全 文 ：藻百年的组培快繁技术研究
张先云 ,袁秀云 ,马 杰　(郑州师范高等专科学校生物技术研究所,河南郑州 450044)
摘要　[目的 ]研究藻百年(Exacumtetragonum)的离体培养和快速繁殖技术。 [方法 ]利用藻百年的茎尖和茎段作为外植体进行组织培
养和快速繁殖。[结果]结果表明 , MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 8g/L为最适诱导培养基;MS+6-BA1mg/L+
NAA0.1mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 8g/L为最适增殖培养基 , 1/2MS+NAA0.3mg/L+蔗糖 30g/L+琼脂 8g/L为最适生根培养基。
[结论]该研究可为其他龙胆科植物的组织培养与快速繁殖提供方法参考。
关键词　藻百年;丛生芽;组织培养;快速繁殖
中图分类号　C603.6　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)11-04878-02
StudyonTissueCultureandRapidPropagationofExacumtetragonum
ZHANGXian-yunetal　(InstituteofBiologyTechnology, ZhengzhouTeacher sColege, Zhengzhou, Henan450044)
Abstract　[ Objective] TheresearchaimedtostudythetissuecultureandrapidpropagationofExacumtetragonum.[ Method] Thetissuecul-
tureandrapidpropagationofE.tetragonumwerecariedoutusingstemapexandstemwithbudsasexplants.[ Result] Theresultsshowedthat
MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L+canesugar30g/L+agar8g/Lwasoptimummediumforinduction.MS+6-BA1mg/L+NAA0.1
mg/L+canesugar30g/L+agar8g/Lwastheoptimummediumforreduplication.1/2MS+NAA0.3mg/L+canesugar30g/L+agar
8 g/Lwasoptimumrootingmedium.[ Conclusion] Thisstudycouldprovidereferencemethodsforthetissuecultureandrapidpropagationof
otherplantsofGentianaceae.
Keywords　Exacumtetragonum;Rosetebud;Tissueculture;Rapidpropagation
基金项目　河南省郑州市重点科技攻关项目(051SGDS17017)。
作者简介　张先云(1957-),女 , 河南郑州人 , 副教授 , 从事生物技术
研究。
收稿日期　 2009-01-19
　　藻百年(Exacumtetragonum)是龙胆科藻百年属的一种
草本植物 ,花素雅 、美丽 、密集而丰满 ,花期可维持在 3个月
以上 ,是观花 、观叶的小型盆花观赏植物 ,家庭装饰效果极
佳 ,是近来欧美流行的时尚花卉 。利用组织培养进行快速繁
殖可进行种苗的大批量工厂化生产 ,以满足市场需求。该研
究采用藻百年的茎尖和茎段作为外植体进行离体培养 ,可为
其他龙胆科植物的组织培养与快速繁殖提供方法参考。
1　材料与方法
试验在郑州师范高等专科学校生物技术研究所生物技
术实验室和郑州师范高等专科学校智能温室进行。
1.1　材料
1.1.1　外植体。藻百年来自郑州陈砦花卉市场。
1.1.2　培养基。诱导和增殖培养基为A1 ～ A9号 ,采用
L9(34)正交试验 [ 1] ,因素为 MS、6-BA、NAA。其中 , MS成分
含量的 3个水平为 1.0、0.5、1.0(从 1.0、0.5两个水平中选
一个较好的水平 1.0,重复 1次作为第 3水平);6-BA3个水
平为 1.0、1.5、2.0 mg/L;NAA3个水平为 0.1、0.2、0.3 mg/L
(表 1)。生根培养基为:B1, 1/2 MS+NAA0.1 mg/L;B2,
1/2MS+NAA0.2mg/L;B3, 1/2MS+NAA0.3mg/L(表 2)。
1.2　方法
1.2.1　丛生芽诱导。选取幼嫩带芽茎段和顶芽作为外植
体 ,去除杂质和叶 ,剪成小段 ,在含 0.1%洗衣粉的洗涤液中
漂洗 5min,流水冲洗 2 ～ 3h,在超净工作台上首先用 75%的
酒精表面灭菌 30 s,再用浓度 0.1%氯化汞溶液进行表面灭
菌 7min,每次灭菌后用无菌水冲洗 5 ～ 6次 [ 2] ,然后将灭菌
后的外植体去掉两端 ,剪成带有 1 ～ 2个对生芽的小段分别
接种在 A1 ～ A9号培养基上 , 30 d统计诱导率 ,每处理接种
15个 ,重复 3次。
1.2.2　丛生芽的增殖。将获得的丛生芽分割后转移到A1 ～
A9号的新培养基上 ,对丛生芽的增殖倍数进行研究 ,每种培
养基接种 15个 ,重复 3次 。培养 30d后进行统计。
1.2.3　生根与移栽。不定芽伸长至 3 cm左右时自基部切
下移栽到 B1 ～B3生根培养基上 ,当生根的瓶苗长至 5 cm左
右高时 ,转移至自然光下炼苗 2 ～ 5 d,然后将其从玻璃瓶中
取出 ,洗净根部粘连的培养基后 ,移入温棚蛭石和草炭为基
质的营养钵中 , 70%遮阴。
1.2.4　统计结果。
诱导率 =诱导出丛生芽外植体数 /培养外植体数 ×
100% (1)
增殖倍数 =丛生芽继代数 /接种数 (2)
生根率 =生根小苗数 /总小苗数 ×100% (3)
1.3　培养条件　各种培养基均添加蔗糖 30 g/L,琼脂 8
g/L,所有培养基的 pH值均为 5.8 ～ 5.9, 120 ℃灭菌 25 min,
培养温度均为(24±2)℃,光照强度为 2 500 ～ 3 000 lx,光照
时间为 12h/d。
2　结果与分析
2.1　不同浓度激素组合对外植体诱导形成丛生芽的影
响　正交试验统计分析结果表明(表 1):在诱导试验中 R1
值大小顺序为 C(17.03)>B(16.80)>A(12.33),据 R1值的
大小可知 C是影响诱导的主要因素 ,从 C因素的均值比较可
知以其水平 2即 0.2mg/L的浓度对诱导效果最佳;B因素的
R1值仅次于 C,说明 B因素的浓度对藻百年的诱导影响也比
较大 ,以其水平 3效果最好;因素 A对藻百年诱导的影响力
最小 ,以其水平 3效果相对较好。试验结果表明影响藻百年
诱导的不同浓度激素的最佳组合为 A3B3C2 ,即 MS+6-BA2
mg/L+NAA0.2mg/L,与其相对应的培养基是 A9,其中的丛
生芽伸长较快 ,相对较粗 ,生长健壮 ,颜色翠绿。
2.2　不同浓度激素组合对丛生芽增殖的影响　由正交试验
统计分析表明(表 1):在丛生芽增殖试验中 R2值大小顺序
为 C(1.13)>B(0.77)>A(0.20),据 R2 值的大小可知 C
是影响丛生芽增殖的主要因素 ,从C因素的均值比较可知以
责任编辑　张彩丽　责任校对　张士敏安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(11):4878-4879
表 1　L9(34)正交试验设计及结果
Table1　ThedesignandresultsofL9(34)orthogonalexperiment
处理号
Treatment
No.
因素 Factor
A(MS) B(6-BA)mg/L
C(NAA)
mg/L
诱导率∥%
Induction
rate
增殖倍数
Proliferation
multiple
A1 1.0 1.0 0.1 63.2 7.2
A2 1.0 1.5 0.2 81.5 6.3
A3 1.0 2.0 0.3 67.2 5.7
A4 0.5 1.0 0.2 63.8 6.5
A5 0.5 1.5 0.3 54.9 5.4
A6 0.5 2.0 0.1 82.3 6.8
A7 1.0 1.0 0.3 65.5 6.4
A8 1.0 1.5 0.1 79.1 6.9
A9 1.0 2.0 0.2 93.4 5.3
R1 12.33 16.80 17.03R2 0.20 0.77 1.13
　注:诱导率为除去污染后的统计值, 诱导率和增殖倍数均为平均值。
R1为诱导试验的极差 , R2为增殖试验的极差。
　Note:Theinductionratewascalculatedafterremovingpollution.Thein-
ductionrateandproliferationmultiplearetheaveragevalues.R1
standsfortherangeofinductiontestandR2 standsfortherangeof
proliferationtest.
其水平 1即 0.1 mg/L的浓度对藻百年丛生芽增殖效果最
佳;B因素的 R2值次于 C,说明 B因素的浓度对藻百年的丛
生芽增殖影响也比较大 ,以其水平 1效果最好;因素 A对藻
百年丛生芽增殖的影响最小 ,以其水平 1效果相对较好。试
验结果表明影响藻百年丛生芽增殖的不同浓度激素的最佳
组合为 A1B1C1,即:MS+6-BA1 mg/L+NAA0.1 mg/L,其
相对应的培养基是 A1。
2.3　不同浓度激素组合对藻百年生根的影响　在生根试验
中(表 2),从每棵小苗生根数和根的长度来看 B2培养基效
果最好 ,但 B2培养基中的小苗移栽后成活率没有 B3培养基
内的小苗成活率高;B1培养基中每棵小苗生根数 、高度和移
栽效果最差;从 B3培养基中的小苗从生根数和根的长度来
看没有 B2培养基中的小苗好 ,但生根数和长度差别不大 ,移
栽成活率最高。小苗从增殖培养基转移到 3种生根培养基
内的生根速度区别不大 ,大约为 25d左右。综合分析藻百年
生根比较理想的培养基为 B3,即 1/2MS+NAA0.3 mg/L。
表 2　不同培养基对生根的影响
Table2　Efectsofdiferentmediaontherooting
培养基
Media
生根数
Rootnumber
长度∥cm
Length
成活率∥%
Survivalrate
B1 4.8 0.5～ 1.0 76
B2 5.6 2.5以上 82
B3 5.3 1.5～ 2.0 95
3　结论
NAA的浓度对藻百年丛生芽的诱导 、增殖和生根影响
最大 ,但所需要的浓度不同 ,浓度为 0.2 mg/L对藻百年的诱
导有利 ,浓度为 0.1mg/L的 NAA对藻百年的增殖壮苗比较
有利 ,浓度为 0.3mg/L对藻百年的生根更好;IBA的浓度对
藻百年诱导 、增殖的影响仅次于 NAA;MS的浓度对藻百年的
诱导 、增殖影响不大。
参考文献
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研究[ J].生物技术, 2007, 17(1):78-81.
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(上接第 4877页)
图 3　不同光照对云南红豆杉细胞生长量和 10-DABⅢ形成的
影响
Fig.3　Efectsofdiferentiluminationonthegrowthincrement
ofcelsandtheformof10-DABⅢ inTaxusyunnanensis
因此 ,光照强度是 10-DABⅢ合成的重要影响因素 ,暗培养更
有利于云南红豆杉细胞培养过程中 10-DABⅢ的合成与
释放。
3　小结
在云南红豆杉细胞培养过程中发现 ,细胞培养物中 10-
DABⅢ的含量可高达千分之一 ,比天然云南红豆杉植物枝叶
中含量高 5 ～ 8倍 ,所以提高红豆杉细胞培养物中 10-DABⅢ
的含量比提高紫杉醇的含量更容易 [ 8] 。
参考文献
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