全 文 ：药理效应法评价藏药湿生扁蕾的提取工艺
景　明1 ,陈正君 1 ,罗永皎 1 ,李季文2
(1.甘肃中医学院 ,甘肃 兰州 730000;2.甘肃省中医院 ,甘肃 兰州 730050)
　　摘要　目的:研究藏药湿生扁蕾的提取工艺。方法:采用小鼠耳廓二甲苯致炎 、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀 、大
鼠干酵母致热 、小鼠热板致痛及电刺激致痛试验 , 观察湿生扁蕾不同工艺提取物对抗炎 、镇痛 、解热作用的影响。
结果:湿生扁蕾不同工艺提取物均有抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀 、角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的作用;水提取物 、乙
醇提取物和微波提取物均可提高小鼠热板致痛的痛阈 ,但超临界 CO2提取物镇痛效果不明显;乙醇提取物和微波
提取物对小鼠电刺激致痛显示明显的镇痛作用 ,水提取物和超临界 CO
2
提取物镇痛效果不明显;湿生扁蕾不同工
艺提取物对干酵母所致大鼠发热均有明显的解热作用。 结论:湿生扁蕾乙醇提取物的抗炎 、镇痛 、解热作用显著 ,
其药理效应明显优于水提 、超临界 CO2提取及微波提取。
关键词　药理效应;湿生扁蕾;提取工艺
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)03-0459-04
收稿日期:2009-11-16基金项目:甘肃省科技厅科技支撑计划项目(0804NKCA119-08)作者简介:景明(1963-),男,教授 ,主要从事中药新药的研究开发;Tel:0931-8765459, E-mail:jm@gszy.edu.cn。
　　湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物湿生扁蕾 Gen-
tianopsispaludosa(Hook.f.)Ma的干燥全草 ,藏药名
为机合斗 ,具有清热解毒 、止痛 、利湿消黄 、健脾止泻
等功效 ,用于治疗肝炎 、胆囊炎 、热病发斑 、泄泻 、肠
胃炎 、结膜炎 、急性肾盂肾炎 、疥疮肿毒等症 ,藏医用
全草治疗流行性感冒及胆病引起的发烧 〔1, 2〕。对湿
生扁蕾抑菌作用的研究已有报道 〔3, 4〕 ,但药理效应
法评价湿生扁蕾提取工艺的研究尚未见报道。本研
究通过对湿生扁蕾不同工艺提取物抗炎 、镇痛 、解热
作用的研究 ,优选湿生扁蕾的提取方法 ,为其开发和
利用提供参考依据。
1　材料
1.1　药品与试剂 　角叉菜胶 (Sigma公司 , 批号
G1023-25G);二甲苯(天津市德恩化学试剂有限公
司 ,批号 20070914);干酵母(湖北安琪干酵母股份
有限公司 ,批号 060105);戊巴比妥钠(北京化学试
剂公司 ,批号 060222);羧甲基纤维素钠(山东聊城
阿华制药有限公司 ,批号 060721);导电胶(甘肃中
医学院科研实验中心配制);氯化钠 、淀粉 、甘油均
为化学纯试剂;湿生扁蕾药材经甘肃省药品检验所
宋平顺主任药师鉴定为龙胆科扁蕾属植物湿生扁蕾
Gentianopsispaludosa(Hook.f.)Ma的干燥全草。
1.2　仪器　JL-D药理生理实验多用仪(上海益联
科教设备有限公司);RCY-2热板测痛仪(上海康为
医疗科技发展有限公司);HWC3L-A微波萃取设备
(天水华园制药设备有限公司);HA121-50-02超临
界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司);
FY130药物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司)。
1.3　动物　昆明种小鼠 ,体质量(20±2)g,雌雄兼
用;Wistar大鼠 ,体质量(200±20)g,雌雄各半 ,均由
甘肃中医学院实验动物中心提供 ,合格证号 SCXK
(甘)2004-0006;动物颗粒饲料由北京科奥协力饲料
有限公司提供 。
1.4　干酵母混悬液的制备　称取干酵母 10 g,置
于乳钵中 ,逐渐加入蒸馏水研磨为均匀的悬浆 ,最后
定容为 50 mL,此液于临用前配制。
1.5　导电胶的制备 　称取氯化钠 175 g,淀粉 40
g,甘油 25g,加水至 500mL,超声处理 10 min,此液
于临用前配制 。
1.6　湿生扁蕾提取物(GTP)的制备　将湿生扁蕾
用药用粉碎机粉碎成 60目的粉末 。水提:称取药材
粉末 ,加 10倍量水 ,煎煮提取 2次 ,每次 1.5 h,滤
过 ,合并滤液 ,浓缩成浸膏(GTP1), 备用。超临界
CO2提取:称取药材粉末 ,在萃取压力 25 MPa、解析
压力 8 MPa、萃取温度 45 ℃、CO2体积流量 20 mL/
min的条件下 ,萃取 1.5 h,收集萃取物(GTP2),备
用。乙醇提取:称取药材粉末 ,加 10倍量 70%乙
醇 ,加热回流提取 2次 ,每次 1.5h,滤过 ,合并滤液 ,
减压回收乙醇后浓缩成浸膏(GTP3),备用 。微波提
取:称取药材粉末 ,加 10倍量 70%乙醇 ,微波萃取 2
次 ,每次用功率为 500W的微波于 80 ℃辐射 3min,
滤过 , 合并滤液 , 减压回收乙醇后浓缩成浸膏
(GTP4),备用。 GTP1、GTP2、GTP3、GTP4在给药前
用 0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成 1.5g原药
材 /mL的混悬液 ,备用 。
2　方法 〔5, 6〕与结果
2.1　GTP对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响　取小鼠
50只 ,雌雄各半 ,随机分为 5组 ,每组 10只 ,分别为
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DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2010.03.009
空白对照组 、水提取物组 、CO2提取物组 、乙醇提取
物和微波提取物组。给药前将各供试物分别超声处
理 10min使充分混悬 ,各组小鼠右耳涂药 1次 ,每
次 0.2 mL(15 g原药材 /kg), 对照组涂以等容量
0.5%CMC-Na溶液 ,连续 3 d,末次给药 30 min后 ,
各给药组用蒸馏水洗去耳廓上的药物 ,并于右耳的
内侧均匀涂以二甲苯 , 每只 0.05 mL,左耳作为对
照 。 30 min后处死动物 ,用直径 8 mm的打孔器于
左右耳对称处打下耳片 ,分别称重 ,计算各组动物的
肿胀度 ,并按下式计算肿胀抑制率。 GTP3能够显著
抑制小鼠耳肿胀 (P<0.01), GTP1、GTP2和 GTP4
能够抑制小鼠耳肿胀(P<0.05),结果见表 1。
抑制率(%)=对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度对照组平均肿胀度 ×100%
2.2　GTP对角叉菜胶致大鼠足肿胀的影响　取大
鼠 50只 ,随机分为 5组 ,每组 10只 ,分别为空白对
照组 、水提取物组 、CO2提取物组 、乙醇提取物组和
微波提取物组 。各组大鼠分别灌胃 GTP1、GTP2、
GTP3、GTP4,每只 2 mL(15g原药材 /kg),对照组给
予等容量 0.5%CMC-Na溶液 ,连续给药 4 d,末次给
药后用玻璃容器法测定大鼠右后肢足跖体积 , 1 h
后每鼠右后肢足跖掌皮下注射 1%角叉菜胶溶液
0.1 mL致炎 ,分别于致炎后 1、2、3、4、5、6 h再用玻
璃容器法测定致炎大鼠右后肢足跖体积 ,以各鼠致
炎前后体积的差值为肿胀度。 GTP3和 GTP4均显
著抑制角叉菜胶致炎后不同时间大鼠足跖肿胀(P
<0.01或 P<0.05);GTP1和 GTP2仅显著抑制角
叉菜胶致炎后 2 h的足跖肿胀 (P<0.05),结果见
表 2。
　表 1　　　　湿生扁蕾提取物对二甲苯致小鼠
耳肿胀的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(g/kg) 肿胀度/mg 抑制率/% P值
对照组 - 57.75±2.83 - -
GTP1 15 53.46±2.44 7.43 ＊
GTP2 15 54.18±6.37 6.24 ＊
GTP3 15 51.07±3.78 11.57 ＊＊
GTP4 15 52.23±7.38 9.56 ＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
　　表 2 湿生扁蕾提取物对大鼠足肿胀的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(g/kg)
致炎后不同时间的足跖肿胀度 /mL
1 h 2 h 3h 4 h 5 h 6h
对照组 - 0.58±0.16 0.62±0.15 0.65±0.18 0.62±0.17 0.61±0.13 0.59±0.17
GTP1 15 0.42±0.13 0.44±0.19＊ 0.47±0.16 0.53±0.11 0.55±0.18 0.56±0.14
GTP2 15 0.44±0.15 0.47±0.09＊ 0.49±0.12 0.56±0.13 0.57±0.12 0.58±0.16
GTP3 15 0.38±0.10＊＊ 0.39±0.09＊＊ 0.44±0.11＊＊ 0.43±0.08＊＊ 0.44±0.15＊＊ 0.43±0.18＊＊
GTP4 15 0.39±0.19＊ 0.40±0.15＊ 0.45±0.18＊ 0.42±0.17＊ 0.44±0.14＊ 0.45±0.13＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
2.3　GTP对小鼠热板法致痛的影响　选择痛阈
值在 10 s～ 30 s的雌性小鼠 50只 ,随机分为 5
组 ,每组 10只 ,分别为空白对照组 、水提取物组 、
CO2提取物组 、乙醇提取物组和微波提取物组 。
重复测定各组小鼠的痛阈值 , 作为该鼠给药前痛
阈值。各组分别灌胃给药 ,每只 0.2 mL(15 g原药
材 /kg),对照组给予等容量 0.5%CMC-Na溶液 ,给
药后 15、30、45、60 min每次将小鼠 1只放在(55±
0.5)℃热板测定仪上 ,从放入至出现舔后足所需时
间(s)作为该鼠的痛阈值 ,并按下式计算痛阈提高
率。 GTP3能够明显提高小鼠痛阈(P<0.01或 P<
0.05), GTP1和 GTP4均可提高小鼠痛阈 (P<
0.05),但 GTP2镇痛效果不明显 (P>0.05),结果
见表 3。
痛阈提高率(%)=给药后平均痛阈值 -给药前平均痛阈值给药前平均痛阈值 ×100%
　　表 3 湿生扁蕾提取物对小鼠热板致痛的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(g/kg) 给药前痛阈 /s
给药后不同时间痛阈(s)和提高率(%)
15min 30 min 45 min 60 min
对照组 - 18.5±1.2 18.6±1.8(0.5) 18.8±2.1(1.6) 18.5±1.6(0) 18.5±2.6(0)
GTP1 15 18.3±1.8 20.5±1.4＊(10.7) 21.4±1.6＊(14.5) 19.8±2.3(7.6) 19.4±3.2(5.7)
GTP2 15 18.4±1.4 18.5±1.4(10.5) 18.6±2.2(1.1) 19.3±1.2(4.7) 18.7±1.9(1.6)
GTP3 15 18.1±1.4 24.6±1.1＊＊(26.4) 25.9±1.3＊＊(30.1) 21.7±1.8＊＊(16.6) 21.2±2.5＊(14.6)
GTP4 15 18.2±1.6 22.7±1.3＊(18.0) 23.8±1.5＊(23.4) 20.6±1.9＊(12.8) 19.8±2.1(10.3)
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01
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2.4　GTP对小鼠电刺激致痛的影响　用 75%乙醇
擦洗鼠尾 ,涂以导电胶 ,置刺激电极于小鼠尾部 ,电
极板涂 5%盐水 ,用药理生理多用仪进行电刺激(电
压 10V,频率 1Hz,波宽 10ms,刺激时间 1/25s),连
续刺激 3次 ,每次间隔 5 min, 3次均出现嘶叫反应
的为合格小鼠。取合格小鼠 50只 ,随机分为 5组 ,
每组 10只 ,分别为空白对照组 、水提取物组 、CO2提
取物组 、乙醇提取物组和微波提取物组 。各组灌胃
给药 ,每只 0.2 mL(15g原药材 /kg),对照组给予等
容量 0.5%CMC-Na溶液 , 于给药后 20、 40、 60、 90
min重复电刺激小鼠 ,连续两次刺激均不出现嘶叫
反应时 ,表明药物有镇痛效果 ,并按下式计算镇痛百
分率。 GTP3、 GTP4显示明显的镇痛作用 (P<
0.05), 而 GTP1、GTP2镇痛效果均不明显 (P>
0.05),结果见表 4。
镇痛率(%)=镇痛鼠数总鼠数 ×100%
2.5　GTP对干酵母致大鼠发热的影响　实验前 3
d每日测大鼠体温 1次 ,挑选体温变化在 37 ～ 38.5
℃,且自身体温变化低于 0.3 ℃的雄性大鼠 60只 。
实验当日每 1 h测体温 1次 ,连续测 3次 ,取 3次体
温的平均值作为基础体温 ,动物按 3 mL/kg背部皮
下注射 10%干酵母混悬液 。 3 h后体温开始上升 ,
选取 4 h后体温上升高于 1 ℃左右的大鼠 50只 ,随
机分为 5组 ,每组 10只 ,分别为空白对照组 、水提取
物组 、CO2提取物组 、乙醇提取物组和微波提取物
组。各组分别灌胃 GTP,每只 2 mL(15g原药材 /
kg),对照组给予等容量 0.5%CMC-Na溶液。给药
后每隔 30 min测量 1次肛温 ,观察体温变化情况。
GTP1、GTP2、GTP3、GTP4对干酵母所致大鼠发热均
有显著的解热作用(P<0.05),结果见表 5。
　表 4　　　　湿生扁蕾提取物对小鼠电刺激
致痛的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(g/kg)
给药后不同时间的镇痛率 /%
20 min 40 min 60 min 90 min
对照组 - 0 0 0 0
GTP1 15 10 10 10 10
GTP2 15 0 10 0 0
GTP3 15 40＊ 60＊ 50＊ 40＊
GTP4 15 30＊ 50＊ 40＊ 30＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05
　　表 5 湿生扁蕾提取物对大鼠解热作用的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(g/kg) 正常体温/℃ 发热体温/℃
给药后不同时间(min)的体温变化(℃)
30 60 90 120
对照组 - 37.34±0.8 38.46±1.2 38.44±1.7 38.58±0.8 38.62±0.6 38.83±0.7
GTP1 15 37.31±0.9 38.46±1.3 38.46±1.3 38.12±1.4 37.39±1.8＊ 37.36±2.3＊
GTP2 15 37.25±0.5 38.42±1.4 38.46±1.4 38.28±0.7 37.71±1.5＊ 37.53±1.6＊
GTP3 15 37.21±1.2 38.53±0.9 38.14±1.8 37.78±1.3＊ 37.46±3.1＊ 37.35±2.4＊
GTP4 15 37.18±0.7 38.48±1.3 38.36±1.4 38.10±1.6 37.19±2.4＊ 37.20±1.7＊
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05
2.6　数据处理　各组实验数据均以 x±s表示 ,采
用统计软件 SPSS13.0进行单因素方差分析 ,对小
鼠电刺激致痛采用卡方检验 , P<0.05有统计学意
义 。
3　讨论
湿生扁蕾在藏药属于藏茵陈类 ,属蒂达系列机
合斗 ,目前在藏医中广泛用于治疗和预防急慢性肝
炎 ,所含的化学成分包括呫吨酮类 、黄酮类 、三萜类 、
三十烷醇 、胡萝卜苷及 β-谷甾醇等 ,活性成分主要
有齐墩果酸 、熊果酸 、1, 7-二羟基-3, 8-二甲氧基呫吨
酮 、木犀草素等〔7〕 , 其中呫吨酮类 、黄酮类具有抗
炎 、镇痛 、解热 、抗腹泻作用 〔8, 9〕。虽然湿生扁蕾在
民间的药用价值很大 ,但有关湿生扁蕾的研究报道
并不多 ,并且多局限于成分分析和对其抑菌作用的
研究。因此 ,有必要通过药理效应研究其提取工艺 ,
为湿生扁蕾的新产品开发提供科学依据 。
参 考 文 献
[ 1] 张宝琛 , 甄润德 ,胡柏林 , 等.湿生扁蕾的化学成分研究
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菌作用初探 [ J] .天然产物研究与开发 , 2005, 17(5):
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的测定 [ J] .青海师范大学学报(自然科学版), 2004, 22
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[ 5] 陈奇 .中药药理研究方法学 [ M] .北京:人民卫生出版
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飞龙掌血多糖提取工艺研究
田春莲 ,文赤夫 ,吴文滔
(吉首大学生物资源与环境科学学院 ,湖南 吉首 416000)
　　摘要　目的:研究飞龙掌血多糖的最佳提取工艺及组分。方法:采用单因素实验分别考察了提取时间 、提取温
度 、料液比及提取次数对飞龙掌血多糖提取率的影响 , 通过正交试验优化提取工艺条件;粗多糖纯化后用薄层色谱
法进行组分分析。结果:飞龙掌血多糖最佳浸提工艺为 A1B2C3 , 即提取时间 2h, 温度 70 ℃, 料液比 1∶20(g/mL);
方差分析表明浸提温度和料液比对多糖提取有显著影响;粗多糖得率为 3.96%,经初步纯化后得率为 1.84%;薄层
色谱显示飞龙掌血多糖含有 D-半乳糖和 D-葡萄糖。结论:本实验为大规模工业生产中用浸提法提取飞龙掌血多
糖提供了依据。
关键词　飞龙掌血;多糖;提取条件;薄层层析
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2010)03-0462-03
收稿日期:2009-10-22基金项目:林产化工工程湖南省重点实验室开放基金资助项目(JDZ200906)作者简介:田春莲(1970-), 女 , 土家族 , 副教授 , 硕士 ,研究方向:资源植物保护与利用;Tel:0743-8563792, E-mail:tianchunlian1970@
163.com。
　　飞龙掌血别名勒沟 、血见飞 、散血丹 ,为芸香科
植物飞龙掌血 [ Toddaliaasiatica(L.)Lam]的根 ,木
质藤本 。主产湖南 、广西 、陕西 、四川 、贵州等地 ,非
洲东部和亚洲东南部及南部均有分布 。祖国医学认
为其具有舒筋通络 、活血散瘀 、消肿止痛的作用 ,常
用于治疗风湿痹痛 、胃痛 、痛经 、跌打损伤 〔1〕。现代
医学研究表明 ,其具有镇痛抗炎 、抗心肌缺血 、治疗
家畜胃肠炎及抑菌等作用 〔2-5〕 ,但对飞龙掌血多糖的
提取工艺条件未曾进行系统研究 ,本实验以湘西地
区丰富的飞龙掌血为材料 ,探讨其多糖提取的最佳
工艺 ,为合理开发利用飞龙掌血资源提供理论依据 。
1　仪器 、试剂与材料
1.1　仪器　723A紫外可见分光光度计 ,上海精密
科学仪器有限公司;GZX-DH-40×45电热恒温干燥
箱 ,上海跃进医疗器械厂;BCD-201F/HC容声冰箱;
电热恒温水浴箱 ,北京市医疗设备厂;RE52-99旋转
蒸发仪 ,上海亚荣生化仪器厂;FA2004分析天平 ,上
海精密科学仪器有限公司;LDZ5-2低速离心机 ,北
京医用离心厂。
1.2　试剂与材料　乙醇 、乙醚 、蒽酮 、甘露糖 、L-
(+)鼠李糖 、D-果糖 、D-半乳糖 、D-葡萄糖等均为国
产 AR级 ,实验用水为去离子水。飞龙掌血采自张
家界 ,经吉首大学廖博儒研究员鉴定。
2　方法
2.1　多糖含量测定　用蒽酮试剂显色 ,紫外分光
光度法测定样品中多糖的含量〔6〕。
2.1.1　标准曲线制备:称取 105 ℃真空干燥至恒
重的葡萄糖 100.20mg,配成 1.00mg/mL葡萄糖水
溶液 。各取 0.5、1、1.5、2、2.5、3 mL于 6个 25 mL
容量瓶中 ,用蒸馏水定容至刻度。各取 1mL于刻度
试管 ,冰浴中加入 5mL蒽酮试剂 ,沸水浴 10min,冷
却后测 A624 nm,以吸光度 A为纵坐标 ,葡萄糖浓度 C
为横坐标进行线性回归 , 得方程:A=5.8929C-
0.002(r=0.9998)。
2.1.2　样品测定:取样品溶液适量 ,按 “2.1.1”项
下方法测定糖含量 ,按公式:多糖得率(%)=[粗多
糖重量(g)/原料重量(g)] ×100%,计算粗多糖的
得率 〔7〕。
2.2　多糖提取　称取适量飞龙掌血粉末 ,加入一
定量的提取剂进行浸提 ,以提取剂与原料质量比 、提
取时间 、提取次数及提取温度等为因素进行考察 ,在
单因素实验的基础上进行正交试验 ,以优化提取参
数。
2.3　多糖的纯化及组分分析
·462· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 33卷第 3期 2010年 3月