全 文 ：第４０卷　第５期 陕西师范大学学报（自然科学版） Ｖｏｌ．４０　Ｎｏ．５
　２０１２年９月 Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｓｅｐ．，２０１２　
文章编号：１６７２－４２９１（２０１２）０５－００６０－０４
收稿日期：２０１０－１２－２３
基金项目：国家自然科学基金资助项目（２０５７５０３９）．
第一作者：师梅梅，女，博士研究生，主要研究方向为天然产物的分离鉴定及功能评价．Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｈｉｍｅｉｍｅｉ１９８２＠１６３．ｃｏｍ．
＊ 通信作者：杨建雄，男，教授．Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｘｙａｎｇ＠ｓｎｎｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
荔枝草总黄酮的体外抗氧化研究
师梅梅，　杨建雄＊，　任　维
（陕西师范大学 生命科学学院，陕西 西安７１００６２）
摘　要：采用化学体系模拟法体外测定荔枝草总黄酮（ＴＦＳ）对１，１－二苯基－２－苦苯肼自由基
（ＤＰＰＨ·）和超氧阴离子自由基（Ｏ－·２ ）的清除能力，总还原力及其对Ｆｅ２＋诱导的脂质过氧化反应
和β－胡萝卜素／亚油酸自氧化体系的抑制作用．结果显示：ＴＦＳ对ＤＰＰＨ·和Ｏ
－·
２ 均有较强的清除
能力，ＩＣ５０值分别为０．０７９ｍｇ／ｍＬ和０．２６ｍｇ／ｍＬ，有显著的还原力和总抗氧化力，对脂质过氧
化有明显的抑制作用．说明荔枝草黄酮可作为天然抗氧化剂开发利用．
关键词：荔枝草；黄酮；抗氧化；自由基清除
中图分类号：Ｒ１５１．２　文献标志码：Ａ
Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｆｒｏｍＳａｌｖｉａ　ｐｌｅｂｅｉａ
ＳＨＩ　Ｍｅｉ－ｍｅｉ，ＹＡＮＧ　Ｊｉａｎ－ｘｉｏｎｇ＊，ＲＥＮ　Ｗｅｉ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｈａａｎｘｉ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ′ａｎ　７１００６２，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｆｒｏｍＳａｌｖｉａ　ｐｌｅｂｅｉａ （ＴＦＳ）ｗａｓ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ
ｂｙ　ｖａｒｉｏｕｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｓｓａｙ　ｓｙｓｔｅｍｓ，ｓｕｃｈ　ａｓ　ｔｈｅβ－ｃａｒｏｔｅｎｅ－ｌｉｎｏｌｅｉｃ　ａｃｉｄ　ｍｏｄｅｌ　ｓｙｓｔｅｍ，ｒｅｄｕｃｉｎｇ
ｐｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ　ａｓｓａｙ，１，１－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－２－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ（ＤＰＰＨ·）／ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ（Ｏ－·２ ）
ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ．ＴＦＳ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ＩＣ５０ｖａｌｕｅｓ　ｆｏｒ
ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｓｓａｙ　ｗｅｒｅ　ｆｏｕｎｄ　ｔｏ　ｂｅ　０．０７９ａｎｄ　０．２６ｍｇ／ｍｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｔｈｅ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗｅｒｅ　ｎｏｔａｂｌｅ　ａｎｄ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｓｔｅａｄｉｌｙ　ｉｎ　ａ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ＴＦＳ　ｈａｄ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ．
Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ＴＦＳ　ｈａｖｅ　ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｓｏｕｒｃｅ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ　ｏｆ　ｎａｔｕｒａｌ　ｏｒｉｇｉｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓａｌｖｉａ　ｐｌｅｂｅｉａ；ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ－ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
　　传统的合成抗氧化剂如ＢＨＡ、ＢＨＴ、ＴＢＨＱ经
济高效，但被证明有累积性致癌作用［１］，天然抗氧化
剂成为它们的代用品是必然趋势．我国植物资源丰
富，有很大的优势．荔枝草为唇形科鼠尾草属植物雪
见草（Ｓａｌｖｉａ　ｐｌｅｂｅｉａ　Ｒ．Ｂｒ．）的全草，为二年生直立
草本植物．性平，味辛，无毒，在我国和印度分布非常
广泛，国内既有野生分布，又有人工栽培，资源充足，
价格低廉，具有潜在的开发应用价值．国内外研究表
明，荔枝草具有止咳平喘、祛痰及抗组胺、抑菌及抗
氧化作用［２－４］．早在上世纪７０年代中期，一系列植物
化学方面的研究表明其化学成分主要是黄酮类、二
萜类和木酚素类化合物［５－６］；后来有文献相继报道了
醌类和丹宁酸也存在于荔枝草中，并进一步证实了
黄酮类化合物的存在［７］．黄酮类化合物具有清除自
由基、抗氧化、抗突变、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和调节
免疫等功能，其中最重要的是它的抗氧化活性［８］，因
此开发利用荔枝草中的黄酮类化合物具有重要的现
实意义．本文研究荔枝草总黄酮（ＴＦＳ）的提取、有效
成分含量测定及体外抗氧化活性，为探索荔枝草药
理作用的机制提供参考．
DOI:10.15983/j.cnki.jsnu.2012.05.014
　　第５期 师梅梅 等：荔枝草总黄酮的体外抗氧化研究 ６１　
１　材料和方法
１．１　试剂
荔枝草全草购买于安徽省中药材市场，经鉴定
为Ｓａｌｖｉａ　ｐｌｅｂｅｉａ　Ｒ．Ｂｒ．，保存在４℃冰箱内备用；
１，１－二苯基－２－苦苯肼自由基（ＤＰＰＨ·）、二丁基羟
基甲苯（ＢＨＴ）、抗坏血酸（Ｖｃ）、β－胡萝卜素、亚油
酸、芦丁、Ｔｗｅｅｎ－２０、铁氰化钾（［Ｋ３Ｆｅ（ＣＮ）６］）和
三氯乙酸（ＴＣＡ ）购自美国Ｓｉｇｍａ公司；氮蓝四唑
（ＮＢＴ）、吩嗪硫酸甲脂（ＰＭＳ）、脱氧核糖、还原型辅
酶Ｉ（ＮＡＤＨ）购自德国 Ａｐｐｌｉｃｈｅｍ公司；其他试剂
均为国产分析纯．
１．２　荔枝草总黄酮的提取分离
准确称取已干燥的荔枝草全草５０ｇ，加７０％的
乙醇５００ｍＬ，８０°Ｃ回流提取１ｈ，重复３次，合并所
得滤液，６０°Ｃ旋转蒸发，然后依次用等体积的石油
醚和乙酸乙酯萃取４次，弃醚相和水相，乙酸乙酯相
减压浓缩后烘干至恒重，得到荔枝草总黄酮测试样
品．以芦丁为标准品，采用 ＮａＮＯ２－Ａｌ（ＮＯ３）３－
ＮａＯＨ 显色体系吸光光度法测定总黄酮的含量［９］．
１．３　ＤＰＰＨ·自由基的清除能力
采用ＤＰＰＨ 氧化法［１０］，反应体积为４．０ｍＬ，
１．０ｍＬ不同浓度的 ＴＦＳ溶液，加入０．００４％的
ＤＰＰＨ甲醇溶液３．０ｍＬ，室温静置３０ｍｉｎ，甲醇调
零，阴性对照不加样，用Ｖｃ和ＢＨＴ作为阳性对照，
测定Ａ５１７ｎｍ，清除率 ＝（１－Ａ样／Ａ阴性对照）×１００％．
１．４　对Ｏ－·２ 生成的影响
Ｏ－·２ 由 ＮＡＤＨ－ＰＭＳ－ＮＢＴ 系统（２０ ｍｍｏｌ／Ｌ，
ｐＨ７．４的磷酸缓冲液，内含 ＮＡＤＨ　４６８μｍｏｌ／Ｌ，
ＮＢＴ　７８μｍｏｌ／Ｌ，ＰＭＳ　６０μｍｏｌ／Ｌ）产生
［１１］，空白管
不加ＰＭＳ，对照管不加ＴＦＳ，阳性对照为Ｖｃ．ＴＦＳ
的终浓度为０．１０，０．２０，０．３０，０．４０，０．５０，０．６０ｍｇ／
ｍＬ，总体积为３．４ｍＬ，测定Ａ５６０ｎｍ，清除率＝（１－
Ａ样／Ａ阴性对照）×１００％．
１．５　还原能力的测定
ＴＦＳ的还原力测定依照文献［１２］进行，以
ＢＨＴ为阳性对照，空白不加ＦｅＣｌ３，测定Ａ７００ｎｍ．
１．６　脂质过氧化分析
根据文献［１３］，以含脂质丰富的蛋黄作为反应
基质，用Ｆｅ２＋引发脂质过氧化，空白不加ＴＢＡ，对
照不加样，以Ｖｃ作为阳性对照．
１．７　总抗氧化能力的测定
对β－胡萝卜素／亚油酸自氧化体系的抑制作用
参照文献［１４］的方法进行测定．在５０°Ｃ水浴中，每
隔２５ｍｉｎ测定Ａ４７０ｎｍ（分别在不同浓度待测液构成
的体系中，以蒸馏水代替β－胡萝卜素作为空白调
零），共测量１５０ｍｉｎ．
１．８　数据统计分析
所有的实验均重复３次，采用ｏｒｉｇｉｎ软件计算
平均值和标准差，实验数据以ＩＣ５０表示（半抑制
量，表示清除５０％自由基或抑制５０％的氧化作用
所需要的样品浓度）．
２　结果与讨论
２．１　总黄酮的含量
荔枝草总黄酮测试样品的得率为９．３５％，黄酮
含量为９２．０９％．
２．２　对ＤＰＰＨ·的清除能力
ＤＰＰＨ·在５１７ｎｍ处有强吸收峰，通常被用来
检测抗氧化剂的抗氧化活性，当有自由基清除剂存
在时，ＤＰＰＨ·会和清除剂提供的质子结合形成
ＤＰＰＨ－Ｈ，从而使溶液颜色由紫色变为黄色，Ａ５１７ｎｍ
变小，其变化程度与自由基清除程度呈线性关系，即
自由基清除剂的清除自由基能力越强，Ａ５１７ｎｍ越小．
由表１可以看出，在所检测浓度范围内，ＴＦＳ
对ＤＰＰＨ·有很强的清除能力，且呈良好的量效关
系，在０．１５ｍｇ／ｍＬ清除率可达到９１．１４％，与阳性
对照的清除率相当，其ＩＣ５０为０．０７９ｍｇ／ｍＬ，说明
ＴＦＳ的确是一种良好的天然抗氧化剂．
表１　ＴＦＳ对ＤＰＰＨ·的清除能力（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ．１　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＤＰＰＨ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｅｄ　ｂｙ　ＴＦＳ
Ｖｃ，ＢＨＴ／（ｍｇ·ｍＬ－１） Ｖｃ清除率／％ ＢＨＴ清除率／％ ＴＦＳ／（ｍｇ·ｍＬ－１） ＴＦＳ清除率／％
０．０１　 ４１．３８±３．２１　 １６．１５±１．４５　 ０．０３　 １３．８６±１．３９
０．０２　 ７８．６８±２．０８　 ３０．５１±３．６９　 ０．０６　 ３９．５９±１．６５
０．０３　 ９３．８３±４．０２　 ３７．９９±２．６６　 ０．０９　 ６３．３８±０．４５
０．０４　 ９４．８６±４．１４　 ４６．２５±３．２８　 ０．１２　 ８２．８３±１．４８
０．０５　 ９５．８２±３．１５　 ６２．８８±４．５３　 ０．１５　 ９１．１４±０．３７
６２　 陕西师范大学学报（自然科学版） 第４０卷
２．３　对Ｏ－·２ 的清除能力
超氧阴离子是一种由氧激发的自由基，生理情
况下，氧通常通过细胞色素氧化酶系统接受４个电
子还原成水，同时也有１％～２％的氧接受１个或２
个电子分别生成活性氧Ｏ－·２ 和 Ｈ２Ｏ２，但由于细胞内
超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶等抗氧化酶
类可以及时清除，因而对机体无有害影响．病理条件
下，由于氧自由基的生成过多或机体抗氧化酶类活
性下降，致使体内氧自由基大量积储进而对细胞造
成损伤．超氧阴离子与多种疾病有着密切的联系，而
且它还是所有氧自由基中的第１个自由基，可经过
一系列反应生成其他氧自由基，因此有着特别重要
的意义．
实验测定了ＴＦＳ在体外对Ｏ－·２ 的清除作用，结
果如表２所示．ＴＦＳ对超氧阴离子具有较强的清除
作用，在０．１ｍｇ／ｍＬ至０．６ｍｇ／ｍＬ浓度范围内，清
除率为１３．８０％至７７．１６％，ＩＣ５０为０．２６ｍｇ／ｍＬ，
说明ＴＦＳ在食品或医药领域有较好的应用前景．
表２　ＴＦＳ对Ｏ－·２ 的清除能力（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ．２　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ
ｓｃａｖｅｎｇｅｄ　ｂｙ　ＴＦＳ（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｖｃ／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
Ｖｃ
清除率／％
ＴＦＳ／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
ＴＦＳ
清除率／％
０．０１　 １１．３７±１．０９　 ０．１　 １３．８０±１．８７
０．０２　 ２１．０９±１．８９　 ０．２　 ３３．８３±１．１３
０．０３　 ３５．７１±２．３７　 ０．３　 ６３．００±２．４９
０．０４　 ５４．６２±３．５１　 ０．４　 ７１．８５±１．０８
０．０５　 ７３．０９±２．１６　 ０．５　 ７６．８１±１．４５
０．０６　 ９４．７８±１．４１　 ０．６　 ７７．１６±１．１５
２．４　还原能力的测定
物质的还原能力是其潜在抗氧化性能的重要体
现．抗氧化剂的抗氧化机理主要包括抑制链反应的
引发，键合有催化作用的金属离子，分解过氧化物，
抑制质子转移，还原能力以及自由基清除能力．
ＴＦＳ的还原能力如表３所示，随着浓度的增
大，其还原能力逐渐增强，在０．１ｍｇ／ｍＬ至０．６
ｍｇ／ｍＬ的浓度范围内，Ａ７００ｎｍ从０．１８增至１．０７，说
明ＴＦＳ具有潜在的抗氧化能力．
２．５　抑制脂质过氧化的能力
采用Ｆｅ２＋引发的卵磷脂分散系，卵磷脂过氧化
物分解产生的二级产物丙二醛（ＭＤＡ），在酸性条件
下与硫代巴比妥酸（ＴＢＡ）缩合成的红色物质
ＴＢＡＲＳ，通过检测 Ａ５３２ｎｍ 来衡量脂质过氧化的
程度．
表３　ＴＦＳ的还原能力（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ．３　Ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ　ｏｆ　ＴＦＳ（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
ＢＨＴ，ＴＦＳ／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
ＢＨＴ（Ａ７００ｎｍ） ＴＦＳ（Ａ７００ｎｍ）
０．１　 ０．４４±０．０１　 ０．１８±０．０２
０．２　 ０．７５±０．０２　 ０．３３±０．０１
０．３　 １．０７±０．０３　 ０．５２±０．０１
０．４　 １．３６±０．０２　 ０．６８±０．０１
０．５　 １．５５±０．０１　 ０．８８±０．０１
０．６　 １．６０±０．０５　 １．０７±０．０３
ＴＦＳ抑制脂质过氧化的效果见表４，在０～１．０
ｍｇ／ｍＬ范围内，ＴＦＳ对脂质过氧化的抑制作用随
着浓度的升高而增强，但其抑制能力较阳性对照Ｖｃ
弱（Ｐ＜０．０５），因此用ＴＦＳ替代Ｖｃ时需加大用量．
表４　ＴＦＳ的抑制脂质过氧化能力（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｔａｂ．４　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＴＦＳ　ｏｎ　ｌｉｐｉｄ　ｐｅｒｏｘｉｄａｔｉｏｎ（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｖｃ，ＴＦＳ／
（ｍｇ·ｍＬ－１）
Ｖｃ抑制率／％ ＴＦＳ抑制率／％
０．２　 ３０．４９±３．７９５　 ２７．３９±２．６９５
０．４　 ６４．３９±６．１１５　 ３５．５８±０．８３
０．６　 ７２．６９±０．２３　 ４５．９１±３．３２
０．８　 ７４．８２±１．２３５　 ４８．１３±１．９６
１．０　 ７７．８６±２．３６　 ６６．３６±９．３３
２．６　总抗氧化能力的测定
β－胡萝卜素是一种多烯色素，易被氧化褪去黄
色．在反应体系中，亚油酸氧化产生的过氧化物能使
β－胡萝卜素褪色，当反应体系中有抗氧化剂时，褪色
速度减缓，且褪色程度与抗氧化活性呈负相关，当没
有加入抗化剂时，β－胡萝卜素的颜色会迅速褪去，这
是因为β－胡萝卜素和亚油酸被双重氧化产生自由基
的结果，亚油酸自由基会攻击不饱和β－胡萝卜素分
子，结果使得β－胡萝卜素分子失去双键而被氧化，体
系失去生色基团，橙色消失．抗氧化剂的加入会中和
亚油酸自由基以及其他自由基，从而阻止其对β－胡
萝卜素子的漂白作用．
结果如图１所示，ＴＦＳ对β－胡萝卜素／亚油酸
自氧化体系有明显的抑制作用，其褪色速度明显慢
于阴性对照组，并且呈现剂量－效应关系；也就是说，
　　第５期 师梅梅 等：荔枝草总黄酮的体外抗氧化研究 ６３　
随着浓度的增大，其总抗氧化力也在相应增强．虽弱
于阳性对照ＢＨＴ，但ＴＦＳ作为天然产物的提取物，
在安全性方面有着明显的优势．
图１　ＴＦＳ的总抗氧化能力 （珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
Ｆｉｇ．１　Ｔｏｔａｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＴＦＳ（珔ｘ±ｓ，ｎ＝３）
３　结论
采用乙醇加热回流提取法得到了荔枝草总黄酮
提取物，黄酮含量可达９２．０９％，说明其主要的活性
成分就是黄酮类化合物．通过生物体外纯化学反应
体系实验表明，ＴＦＳ对ＤＰＰＨ·和 Ｏ－·２ 的清除率可
达到９１．１４％和７７．１６％，具有显著的还原能力，并
且可以有效抑制Ｆｅ２＋诱导的脂质过氧化反应和β－
胡萝卜素／亚油酸的自氧化，说明ＴＦＳ有较强的清
除自由基和抗氧化活性，这一结论可为探索荔枝草
药理作用的机制和将其作为抗氧化药物或食品抗氧
化剂开发提供参考．
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ｃａｕｌｉｓ　Ｃ．Ｐｒｅｓｌ　ｓｕｂｓｐ．ｌｏｎｇｉｃａｕｌｉｓ　ｖａｒ．ｌｏｎｇｉｃａｕｌｉｓ
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〔责任编辑　王　勇〕