全 文 ：北方园艺２０１３（０５）：１２５～１２８ ·植物保护·
第一作者简介：刘威（１９８２－），女，广西北流人，本科，助理工程师，
现主要从事药用植物病虫害等研究工作。
基金项目：广西省卫生厅自筹基金资助项目（Ｚ２０１１１６１）。
收稿日期：２０１２－１１－０９
药水苏白绢病病原鉴定及其生防木霉菌株筛选
刘 　 威，蓝 祖 栽，叶 云 峰，蒋 　 妮，刘 丽 辉
（广西壮族自治区药用植物园，广西药用资源保护与遗传改良重点实验室，广西 南宁５３００２３）
　　摘　要：以药水苏白绢病株为试材，通过致病性测定法确定病原菌，采用病原菌的形态鉴定
方法并结合该菌的ＩＴＳ　ｒＤＮＡ序列分析鉴定病原菌种类；采用平皿对峙法筛选拮抗菌株。结果
表明：药水苏白绢病的病原菌为罗氏白绢小菌核菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　ｒｏｌｆｓｉ　Ｓａｃｃ．）；５个供试木霉菌株
中以哈茨木霉（Ｈ２）对病原菌的抑制作用最强，拮抗指数为Ⅱ级，抑菌率为８６．２７％。
关键词：药水苏；白绢病；病原鉴定；拮抗木霉；筛选
中图分类号：Ｓ　５６７．２３＋９　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１３）０５－０１２５－０４
　　药水苏（Ｂｅｔｏｎｉｃａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　Ｌ．）属唇形科药水苏属
多年生草本植物，以根茎入药，其性辛、平，入脾、胃二经，
芳香醒胃、行气消胀，用于脾胃不和或脾胃气滞所致纳
少、脘腹胀满、嗳气呃逆、大便溏薄等症。主要化学成分
有水苏素（Ｂｅｔｏｎｉｃｉｎｅ）和异水苏素（Ｌｔｕｒｉｃｉｎｅ）［１］。
药水苏原产欧洲及西亚，在全国各地植物园及生产
种植基地作为药用植物引种栽培，主要以根茎繁殖。白
绢病是药水苏的主要病害，该病害在高温多雨季节容易
发生和流行，主要危害根茎和茎基部。发生期病菌可大
量繁殖扩散，且为害期长，一旦感染病害就会造成严重
　　　
损失，直接影响品种的产量、品质，严重时甚至导致全部
死亡。鉴于药水苏白绢病的发生及防治方面尚鲜见相
关的报道，为此，该研究对该病害的病原菌进行了分离、
鉴定，研究其发病规律，筛选对药水苏白绢病病原菌抑
制效果较好的木霉菌株，以期为药水苏白绢病的有效防
治提供依据。
１　材料与方法
１．１　试验材料
标本来源：试验用的药水菌白绢病标本采于广西药
用植物园。
供试的生防木霉菌株：①哈茨木霉Ｈ１（Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍ），
广西农科院微生物研究所生物防治研究室提供；②哈茨
木霉Ｈ２（Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍ），中国工业微生物菌种保藏中心
提供；③哈茨木霉Ｈ５（Ｔ．ｈａｒｚｉａｎｕｍ），中国工业微生物
　　　
Ｉｎｉｔｉａｌ　Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ
Ｌｅｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｂｂａｇｅ　Ｂｌａｃｋ　Ｓｐｏｔ　Ｄｉｓｅａｓｅ
ＭＡ　Ｈａｉ－ｘｉａ１，２，ＱＵ　Ｚｈｉ　１，ＬＩＵ　Ｙｉｎｇ２，３，ＬＩ　Ｄａｎ２，ＧＡＯ　Ｄｏｎｇ－ｍｅｉ　２，ＹＡＮＧ　Ｘｉｎ－ｄｏｎｇ２，４
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｔｒｏｐｉｃａｌ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｈａｉｋｏｕ，Ｈａｉｎａｎ　５７１１０１；２．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ
Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ　１３０１１８；３．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｊｉｌｉｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｏｎｇｚｈｕｌｉｎｇ，Ｊｉｌｉｎ　１３６１００；４．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，Ｊｉｌｉｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ，Ｊｉｌｉｎ　１３０６００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ‘Ｂａｉｂａｎｇｃａｉ’ｃａｂｂａｇｅ　ａｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｌｅｓｉｏｎ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃａｂｂａｇｅ　ｂｌａｃｋ　ｓｐｏｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｗｅｒｅ
ｓｔｕｄｉｅｄ　ｉｎ　ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ａｎｄ　ｆｉｅｌｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｗａｓ　２～３ｄａｙｓ　ｕｎｄｅｒ　ｎａｔｕｒａｌ
ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ．Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｈａｄ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｅｆｅｃｔ　ｏｎ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ．Ｔｈｅ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅ　ｓｈｏｒｔｅｒ　ｔｈｅ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ
ｐｅｒｉｏｄ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ　ｗａｓ　１２ｈｏｕｒｓ　ｏｖｅｒ　３０℃．Ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ　ａｐｐｅａｒａｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｗａｓ　ａｂｏｕｔ　４ｄａｙｓ．Ｔｈｅ
ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ　ｏｆ　ｌｅｓｉｏｎ　ｔｈｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｗａｓ　８～１３ｄａｙｓ　ａｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｓｉｏｎ　ｈａｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ．Ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ
ｌｅｓｉｏｎ　ｅｘｔｅｎｄ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｎｇｔｈ，ｗａｓ　３．４～５．０ｍｍ．Ｔｈｅ　ｌｅｓｉｏｎ　ｅｘｔｅｎｄｅｄ　ｑｕｉｃｋｌｙ　ａｔ　ｔｈｅ　ｂｅｇｉｎｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｈｅ　ｈａｌｆ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｇｒｅａｔｅｓｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　４～５ｄ，ｌｅｓｉｏｎ　ｒｅａｃｈｅｄ　ｔｈｅ　ｂｉｇｇｅｓｔ　ｌｅｎｇｔｈ　ａｔ　１４ｄ．Ｔｈｅ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ　ｅｑｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｌｅｓｉｏｎ　ｌｅｎｇｔｈ（ｙ）ｔｏ
ｄａｔｅ（ｘ）ｗａｓ　ｃｏｎｃｌｕｄｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｙ＝１．３８２７＋０．２０７３ｘ（ｒ＝０．９９５１）．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｂｌａｃｋ　ｓｐｏｔ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｏｆ　ｃａｂｂａｇｅ；Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ；ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ；ｌｅｓｉｏｎ　ｅｘｔｅｎｓｉｏｎ
５２１
·植物保护· 北方园艺２０１３（０５）：１２５～１２８
菌种保藏中心提供；④康氏木霉Ｋ（Ｔ．ｋｏｎｉｎｇｉ），中国工
业微生物菌种保藏中心提供；⑤绿色木霉Ｌ（Ｔ．ｖｉｒｉｄｅ），
广西农科院微生物研究所生物防治研究室提供。
引物：核糖体ｒＤＮＡ－ＩＴＳ序列的通用引物ＩＴＳ１（５′－
ＴＣＣ　ＧＴＡ　ＧＧＴ　ＧＡＡ　ＣＣＴ　ＧＣＧ　Ｇ－３′）和ＩＴＳ４（５′－ＴＣＣ
ＴＣＣ　ＧＣＴ　ＴＡＴ　ＴＧＡ　ＴＡＴ　ＧＣ－３′），由上海捷瑞生物工
程技术服务有限公司合成。
１．２　试验方法
１．２．１　病害症状描述　对田间植株的自然发病症状进
行观察和描述。
１．２．２　病原菌分离培养　采用常规的组织分离法进行
病原菌的分离。选取初发病的茎组织进行病菌分离，在
病健交界处剪取约０．５ｃｍ的茎段，用７５％酒精消毒３０ｓ，
再用０．１％浓度的升汞溶液消毒３ｍｉｎ后，用无菌水洗３
次，接种于ＰＤＡ培养基平板上，２８℃恒温条件下培养，待
长出菌丝后（４ｄ），挑取菌落边缘菌丝至ＰＤＡ培养基上
进行纯化，直至获得纯培养物。
１．２．３　致病性测定　将分离、纯化后培养出来的病原
菌，用针刺接种法［２］接种到药水苏的健康叶片及茎秆
上，以不接种病原菌的组织为对照，放置于具有湿润滤
纸的培养皿中，置于２８℃的恒温箱内培养。每处理重复
４次，培养期间保持一定的湿度，观察、记录发病情况。
待接种组织表现出症状后对病斑进行组织分离并培养，
根据柯氏赫氏法则验证分离物是否为该病原菌，确认致
病菌株。
１．２．４　病原菌的培养性状及形态特征观察　将纯化后
的菌株移至ＰＤＡ平板，于２８℃下培养，观察记录病原菌
的菌落、菌丝及菌核的形态特征，参考魏景超［３］的方法
进行形态鉴定。
１．２．５　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ区的ＰＣＲ扩增及序列分析　病原菌
ＤＮＡ提取采用ＣＴＡＢ法［４］。病原菌ｒＤＮＡ的ＩＴＳ区域
ＰＣＲ扩增选用通用引物ＩＴＳ１（５′－ＴＣＣ　ＧＴＡ　ＧＧＴ　ＧＡＡ
ＣＣＴ　ＧＣＧ　Ｇ－３′）和ＩＴＳ４（５′－ＴＣＣ　ＴＣＣ　ＧＣＴ　ＴＡＴ　ＴＧＡ　ＴＡＴ
ＧＣ－３′）。反应在５０μＬ体系中进行，体系含有１０×ＰＣＲ
Ｂｕｆｅｒ　５μＬ，ｄＮＴＰ（１０ｍＭ）２μＬ，Ｐｒｉｍｅｒ　ＩＴＳ１（１０μＭ）
２μＬ，Ｐｒｉｍｅｒ　ＩＴＳ４（１０μＭ）２μＬ，Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ　１００ｎｇ，
ｒ　Ｔａｑ（５Ｕ／μＬ）１μＬ；ｄｄＨ２Ｏ补足至５０μＬ。反应程序
为：９５℃预变性５ｍｉｎ；９５℃变性３０ｓ，５８℃退火３０ｓ，７２℃
复性８０ｓ，３３个循环；７２℃延伸７ｍｉｎ。ＰＣＲ产物经琼脂
糖凝胶电泳回收目标ＤＮＡ片段，由北京诺赛基因组研
究中心有限公司进行测序，测序结果用Ｂｌａｓｔ软件在
ＧｅｎＢａｎｋ数据库中进行同源性比对。根据同源性比对
结果，结合病原菌的形态特征进行鉴定。
１．２．６　木霉菌株对药水苏白绢病菌的室内拮抗作用测
定　采用对峙培养法［５］，以ＰＤＡ为供试培养基，在培养
皿上将病原菌分别与康氏木霉Ｋ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉ）、
哈茨木霉Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ）、绿色木
霉Ｌ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｒｉｄｅ）５种不同来源的木霉菌株进行
对峙培养试验，每处理４次重复，于２８℃恒温培养箱中
培养，观察木霉菌株和病原菌的生长情况。以单独培养
的病原菌为对照。每天记录病原菌落指向木霉菌半径
及对照病原菌菌落半径，５ｄ后，采用拮抗系数及抑制率
评价不同木霉间的拮抗作用强度，筛选出拮抗作用较强
的木霉菌株。拮抗系数分级标准［６］为：Ⅰ级，木霉菌丝占
据平皿１００％，Ⅱ级，木霉菌丝占据平皿＞２／３；Ⅲ级，木霉
菌丝占据平皿１／３～２／３；Ⅳ级，木霉菌丝占据平皿＜１／３；
Ⅴ级，病原菌丝占据平皿１００％。抑制率＝［病原菌对照
菌落半径－病原菌落指向木霉菌的半径）／病原菌对照菌
落半径］×１００％。
２　结果与分析
２．１　症状特点
调查发现，白绢病主要为害根、茎部，叶片也可为
害。病株发病部位多呈水渍状病斑，表面生白色绢丝状
菌丝，土壤湿度大时在病部产生白色菌丝覆盖病部和四
周地面，呈辐射状，边缘尤为明显，发病后期，在白色绢
丝状菌丝体上产生许多油菜籽状菌核。随着病情的加
重，根茎部皮层腐烂，呈纤维状，地上茎叶萎蔫枯死。
２．２　病原菌的分离与致病性测定
将采集回来的病组织中分离出来的白绢病原菌，经
纯化培养后回接到药水苏的健康叶片及茎秆上，在２８℃
温度下培养，培养过程中加水保湿。接种后的第３天开
始发病，菌斑扩展快，白色菌丝紧贴于组织表面，呈放射
状（图１），接种１０ｄ后产生白色菌核，后渐变成棕褐色菜
籽状小菌核（图２），其症状特点与田间病株症状相似，对
照植物上无发病症状。从接种的病组织分离的病原菌
与田间发病组织分离的病原菌形态一致。
图１　病原菌接种后的第４天
Ｆｉｇ．１　Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ａｔ　４ｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
２．３　病原菌的培养性状及形态特点
药水苏白绢病在ＰＤＡ培养基上，菌丝体白色绢丝
状，呈放射状扩展（图３），生长速度快。培养７ｄ后形成
油菜籽状菌核，菌核椭圆形或球形，外观初呈白色，后略带
黄色至茶褐色或棕褐色，直径０．５～１．０ｍｍ，大的３ｍｍ，
６２１
北方园艺２０１３（０５）：１２５～１２８ ·植物保护·
图２　病原菌接种后的第１１天
Ｆｉｇ．２　Ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ａｔ　１１ｄａｙｓ　ａｆｔｅｒ　ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ
平滑而有光泽。镜检观察，菌丝无色透明，呈空心管状
结构，具隔膜（图４），有锁状联合现象（图５）；菌核切片后
观察，表面细胞小而色深，内部细胞大而色浅或无色，菌
核外层包以近圆形或多角形，排列紧密的的拟薄壁组织
（图６）。病原菌的上述特征与罗氏白绢小菌核菌
（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　ｒｏｌｆｓｉ　Ｓａｃｃ．）相同。
图３　病原菌在ＰＤＡ上的菌落特征
Ｆｉｇ．３　Ｃｏｌｏｎｙ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｎ　ＰＤＡ　ｍｅｄｉａ
图４　有隔膜的病原菌菌丝
Ｆｉｇ．４　Ｄｉａｐｈｒａｇｍａｔｉｃ　ｍｙｃｅｌｉａ
２．４　ｒＤＮＡ　ＩＴＳ区的ＰＣＲ扩增及序列分析
以提取的药水苏白绢病菌的ＤＮＡ为模板，用ｒＤＮＡ
的ＩＴＳ区段通用引物ＩＴＳ１与ＩＴＳ４进行扩增，并对此片
段进行序列测定，获得长度为６４０ｂｐ的特异性片段。将
产物测得的序列在ＧｅｎＢａｎｋ中进行ＢＬＡＳＴ比对，结果
显示，该序列与ＧｅｎＢａｎｋ中多个Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ 菌株
ＩＴＳ序列的同源性最高，为１００％（表１）。结合病原菌
ｒＤＮＡ的ＩＴＳ序列分析结果和形态特征，将其鉴定为罗
氏白绢小菌核菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　ｒｏｌｆｓｉ　Ｓａｃｃ．），属半知菌亚
门，丝孢纲，无孢目，小菌核菌属真菌。有性态为
图５　菌丝形成的锁状联合
Ｆｉｇ．５　Ｃｌａｍｐ　ｃｏｍｍｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｙｃｅｌｉａ
图６　病原菌菌核切面显微形态
Ｆｉｇ．６　Ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎｓ　ｓｃｌｅｒｏｔｉａ　ｓｅｃｔｉｏｎ　ｍｉｃｒｏｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
［Ｐｅｌｉｃｕｌａｒｉａ　ｒｏｌｆｓｉ （Ｓａｃｃ．）Ｗｅｓｔ．］，现以罗氏阿太菌
［Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ （Ｃｕｒｉｚ）Ｔｕ　＆Ｋｉｍｂｒｏｕｇｈ］为大家所公
认［７］，戴芳澜［８］称之为齐整小核菌。
表１ 药水苏白绢病病原菌ＩＴＳ序列与
ＧｅｎＢａｎｋ中相似序列的比较
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＩＴＳ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ａｎｄ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｉｎ　ＧｅｎＢａｎｋ
Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　 Ｄｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｍａｘ　ｓｃｏｒｅ　Ｔｏｔａｌ　ｓｃｏｒｅ　Ｑｕｅｒｙ　ｃｏｖｅｒａｑｅ　Ｅ　ｖａｌｕｅ　Ｍａｘ　ｉｄｅｎｔ
ＪＮ２４１５６３．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５６１．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５５９．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５５８．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５５７．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５５６．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５５５．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ２４１５５４．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＪＮ０１７１９９．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
ＨＱ８９５９６６．１　Ａｔｈｅｌｉａ　ｒｏｌｆｓｉ　 ２９６　 ２９６　 １００　 ３Ｅ－７７　 １００
２．５　木霉对病原菌的抑制效果
通过白绢病病原菌与木霉的对峙培养试验，观察木
霉对病菌的侵入及占领营养空间情况。对峙培养第３
天哈茨木霉菌即对药水苏白绢病菌表现出抑制作用，培
养后的第５天在哈茨木霉与病原菌的交界处形成较明
显黄色抑菌带（图７），挑取抑菌带处的菌丝镜检发现，木
霉孢子与病菌菌丝共存于这一区域，此处的病原菌被木
霉菌以缠绕方式寄生于病原菌丝上，同时出现菌丝断裂
（图８）、菌丝消解，细胞质变稀薄等现象。由表２可以看
出，不同木霉菌株对药水苏白绢病菌的抑制作用存在显
７２１
·植物保护· 北方园艺２０１３（０５）：１２５～１２８
　　　
图７　哈茨木霉与病原菌的对峙
注：Ａ：哈茨木霉Ｈ２；Ｂ：病原菌。
Ｆｉｇ．７　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ　ａｎｄ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ
ｃｏｎｆｒｏｎｔａｔｉｏｎ　ｃｕｌｔｕｒｅ
著差异，哈茨木霉Ｈ２对病原菌的抑菌作用最强，抑菌率
为８６．２７％，拮抗系数为Ⅱ，其次为哈茨木霉Ｈ１、哈茨木
霉Ｈ５、绿色木霉Ｌ，而康氏木霉抑菌效果最差，仅为
５１．２２％，拮抗系数为Ⅲ。
图８　病原菌丝断裂
Ｆｉｇ．８　Ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｆｒａｃｔｕｒｅ
　　表２　 不同木霉菌对药水苏白绢病菌的拮抗效果
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ
木霉菌株
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｔｒａｉｎ
哈茨木霉Ｈ５
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ Ｈ５
哈茨木霉Ｈ１
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ Ｈ１
哈茨木霉Ｈ２
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ Ｈ２
康氏木霉Ｋ
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｋｏｎｉｎｇｉ　Ｋ
绿色木霉Ｌ
Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｖｉｒｉｄｅ　Ｌ
拮抗系数 Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｉｎｄｅｘ Ⅱ Ⅱ Ⅱ Ⅲ Ⅲ
抑菌率Ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｉｏ／％ ７４．５６ｂ ７５．３１ｂ ８６．２７ａ ５１．２２ｄ ６３．５９ｃ
　　注：数据后不同字母为差异显著性分析（ＳＡＳ，Ｐ＜０．０５）。
Ｎｏｔｅ：Ｄａｔａ　ａｆｔｅｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ（Ｆｏｌｏｗｅｄ　ｂｙ　ＳＡＳ，Ｐ＜０．０５）．
３　结论与讨论
综合药水苏白绢病症状观察、致病性测定、病原形
态特征观察及ｒＤＮＡ的ＩＴＳ序列分析结果，确定引起药
水苏白绢病的病原菌为罗氏白绢小菌核菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ
ｒｏｌｆｓｉ　Ｓａｃｃ．）。木霉对药水苏白绢病的对峙试验中，哈
茨木霉Ｈ２对病原菌的拮抗作用及抑菌率最为理想，在
显微镜检结果中发现病原菌被该木霉以缠绕方式寄生，
出现菌丝消解，菌丝断裂，细胞质变稀薄等现象，且在重
复试验中对病原菌的抑制作用相对持续平稳。由于拮
抗微生物在田间的防治效果会受许多因素的影响，木霉
菌株对药水苏白绢病的防治效果能否与室内试验表现
一致，还有待探讨。
参考文献
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Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　Ｓｔｒａｉｎ
ＬＩＵ　Ｗｅｉ，ＬＡＮ　Ｚｕ－ｚａｉ，ＹＥ　Ｙｕｎ－ｆｅｎｇ，ＪＩＡＮＧ　Ｎｉ，ＬＩＵ　Ｌｉ－ｈｕｉ
（Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｂｏｔａｎｉｃａｌ　Ｇａｒｄｅｎ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　Ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｇｅｎｅｔｉｃ　Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ，
Ｇｕａｎｇｘｉ　５３００２３）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｄｉｓｅａｓｅｄ　ｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｂｅｔｏｎｉｃａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　ａｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ
ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ　ｔｅｓｔ；ｔｈｅ　ｔｙｐｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｗｅｒｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｗａｙ　ｏｆ　ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＩＴＳ　ｒＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ；ｔｈｅ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｂｙ　ｃｏｎｆｒｏｎｔｉｎｇ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＰＤＡ　ｐｌａｔｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ
ｐａｔｈｏｇｅｎ　ｏｆ　ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉｏｓｅ　ｏｎ　Ｂｅｔｏｎｉｃａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　ｒｏｌｆｓｉ　Ｓａｃｃ；ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｆｉｖｅ　ｔｅｓｔｅｄ
ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｔｒａｉｎｓ，Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｈａｒｚｉａｎｕｍ　Ｈ２ｈａｄ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ　ｆｏｒ　ｃｏｎｔｒｏｌｉｎｇ　ｔｈｅ　ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉｏｓｅ　ｏｎ
Ｂｅｔｏｎｉｃａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ，ｉｔｓ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｗｅｒｅⅡｌｅｖｅｌ　ａｎｄ　８６．２７％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂｅｔｏｎｉｃａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ；Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ　ｒｏｌｆｓｉ；ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐａｔｈｏｇｅｎ；ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｉｃ　ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ　ｓｔｒａｉｎ；ｓｃｒｅｅｎ
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