全 文 ：独一味 、螃蟹甲 、糙苏和萝卜秦艽中
5个环烯醚萜苷的含量测定
李茂星1 ,张　超 1, 2 ,乌　兰 3 ,张泉龙1 ,尉丽力 1 ,邱建国 1 ,贾正平1, 2
(1.兰州军区兰州总医院 ,甘肃 兰州 730050;2.兰州大学生命科学学院 ,甘肃 兰州 730000;3.西北民族
大学化工学院 ,甘肃 兰州 730030)
　　摘要　目的:建立测定独一味 、螃蟹甲 、糙苏和萝卜秦艽中 5个环烯醚萜苷含量的 HPLC方法。方法:色谱柱为
SymmetryC18(150mm×4.6mm, 5 μm), 流动相为乙腈(A)-水(B)梯度洗脱 , 0 ～ 5 min:6%A;5 ～ 10min:6% ～ 12%
(A);10 ～ 40 min:12%(A);流速 1.0 mL/min;柱温 20℃, 检测波长 235nm。结果:sesamoside、山栀苷甲酯 、7, 8-de-
hydropenstemoside、penstemoside和 8-O-乙酰山栀苷甲酯分别在 50 ～ 650 μg/mL(r=0.9995), 50 ～ 350 μg/mL(r=
0.9995), 40 ～ 280 μg/mL(r=0.9997), 10 ～ 70 μg/mL(r=0.9997), 40 ～ 280 μg/mL(r=0.9994)范围间与峰面积线
性关系良好;平均加样回收率均在 96% ～ 104%之间 , RSD均小于 5%(n=6)。结论:该方法简便 、准确 ,重复性好 ,
可用于分析独一味 、螃蟹甲 、糙苏和萝卜秦艽中 5个环烯醚萜苷的含量。
关键词　独一味;螃蟹甲;糙苏;萝卜秦艽;环烯醚萜苷;HPLC
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2011)05-0727-03
收稿日期:2010-04-27作者简介:李茂星(1973-),男,副主任药师 , 主要从事天然药物化学与中药新药研究与开发;Tel:0931-8994676, E-mail:limaox2005@ya-hoo.com.cn。
　　化学成分研究表明 ,独一味 、螃蟹甲 、糙苏和萝
卜秦艽这 4种近属药用植物中都含有大量以山栀子
苷为基本母核的环烯醚萜苷类成分〔1-4〕。该类成分
具有广泛的抗炎 、抗糖尿病 、肝保护 、保护心脑血管
神经 、抗氧化及免疫调剂的药理活性 〔5-7〕 ,以 8-O-乙
酰山栀苷甲酯为代表的环烯醚萜苷类成分更是独一
味中的止血活性成分 〔8, 9〕。本文以 sesamoside、山栀
苷甲酯 、7, 8-dehydropenstemoside、penstemoside、8-O-
乙酰山栀苷甲酯这 5个环烯醚萜苷类似物作为测定
指标 ,使用 HPLC法分析测定独一味﹑糙苏﹑螃蟹
甲和萝卜秦艽中的环烯醚萜苷 ,以期为更好的开发
利用这些药用植物提供参考依据。
1　仪器与材料
高效液相色谱仪 ,包括 600型二元梯度泵 、996
型二极管阵列紫外检器 (美国 Waters公司),
BP210S电子分析天平(Sartorius公司), SK7200H超
声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。乙腈
为色谱纯 ,水为灭菌注射用水 ,其余试剂均为分析
纯 。sesamoside、山栀苷甲酯 、 7, 8-dehydropenstemo-
side、penstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品均为
本实验室自制 (从螃蟹甲药材中分离得到 ,经光谱
学和波谱学分析鉴定其结构 ,经 HPLC面积归一化
法计算 ,质量分数均在 98%以上)。独一味和糙苏
全草分别在 2008年 7月采集于甘肃省玛曲县和天
水市 ,螃蟹甲和萝卜秦艽根分别购于西藏林芝和青
海 ,经兰州大学药学院马志刚教授鉴定为唇形科植物
独一味 Lamiophlomisrotata(Benth.)Kudo﹑螃蟹甲
PhlomisyounghusbandiMukerjee﹑糙苏 Phlomisum-
brosaTurcz.和萝卜秦艽 PhlomismedicinalisDiels。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 　色谱柱为 SymmetryC18色谱柱
(150 mm×4.6mm, 5 μm);洗脱流动相为乙腈∶水
梯度洗脱(0 ～ 5 min, 6%乙腈;5 ～ 10 min, 6% ～
12%乙腈;10 ～ 40 min, 12%乙腈);流速 1.0 mL/
min;检测波长 235 nm;柱温 20 ℃;进样量 10 μL。
在此色谱条件下 , 5个环烯醚萜苷成分峰形较好 ,与
其他组分色谱峰可达基线分离。对照品溶液和样品
溶液的色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备　分别精密称取干燥至恒
重的 sesamoside、山栀苷甲酯 、7, 8-dehydropenstemo-
side、penstemoside和 8-O-乙酰山栀苷甲酯对照品各
40 mg置 10mL量瓶中 ,加 50%甲醇溶解并稀释至
刻度 。即得浓度为 4 mg/mL的对照品溶液 ,备用。
2.3　供试品溶液的制备　取 4种药材的粉末(过
四号筛)1g,精密称定 ,分别置具塞锥形瓶中 ,精密
加入 50%甲醇 25 mL,称定重量 ,超声处理 30 min,
冷却 ,再称定重量 ,加 50%甲醇补足减失的重量 ,摇
匀 ,以 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取滤液 ,即得 。
2.4　线性关系考察　分别吸取各个对照品溶液 ,
依次加入到 7个 10mL容量瓶中混匀 ,加 50%甲醇
·727·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2011.05.026
图 1　对照品及 4种样品的 HPLC图谱
A.对照品　B.独一味地上部分　C.独一味地下部分　
D.糙苏地上部分　E.糙苏地下部分　F.螃蟹甲地下部分
G.萝卜秦艽地下部分　 1.sesamoside　 2.山栀苷甲酯　
3.7, 8-dehydropenstemoside　4.penstemoside　 5. 8-O-乙酰
山栀苷甲酯
稀释至刻度 ,配成不同浓度的 5个环烯醚萜苷的混
合对照品溶液 。使 sesamoside的浓度分别为 50、
150、250、350、450、550、650 μg/mL;山栀苷甲酯的浓
度分别为 50、100、150、200、250、300、350 μg/mL;7,
8-dehydropenstemoside的浓度分别为 40、 80、 120、
160、200、240、280 μg/mL;penstemoside的浓度分别
为 10、20、30、40、50、60、70 μg/mL;8-O-乙酰山栀苷
甲酯的浓度分别为 40、80、120、160、200、240、 280
μg/mL。然后按 “ 2.1”项下的色谱条件进行测定 ,
进样 10μL,以峰面积为纵坐标 ,以浓度为横坐标进
行线性回归 ,得各成分回归方程。见表 1。
2.5　精密度试验　取 “ 2.4”项下制备的任意浓度
的混合对照品溶液 ,在 “2.1”项下色谱条件下 ,重复
进样 6次 ,进样量为 10 μL,记录峰面积 ,计算仪器
精密度的 RSD, 结果 sesamoside、山栀苷甲酯 、7, 8-
dehydropenstemoside、penstemoside和 8-O-乙酰山栀
苷甲酯的 RSD分别为 1.54%、 1.31%、 1.61%、
1.97%、1.98%,表明仪器精密度良好 。
2.6　重复性试验 　取同一批的样品 6份 ,按照
“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备样品溶液 ,
在 “2.1”项下的色谱条件下 ,每次进样 10 μL,分别测
定峰面积 ,结果 sesamoside、山栀苷甲酯 、7, 8-dehydro-
penstemoside、penstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯平均
含量分别为 7.25、4.57、2.68、0.68、1.80 mg/g, RSD
分别为 1.54%、0.77%、1.59%、1.15%、1.57%。
2.7　稳定性试验　精密吸取同一样品溶液分别在
0、2、4、8、12、24、48、72 h测定峰面积 ,结果 sesamo-
side、山栀苷甲酯 、7 , 8-dehydropenstemoside、penstem-
oside、8-O-乙酰山栀苷甲酯的 RSD分别为 1.92%、
2.55%、3.68%、 3.22%、 2.73%, 表明样品溶液在
72 h内基本稳定。
　　表 1 　5个环烯醚萜苷的回归方程和线性范围
对照品 回归方程 r 线性范围 /(μg/mL)
sesamoside Y1 =9.227×103X1 +3.968×104 0.9995 50 ～ 650
山栀苷甲酯 Y2 =9.734×103X2 +9.786×104 0.9995 50 ～ 350
7, 8-dehydropenstemoside Y3 =8.327×103X3 +1.254×104 0.9997 40 ～ 280
penstemoside Y4 =1.237×104X4 +2.412×102 0.9997 10 ～ 70
8-O-乙酰山栀苷甲酯 Y5 =1.105×104X5 +1.810×104 0.9994 40 ～ 280
2.8　加样回收率试验　精密吸取已知含量的供试
品适量 6份 ,分别精密加入 sesamoside、山栀苷甲酯 、
7, 8-dehydropenstemoside、penstemoside、 8-O-乙酰山
栀苷甲酯对照品适量 ,使药材中的 sesamoside、山栀
苷甲酯 、 7, 8-dehydropenste-moside、penstemoside、 8-
O-乙酰山栀苷甲酯的量分别与加入各自对照品的质
量比为 1∶1。按照 “ 2.3”项下方法制备样品液 ,按
“2.1”项下的色谱条件进行测定 ,计算加样回收率。
结果 sesamoside、山栀苷甲酯 、7, 8-dehydropenstemo-
side、penstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯的平均回收
率分别为 102.10%、 99.00%、 99.55%、 99.53%、
99.43%, RSD分 别为 1.55%、 2.58%、 2.55%、
·728· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 34卷第 5期 2011年 5月
2.38%、3.08%。
2.9　样品含量测定　分别取 4种药材样品 , 按
“ 2.3”项下方法制备供试品溶液 ,按照 “ 2.1”项
下的色谱条件进行测定 ,进样 10 μL,采用外标法
以峰面积计算 5种环烯醚萜苷的含量 。结果见
表 2。
　　表 2 　样品中五个环烯醚萜苷的测定结果(n=3, mg/g)
样品来源 sesamoside 山栀苷甲酯 7, 8-dehydro-penstemoside penstemoside 8-O-乙酰山栀苷甲酯
独一味地上部分 6.91 8.63 9.07 0.74 13.74
独一味地下部分 7.38 2.07 0.45 0.28 3.74
糙苏地上部分 3.29 0.23 - - 0.37
糙苏地下部分 13.67 0.30 - - 8.47
螃蟹甲地下部分 7.25 4.57 2.68 0.68 1.80
萝卜秦艽地下部分 4.97 5.21 - - -
　　注:“ -”表示未检出
3　讨论
3.1　本实验以 sesamoside、山栀苷甲酯 、7, 8-dehy-
dropenstemoside、penstemoside、8-O-乙酰山栀苷甲酯
这 5个化合物作为测定指标 ,采用高效液相色谱法
对独一味 、螃蟹甲 、糙苏和萝卜秦艽这 4个近属药用
植物中环烯醚萜苷成分进行了分析测定。该方法操
作简单 、重复性好 、准确性高。
3.2　从实验结果可以看出这 4个植物中的环烯醚
萜苷类成分还是比较相似的 ,尤其含量较大的 sesa-
moside更是广泛分布于这 4个植物中 。在部分植物
中未检测到 7, 8-dehydropenstemoside、penstemoside
和 8-O-乙酰山栀苷甲酯的存在 ,可能是由于其含量
太低等的缘故。同时独一味地上部分环烯醚萜苷的
含量要显著高于其地下部分 ,而糙苏地下部分环烯
醚萜苷的含量要显著高于其地上部分 。独一味最早
属于糙苏属 , 1929年 Kudo根据植物形态学研究将
其独立成属 ,但有关独一味是否应该从糙苏属中分
离出来争论已久 〔10〕。本文研究结果表明其与糙苏 、
螃蟹甲和萝卜秦艽这几种糙苏属植物具有十分紧密
的关系 。
3.3　独一味和螃蟹甲作为我国藏 、蒙 、纳西等民族
民间常用药 ,在临床中的应用非常广泛 ,尤其是独一
味目前已经有很多市售制剂 ,而糙苏和萝卜秦艽在
临床上的应用非常少 。从本文的结果可以看出这四
个植物具有相似的活性成分 ,特别是糙苏和独一味
一样都含有大量的 8-O-乙酰山栀苷甲酯和 sesamo-
side。并且糙苏广泛分布于辽宁 、内蒙古 、河北 、山
东 、山西 、陕西 、甘肃 、四川及湖北等省 ,资源丰富。
因此 ,进一步开发和利用糙苏及糙苏属其他植物的药
用价值 ,加强其在临床上的应用 ,具有重要的意义。
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