 4 验证试验 取药材 20g，按优化的工艺条件(A3B3C2)重复
测定肋柱花总黄酮含量 3 次，其总黄酮含量均与上述正交表中总
黄酮最高的方案相近，从而证明这一工艺条件合理可行。结果见
表 6。
表 6 验证试验结果表 %
试验号 总黄酮含量 ＲSD
1 3． 24
2 3． 38 2． 14
3 3． 08
3 讨论
单因素考察结果可知，随着乙醇浓度增高总黄酮含量也增
高，但是当乙醇的浓度 ＞ 60%时，总黄酮含量反而下降;总黄酮的
含量随着提取时间的增长而增高，当提取时间 ＞ 6h 时，提取率基
本保持不变:当溶剂量 100ml 时，总黄酮含量最高;由表 2 可知，
提取两次时，总黄酮量较高。故单因素试验确定乙醇溶度为
60%，溶剂量为 100ml，提取时间为 6h和提取次数选择为 2 次。
通过正交试验直观分析和方差分析结果表明，各因素对肋柱
花总黄酮提取率的影响作用大小依次为 A(提取时间) ＞ B (溶
剂量) ＞ C (乙醇浓度)，肋柱花总黄酮提取最佳工艺为 A3B3C2，
即溶剂量为 150ml，提取时间为 8h，乙醇浓度为 60%，其中提取时
间和溶剂量对肋柱花总黄酮的提取影响极显著，是影响肋柱花总
黄酮提取效果的最主要因素。
方法学考察结果看，在实验条件下芦丁具有良好线性关系，
精密度、准确度和稳定性均较高，可作为肋柱花总黄酮含量测定
的依据。
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