全 文 ：2008 年 3 月第 15 卷第 3期 中国中医药信息杂志 ·43·

·质量标准研究·
反相高效液相色谱法测定湿生扁蕾中木犀草素和
1,7-二羟基-3,8-二甲氧　酮的含量
景 明,李季文,樊 秦,师 霞
(甘肃中医学院,甘肃 兰州 730000)
摘要：目的 建立湿生扁蕾药材中木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮的含量测定方法。方法 采用反
相高效液相色谱法(RP-HPLC),色谱柱为 ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5 µm)；流动相为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶
液(B)梯度洗脱,0～15 min,A∶B＝50∶50,15～60 min,A∶B＝55∶45；检测波长 260 nm；流速 1 mL/min；柱温 30 ℃。
结果 1,7-二羟基-3,8-二甲氧　酮和木犀草素分别在 0.084～0.84 µg 和 0.184～1.84 µg 范围内线性关系良好,相
关系数分别为 0.999 4 和 0.999 7；平均回收率分别为 96.82%和 97.19%,RSD 均小于 3%。结论 该方法简便准确,重
现行好,可作为湿生扁蕾药材的质量控制方法。
关键词：湿生扁蕾；1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮；木犀草素；反相高效液相色谱法
中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2008)03-0043-02
Determination of Luteolin and 1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone in Herbal Gentianopsis
paludosa by RP-HPLC JING Ming, LI Ji-wen, FAN Qin, et al (Gansu College of TCM, Lanzhou 730000, China)
Abstract：Objective To establish the determination of luteolin and 1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone
in Herbal Gentianopsis paludosa. Method The RP-HPLC with ZORBAX SB-C18 (250 mm×4.6 mm, 5 µm)
comlum was used. Mobile phase was methanol (A)-0.4% H3PO4 (B) Gradient elution was used, 0～15 min,
A∶B＝50∶50, 15～60 min, A∶B＝55∶45. Detection wavelengh was 260 nm. Flow rate was 1.0 mL/min.
Temperature of column was 30 ℃. Result The linear relationship of 1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone
and luteolin were showed at the range of 0.084～0.84 µg and 0.184～1.84 µg (r＝0.999 4 and r＝0.999 7).
The average recovery rate of 1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone and luteolin were 96.82% and 97.19%,
RSD<3%. Conclusion The method was accurate, reproducible and can be used to control the quality of
Gentianopsis paludosa.
Key word：Gentianopsis paludosa；1,7-dihydroxy-3,8-dimethoxyxanthone；luteolin；RP-HPLC
湿生扁蕾 Gentianopsis paludosa (Mum.) Ma 为龙胆科扁
蕾属一年生草本植物。具有清热解毒、利湿消黄、健脾止泻等
功能,用于肝炎、胆囊炎、热病发斑、目赤肿痛、消化不良、
肠胃炎等[1]。由于受诸多因素的制约,致使目前藏药材使用不
规范,缺乏理化控制标准,因此,加强藏药材质量标准基础性研
究,是保证和提高藏药标准化、规范化,进一步开发藏药以及发
展民族医药事业的重要课题。湿生扁蕾主要含有　酮类、黄酮
类、三萜类化合物[2],　酮类和黄酮类化合物具有抗氧化、抗
菌、护肝等生物活性[3-4],其中木犀草素是湿生扁蕾抗腹泻活性
成分,而 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮是湿生扁蕾抗菌活性
成分[5-6],所以,选择这两种成分进行含量测定,为湿生扁蕾药
材的质量控制提供可行的方法。
1 仪器与试药
Agilent HP1100 高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)；
AE-240 电子天平(瑞士布奇)；KQ-100 超声波清洗器(昆山市超

基金项目：甘肃省中医药科研项目(2007050)
声技术有限公司)；R-200 旋转蒸发仪(瑞士布奇)。
木犀草素对照品(批号 111520-200201)购自中国药品生物
制品检定所；1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮对照品(自
提,HPLC 归一化法测定纯度达 98%以上)；湿生扁蕾药材经甘肃
农业大学陈垣教授鉴定为 Gen tianopsis pa ludosa Ma。甲
醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 µm)；流动相
为甲醇(A)-0.4%磷酸水溶液(B)梯度洗脱,A∶B＝50∶50(0～
15 min),A∶B＝55∶45(15～60 min)；检测波长 260 nm；流
速为 1.0 mL/min；柱温 30 ℃。理论塔板数均大于 3 000。色
谱图见图 1。
2.2 对照品溶液制备
精密称取木犀草素对照品 2.1 mg、1,7-二羟基-3,8-二甲
氧基　酮对照品4.6 mg,置 10 mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,
精密吸取 1 mL,用甲醇定容至 5 mL 量瓶中,作为对照品溶液。
·44· Chinese Journal of Information on TCM Mar.2008 Vol.15 No.3







A B t/min
注：A.对照品；B.湿生扁蕾供试品；1.木犀草素；
2.1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮
图 1 湿生扁蕾样品 HPLC 图谱

2.3 供试品溶液制备
精密称取湿生扁蕾药材粉末1 g,用50 mL丙酮回流提取4 h,
提取水浴蒸干,残渣加甲醇溶解并定容至10 mL,摇匀,用0.45 µm
微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察
精密吸取混合对照品溶液2、4、8、10、12、16、18、20 µL,
进样测定,以对照品进样量(µg)为横坐标,峰面积积分值为纵
坐标,绘制标准曲线。木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲氧
基　酮的回归方程分别为：Y＝84.526X－49.163,r＝0.999 4
和 Y＝112.431X－117.129,r＝0.999 7。结果木犀草素和1,7-
二羟基-3,8-二甲氧基　酮分别在 0.084～0.84 µg 和 0.184～
1.84 µg 范围内线性良好。
2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液 10 µL,按上述色谱条件,重复进
样5次,结果木犀草素和1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮的RSD
分别为 1.63%和 0.97%,表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取同一样品溶液,按上述色谱条件,分别于 0、2、4、
6、8、12 h 各进样 10 µL,木犀草素和 1,7-二羟基-3,8-二甲
氧基　酮的 RSD 分别为 2.71%和 1.33%,表明样品溶液在 12 h
内稳定。
2.7 重复性试验
精密称取同一批湿生扁蕾药材 1 g,共 5 份,分别按“2.3”
项下方法制备样品溶液,各取10 µL进样测定,结果木犀草素和
1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮的RSD分别为2.79%(平均含量
0.051%)和 1.36%(平均含量 0.167%)。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的湿生扁蕾药材(木犀草素含量：
0.51 mg/g、1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮含量：1.67 mg/g)
0.5 g,共 6 份,每份精密加入一定量的木犀草素和 1,7-二羟
基-3,8-二甲氧基　酮对照品,按“2.3”项下方法制备样品溶
液,依法测定含量,计算回收率。结果见表 1、表 2。
2.9 样品含量测定
取 5 批湿生扁蕾药材样品,按“2.3”项下方法制备供试
品品溶液。分别精密吸取 10 µL,按上述色谱条件测定,结果
见表 3。

表 1 木犀草素回收率试验结果
样品含量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD
(µg) (µg) (µg) (%) (%) (%)
255.3 256 489.6 95.76
251.1 256 492.4 97.10
261.5 256 507.3 98.03 96.82 2.36
254.0 256 495.4 97.14
260.7 256 500.2 96.81
254.6 256 490.6 96.08
表 2 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮回收率试验结果
样品含量 加入量 测得量 回收率 平均回收率 RSD
(µg) (µg) (µg) (%) (%) (%)
836.0 821 1 603.9 96.79
822.1 821 1 599.2 97.33
856.4 821 1 645.2 98.08 97.19 1.76
831.8 821 1 605.5 97.14
853.9 821 1 621.1 96.79
833.7 821 1 605.3 97.01
表 3 样品含量测定结果(mg/g)
序号 木犀草素 1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮
1 0.47 1.39
2 0.53 1.65
3 0.46 1.79
4 0.56 1.63
5 0.49 1.54
3 讨论
首次通过 RP-HPLC 法测定了湿生扁蕾药材中木犀草素和
1,7-二羟基-3,8-二甲氧基　酮的含量,为湿生扁蕾药材的质
量控制提供可行的方法。
在选择提取溶剂时,对甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯进行
了比较,结果发现,用丙酮作提取溶剂不仅效率高而且杂质少。
流动相用甲醇-水(55∶45)等度洗脱时木犀草素的分离效
果差,与相邻峰分不开,而用甲醇-水(50∶50)等度洗脱时,分
离的时间又偏长。因此,选用梯度洗脱,且在水中加入少量的磷
酸,使峰的对称性得以改善,分离效果提高。
参考文献：
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(收稿日期：2007-09-22,编辑：陈静)