全 文 ：第 32 卷 第 10 期
2 0 1 4年 1 0月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 32 No． 10
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2014． 10． 003
石香薷总黄酮的体外抗氧化作用研究
张琦1，2，吴巧凤1，朱文瑞1，刘鑫1
(1．浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053;2．浙江省中医院，浙江 杭州 310006)
摘 要:目的:研究石香薷总黄酮的体外抗氧化活性。方法:采用 DPPH 法、邻苯三酚自氧化法和 FＲAP 法，
考察石香薷总黄酮对 DPPH自由基、O2 －的清除能力和 Fe
2 +离子的还原能力。结果:石香薷总黄酮对 DPPH自由
基和 O2 －具有较好的清除能力，对 Fe
2 +离子具有较强的还原能力。结论:石香薷总黄酮具有显著的抗氧化活性，
提示黄酮类化合物可能是石香薷发挥抗氧化活性的主要物质基础。
关键词:石香薷;总黄酮;体外;抗氧化
中图分类号:Ｒ932 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2014)10-2317-03
Anti － oxidation Effects of Total Flavonoids from Mosla Chinensis Maxim
ZHANG Qi1，2，WU Qiaofeng1，ZHU Wenrui1，LIU Xin1
(1． College of Pharmacy，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，Zhejiang，China;
2． Zhejiang Provincial Hospital of TCM，Hangzhou 310053，Zhejiang，China)
Abstract:Objective:To study the antioxidant activity of total flavonoids from Mosla chinensis Maxim． Methods:DPPH
assay was used to evaluate the DPPH radical scavenging activities of total flavonoids from Mosla chinensis Maxim and py-
rogallol autoxidation method was used to evaluate the 02 － radical scavenging activities of them，and FＲAP assay was used
to evaluate the Fe2 + reducing power of them． Ｒesults:The total flavonoids from Mosla chinensis Maxim exhibited good DP-
PH radical and 02 － radical scavenging activities and good Fe
2 + reducing power． Conclusions:The flavonoids from Mosla
chinensis Maxim extract showed good antioxidant activities in vitro，and the flavonoids may be the main components of the
extract that play anti － oxidant activities．
Key words:Mosla chinensis Maxim;total flavonoids;in vitro;antioxidant
收稿日期:2014 － 06 － 05
基金项目:国家自然科学基金项目(81274030 /H2803);浙江省自然
科学基金项目(LY12H27008)
作者简介:张琦(1977 －)，女，主管中药师，研究方向:中药有效成
分分析。
通讯作者:吴巧凤(1963 －)，女，教授，博士研究生导师，研究方向:
中药活性成分研究与产品开发。E-mail:wqfyjm@ sina．
com。
随着社会科学的飞速发展和生活水平的日趋提高，人
们对健康长寿的渴望超过了任何一个历史时期，促使人们
对衰老机制的不断深入研究，使得延缓衰老成为当今社会
的一个前沿课题。现代分子生物学研究表明，生物体在衰
老、应激、疾病的情况下，产生过量的自由基可引起生物膜
脂质、蛋白质和 DNA的氧化性损伤，从而引起动脉粥样硬
化、中风、肝硬化、癌症、衰老等多种疾病［1 － 3］。目前使用较
多的合成抗氧化剂(如维生素 C、维生素 E 等)，对人体具
有潜在的肝不良反应［4 － 5］。在崇尚和回归自然的今天，人
们更倾向于植物来源的天然抗氧化剂。天然抗氧化剂常含
有多种不同的抗氧化活性成分，能抗衰老、清除和抑制体内
自由基的产生，其抗氧化能力甚至比合成抗氧化剂更强，且
高效、低毒。故从植物资源中寻找天然抗氧化剂是一条重
要的途径［6 － 7］。
石香薷为唇形科石荠苧属植物 Mosla chinensis Maxim
的全草，具有发汗解表、理气化湿等功效，主治夏月感冒、腹
疼泄泻和中暑呕恶等症［8］。现代研究发现石香薷中主要
含有挥发油、黄酮类等活性成分，当前对挥发油的活性成分
及药效研究报道较多，对石香薷黄酮类化合物的抗氧化作
用较少报道。故本文在对石香薷总黄酮提取工艺进行优化
的基础上，采用大孔树脂精制总黄酮，对精制后的总黄酮进
行体外抗氧化实验，采用 DPPH 法、邻苯三酚自氧化法和
FＲAP法，考察石香薷总黄酮对 DPPH 自由基、O2 －的清除
能力和 Fe2 +离子的还原能力。明确其抗氧化活性，为寻找
疗效确切的天然抗氧化剂提供实验依据。
1 实验材料与仪器
1． 1 试药
石香薷购于杭州华东医药有限公司参茸分公司，经浙
江中医药大学药学院药用植物副教授俞冰鉴定为(Mosla
chinensis Maxim)。芦丁标准品(中国药品生物制品检定
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所，批号:100226);1，1 －二苯基 － 2 －苦肼基(Sigma 公司，
批号:S44112 － 089);三羟甲基氨基甲烷(国药集团化学试
剂有限公司，批号:F20080320);维生素 C(浙江瑞新药业股
份有限公司，批号:20120333);其他试剂均为分析纯。
1． 2 仪器
HH － S 型水浴锅(巩义市英峪予华仪器厂);BS110S
电子天平(北京赛多利斯天平有限公司);UV － 2600a 型紫
外可见分光光度计(上海尤尼柯有限公司)。
2 实验方法
2． 1 供试品溶液的制备
称取石香薷粉末 30 g，加 18 倍量 60%的乙醇，于 90 ℃
回流提取 2． 16 h，提取液抽滤，减压浓缩至提取液无醇味，
低温真空干燥，得石香薷粗黄酮。取适量粗黄酮粉末，采用
HDP 300 大孔树脂分离纯化，将洗脱液浓缩，低温真空干
燥，置于 4 ℃冰箱中保存备用，得精制总黄酮，实验时配制
成总黄酮含量为 77． 26 mg /mL 浓度的溶液，作为供试品溶
液。
2． 2 体外抗氧化实验
2． 2． 1 对 DPPH自由基的清除作用 分别取稀释后不同
浓度的石香薷总黄酮供试品溶液 0． 5 mL，置 10 mL 试管
中，加入 2． 5 mL 浓度为 0． 10 mmol /L 的 DPPH 溶液，室温
避光反应 30 min，同时以 95%乙醇为空白，于 517 nm 波长
处测定吸光度，并以相应浓度的维生素 C 溶液作阳性对
照。按照下列公式计算 DPPH 自由基清除率，并进一步计
算其半数抑制率 IC50
［9 － 10］。
DPPH自由基清除率 =
A0 －(As － Ac)
A0
× 100%
式中，As ─ 0． 5mL 石香薷总黄酮 供 试 品 溶 液
+ 2． 5 mLDPPH溶液的吸光度值
Ac─0． 5 mL石香薷总黄酮供试品溶液 + 2． 5 mL 95%
乙醇的吸光度值
A0─0． 5 mL蒸馏水 + 2． 5 mL DPPH溶液的吸光度值
2． 2． 2 对超氧阴离子的抑制作用 ①邻苯三酚自氧化速
率的测定:取 0． 05mol /L Tris － HCl 缓冲溶液(pH = 8． 2)
4． 5 mL、蒸馏水 0． 5 mL，置 15 mL 塑料离心试管中，混匀，
于 37℃水浴中保温 20 min，取出后立即加入 37 ℃预热的
25 mmol /L的邻苯三酚 0． 4 mL，迅速摇匀后倒入比色皿中，
以 10 mmol /L HCl溶液为参比，于 325 nm波长下，每隔 30 s
测定吸光度，计算线性范围内每分钟内吸光度的变化，记录
结果。并以时间的对数值为横坐标(X)、吸光度值为纵坐
标(Y)进行线性回归，计算回归方程［11 － 12］。
②对邻苯三酚自氧化反应体系的影响:分别取 0． 05
mol /L Tris － HCl缓冲溶液(pH = 8． 2)4． 5 mL、稀释后加不
同浓度的石香薷总黄酮供试品溶液 0． 5 mL，置 15 mL离心
试管中，混匀，于 37 ℃水浴中保温 20 min，取出后立即加入
37 ℃预热的 25 mmol /L的邻苯三酚 0． 4 mL，迅速摇匀后倒
入比色皿中，以 10 mmol /L HCl 溶液为参比，于 325 nm 波
长下，每隔 30 s测定吸光度，计算线性范围内每分钟内吸
光度的变化，记录结果。以时间的对数值为横坐标(X)、吸
光度值为纵坐标(Y)进行线性回归，计算回归方程。并根
据“2． 2． 2． 1”项的测定结果，按以下公式计算石香薷总黄
酮供试品溶液对邻苯三酚自氧化的抑制率。
抑制率(%)=
V0 － V1
V0
× 100%
2． 2． 3 对 FＲAP还原能力的影响 分别取稀释后不同浓
度的石香薷总黄酮供试品溶液 0． 3 mL，加入 0． 2 mol /L pH
为 6． 6 的磷酸缓冲液 1． 5 mL及 1%的铁氰化钾溶液 1 mL，
50 ℃水浴保温 20 min后，加入 10%三氯乙酸 1 mL，混匀后
加入蒸馏水 2． 5 mL 及 0． 1%三氯化铁 0． 1 mL，于 700 nm
波长处测定溶液的吸光度，并以相应浓度的维生素 C 溶液
作阳性对照。
3 结果与分析
3． 1 石香薷总黄酮对 DPPH自由基的清除作用
由图 1 可知，石香薷总黄酮和维生素 C 对 DPPH 自由
基有较好的清除作用，且在试验浓度范围内，对 DPPH自由
基的清除作用均呈较好的量效关系，且当石香薷总黄酮浓
度为 34． 9 μg /mL 时，其对 DPPH 自由基的清除率约为
80%，与浓度为 16． 2 μg /mL 的维生素 C 溶液基本相当。
石香薷总黄酮对 DPPH 自由基清除的 IC50对应的浓度为
18． 6 μg /mL。
图 1 石香薷总黄酮供试品溶液对 DPPH自由基的清除作用
3． 2 石香薷总黄酮对超氧阴离子抑制作用
3． 2． 1 邻苯三酚自氧化速率的测定结果 采用邻苯三酚
自氧化法，利用 O2 －清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在 325
nm波长处的吸收峰受到抑制这一特点，用紫外分光光度计
进行检测，间接测得对 O2 －的清除率。以时间对数值 X 为
横坐标，吸光度值 Y为纵坐标，进行线性回归，得回归方程
Y =0． 5595X + 0． 3622，Ｒ2 = 0． 9964，其斜率即为邻苯三酚
自氧化反应速率:V0 = 0． 5595。
3． 2． 2 石香薷总黄酮对邻苯三酚自氧化反应体系的影响
以时间的对数值 X 为横坐标，吸光度值 Y 为纵坐标，进
行线性回归，如表 1 所示，得各浓度的回归方程和相关系
数，其斜率即为加入石香薷总黄酮供试品溶液后的邻苯三
酚自氧化反应速率(V1)，并进一步计算其各自的抑制率。
由表 1 可知，石香薷总黄酮对超氧阴离子具有一定的
抑制作用，且其抑制作用随着浓度的增加而逐渐增强。即
在试验浓度范围内，对超氧阴离子的抑制作用呈一定的量
效关系。
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表 1 石香薷总黄酮对邻苯三酚自氧化速率的影响结果
浓度(mg /mL) 回归方程 相关系数(Ｒ2) 反应速率 抑制率(%)
0． 09 Y = 0． 4934X + 0． 5628 0． 9967 0． 4934 11． 81
0． 29 Y = 0． 3167X + 0． 8353 0． 9924 0． 3167 43． 40
0． 58 Y = 0． 1972X + 0． 9905 0． 9733 0． 1972 64． 75
3． 3 石香薷总黄酮对 FＲAP还原能力的测定结果
测定天然物质还原能力的方法，最常用的为 FＲAP法，
其原理是:在低 pH 下，抗氧化剂(还原剂)将 Fe3 +还原成
Fe2 +，与显色剂(如三吡啶三嗪、硫氰酸铵等)反应，在 700
nm显色波长处有最大吸收。结果以 Fe2 +当量或相对于标
准抗氧化剂的能力来表示。故以样品的浓度 X 为横坐标，
以反应体系吸光度值 Y 为纵坐标，进行回归分析，并进一
步计算其回归方程和相关系数，结果见表 2 及图 2。
表 2 还原力拟合方程
样品 回归方程 相关系数(Ｒ2)
石香薷总黄酮 Y =3． 6163X － 0． 0254 0． 9940
维生素 C Y =0． 0062X + 0． 0302 0． 9363
由图 2 可知，随着维生素 C 和石香薷总黄酮浓度的增
加，其还原能力也随之增强，并在实验浓度范围内，对 Fe3 +
的还原能力均呈一定的量效关系。且当石香薷总黄酮浓度
为 143 μg /mL时，其对 Fe3 +的还原能力约与 69． 7 μg /mL
的维生素 C溶液相当。
图 2 石香薷总黄酮的对 FＲAP还原能力的测定结果
4 讨 论
DPPH法、邻苯三酚自氧化法和 FＲAP 法都是基于紫
外 －可见分光光度法以测定样品的抗氧化活性，是体外测
定物质抗氧化能力的常用方法。这三种方法可从不同角度
反映抗氧化活性［13］。若样品能清除 DPPH自由基，则表明
其具有降低烷基自由基、羟基自由基和超氧阴离子浓度以
及抑制脂质过氧化链反应的作用。因此，可于 517 nm波长
下考察其吸光度的变化来评价样品对 DPPH自由基的清除
作用，进而评价样品的抗氧化能力［14］;邻苯三酚在碱性条
件下可迅速自氧化，并释放出 O －2 ，生成有色的中间产物，
随着中间产物的生成，吸光度值越来越大，而抗氧化剂则会
阻碍邻苯三酚自氧化反应发生，降低其吸光度的增长速率，
进而评价样品抗氧化能力的强弱［15］。FＲAP法则是测定待
测物质将 Fe3 +还原为 Fe2 +的能力，其吸光度代表黄酮物质
的还原能力，吸光度越大，表示其还原能力越强［16］。故本
文将三种方法相结合，可以较全面地反映被测物质的抗氧
化能力。
本文采用 DPPH法、邻苯三酚自氧化法和 FＲAP 法对
石香薷总黄酮的体外抗氧化活性进行了考察。研究表明:
石香薷总黄酮具有清除各种活性氧自由基和抑制脂质过氧
化反应、抑制机体脂质生物膜损伤等作用，因此，石香薷
总黄酮可作为一种天然抗氧化剂，清除体内正常代谢所
产生的羟自由基、超氧阴离子等活性氧自由基，避免自
由基失衡而引发恶性肿瘤和机体快速衰老等疾病。本
文研究结果可为石香薷总黄酮的进一步开发利用提供
科学的实验依据。
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