全 文 ：成分疗效不明确。因此本实验采用不同的提取方法获得水
提多糖和碱提多糖，为海螵蛸资源的深入研究及中成药的开
发提供一定的理论基础。
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维药新塔花中胡薄荷酮的鉴别及定量测定
张海英， 李 伟， 薛 洁*
(新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000)
收稿日期:2011-03-29
作者简介:张海英(1973—) ，女，副主任中药师，讲师，研究方向:中药复方新制剂研发。Tel:(0991)5814127，E-mail:zzhhyy2583@ 126． com
* 通信作者:薛 洁(1962—) ，女，主任中药师，教授，研究方向:中药复方新制剂研发。Tel:(0991)4365256
摘要:目的 对新塔花中胡薄荷酮的定性鉴别及定量测定方法进行研究。方法 采用薄层色谱法鉴别新塔花;采用紫
外-可见分光光度法测定新塔花挥发油中总萜类成分;采用高效液相色谱法测定新塔花胡中薄荷酮，用 SHIMADZU VP-
ODS RpC18(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱，柱温:30 ℃;流动相为甲醇-水(80 ∶ 20) ;体积流量 1． 0 mL /min;检测波长
252 nm;进样量 10 μL。结果 薄层色谱法可检出胡薄荷酮;在挥发油总萜类成分测定中，胡薄荷酮进样量在 0． 050 25
mg ～ 0． 251 3 mg之间线性关系良好，r = 0． 999 3(n = 5) ，平均回收率为 101． 2%，RSD为 1． 86%(n = 6) ;用 HPLC法测定
胡薄荷酮，胡薄荷酮质量浓度在 0． 056 7 mg /mL ～ 0． 283 4 mg /mL之间线性关系良好，r = 0． 999 1(n = 5) ，平均回收率为
99． 5%，RSD为 1． 11%(n = 6)。结论 用该法对新塔花中胡薄荷酮进行质量控制，操作简单、重复性好、精密度高。
关键词:新塔花;胡薄荷酮;薄层色谱鉴别;分光光度法;总萜类成分;HPLC
中图分类号:R284． 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)09-1628-04
维药新塔花别名苏则，为唇形科新塔花属多年生草本植
物新塔花 Ziziphora clinopodioides Lam．的干燥地上部分。具
有强心利湿，理气化痰，消炎散结的功效，用于治疗心脏病，
气短多汗，水肿，咳嗽，气管炎，肺脓肿等疾病。喜生于向阳
的低山坡草地及砾石干旱坡地上，分布于新疆南北疆大部分
地区，全草含 0． 8% ～ 1． 5%的挥发油［1-2］。目前研究较多的
是采用 GC-MS 技术分析其挥发油成分，尚未见有系统的挥
发油成分定性、定量质量控制方法的报道［3］。本研究对新疆
乌鲁木齐市南山、新疆昌吉州吉木萨尔县、新疆阿勒泰地区
布尔津县 3 个不同产地新塔花药材中胡薄荷酮进行定性鉴
别和定量测定，为新塔花药材的质量控制及合理开发利用提
供试验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Waters2695 高效液相色谱仪(美国) ;紫外-可见
光光度计 Cintra-20(澳大利亚) ;AG-135 电子天平(瑞士) ;
SK3300LH超声清洗器(上海科导超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 新塔花于 2008 年 6 月 4 日—2008 年 7 月 20 日
分别采自新疆乌鲁木齐市南山、新疆昌吉州吉木萨尔县、新
疆阿勒泰地区布尔津县，经新疆医科大学附属中医医院李永
和主任中药师鉴定为 Ziziphora clinopodioides Lam。
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中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2011
Vol． 33 No． 9
胡薄荷酮对照品(批号:111706-200602)购自中国药品
生物制品检定所;甲醇为色谱纯;香草醛、硫酸、冰醋酸、高氯
酸、石油醚(60 ～ 90 ℃)、乙酸乙酯等均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 薄层色谱鉴别 取新疆乌鲁木齐市南山、新疆昌吉州
吉木萨尔县、新疆阿勒泰地区布尔津县 3 个不同产地的新塔
花粗粉各 0． 8 g，加石油醚(60 ～ 90 ℃)20 mL，密塞，放置过
夜，时时振摇，滤过，滤液水浴挥干，残渣加 1 mL 石油醚(60
～ 90 ℃)使溶解，作为供试品溶液。另取胡薄荷酮对照品，
加石油醚(60 ～ 90 ℃)制成质量浓度 4 mg /mL 的溶液，作为
对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液、对照品
溶液各 10 μL，点于同一硅胶 G薄层板上，以石油醚(60 ～ 90
℃)-乙酸乙酯(37 ∶ 3)为展开剂，展开约 10 cm，取出，晾干，
喷以 1%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色
谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同紫红色斑点。
结果见图 1。
图 1 新塔花药材薄层色谱鉴别
1． 胡薄荷酮对照品 2． 新塔花(乌鲁木齐市南山)
3． 新塔花(吉木萨尔县) 4． 新塔花(布尔津县)
2． 2 新塔花挥发油的提取工艺研究
2． 2． 1 新塔花药材粉碎度的确定 取乌鲁木齐市南山的新
塔花药材，每 100 g供试品加水 500 mL置蒸馏烧瓶中，连接
挥发油提取器与回流冷凝管。照挥发油测定法(《中国药
典》2010 年版一部附录ⅩD)保持微沸 5 h，将提取得到的挥
发油用无水硫酸钠脱水，石油醚洗涤多次，低温挥净石油醚
后，得干燥的挥发油，计算新塔花药材中挥发油得率(%)。
试验表明，将新塔花药材粉碎成细粉，挥发油得率为0． 69%;
切制成约 5 mm 的短段进行提取，挥发油得率为1． 23%。故
决定将新塔花药材切制成 5 mm的短段。
2． 2． 2 加水倍数的确定 取新塔花 100 g，分别加水 10、12、
14、16、18 倍，提取挥发油。试验结果显示，加水 12 倍时挥发
油得率最高，为 1． 15%，所以决定加水倍数为 12 倍进行提
取。
2． 2． 3 浸泡时间的确定 取新塔花药材 100 g，分别加水浸
泡 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、6． 0、12． 0、24． 0 h，提取挥发油。试
验结果显示，药材浸泡 1 h 左右挥发油得率达到高值，浸泡
时间延长对挥发油得率无明显提高，故确定浸泡时间为 1 h。
2． 2． 4 不同产地挥发油的测定 取 3 个不同产地的新塔花
药材，剪成约 5 mm 短段，每份 100 g，加 12 倍量水浸泡 1． 0
h，提取挥发油，测定。挥发油得率测定结果见表 1。
表 1 不同产地新塔花挥发油得率、总萜量、
胡薄荷酮测定结果
产地
挥发油
得率 /%
总萜质量
分数 /%
胡薄荷酮
质量分数 /%
新疆乌鲁木齐市南山 1． 09 69． 24 0． 523
新疆吉木萨尔县 0． 92 64． 37 0． 469
新疆布尔津县 1． 24 70． 59 0． 570
2． 3 新塔花挥发油中总萜成分测定
2． 3． 1 对照品溶液的制备 精密称定胡薄荷酮对照品
10． 05 mg，置 100 mL 量瓶中，加无水乙醇至刻度，制成质量
浓度 0． 100 5 mg /mL的溶液，即得。
2． 3． 2 供试品溶液的制备 精密称取新塔花挥发油 0． 2 g，
置 100 mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，即得。
2． 3． 3 检测波长的确定 精密量取对照品溶液和供试品溶
液各 1 mL 于具塞试管中，按标准曲线制备项下操作，在紫
外-可见分光光度计上进行全波长扫描，对照品溶液最大吸
收波长为 536． 45 nm，供试品溶液最大吸收波长为 535． 46
nm。综合上述试验拟定(536 ± 2)nm为检测波长。
2． 3． 4 标准曲线的绘制 精密量取质量浓度 0． 100 5 mg /
mL的胡薄荷酮对照品溶液 0． 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0、2． 5 mL
于具塞试管中，加无水乙醇使至 3 mL，加入 5%香草醛-冰醋
酸溶液(新配制)1 mL，高氯酸 2． 5 mL，置 60 ℃水浴中加热
15 min，取出，冰浴冷却，加冰醋酸 5 mL，摇匀，放置 10 min，
以相应试剂为空白，按紫外-可见分光光度法(《中国药典》
2010 年版一部附录ⅤA)测定吸光度。
以进样量 X为横坐标，以吸光度 Y为纵坐标制作标准曲
线，得回归方程为:Y = 3． 355 6X + 0． 013 0(r = 0． 999 3) ，表
明胡薄荷酮对照品在 0． 050 25 ～ 0． 251 3 mg 范围内与吸光
度呈良好的线性关系。
2． 3． 5 稳定性考察 精密量取供试品溶液 1． 0 mL 置具塞
试管中，按标准曲线制备项下操作，加入冰醋酸后，每隔 10
min测定吸光度，测定至 1 h，结果表明 10 min为最佳显色时
间，RSD为 0． 80%。本试验选择加冰醋酸后放置 10 min 进
行测定。
2． 3． 6 精密度考察 取胡薄荷酮对照品溶液 1． 0 mL，按标
准曲线制备项下操作，在同一天内重复测定 5 次，连续测定
5 日，计算日内日间标准差。结果日内精密度 RSD 为
0． 47%，日间精密度 RSD为 1． 99%。结果表明，日内及日间
相对标准偏差均小于 2%，表明本法精密度良好。
2． 3． 7 重复性试验 取乌鲁木齐市南山新塔花挥发油供试
品溶液 6 份，按标准曲线制备项下操作，测定吸光度，结果
RSD为 1． 71%，说明本法比较稳定，重复性好。
2． 3． 8 回收率试验 取乌鲁木齐市南山新塔花挥发油供试
品溶液 0． 5 mL，共 6 份，精密称定，置具塞试管中，每份均加
入胡薄荷酮对照品溶液(0． 100 5 mg /mL)1 mL，按标准曲线
制备项下操作，测定吸光度，计算加样回收率。总萜类成分
平均回收率为 101． 2%，RSD为 1． 86%。
2． 3． 9 样品测定 本试验对新疆乌鲁木齐市南山、新疆昌
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吉州吉木萨尔县、新疆阿勒泰地区布尔津县 3 个不同产地的
新塔花挥发油进行了总萜类成分的测定，试验结果见表 1。
2． 4 胡薄荷酮测定
2． 4． 1 色谱条件与系统适用性试验 SHIMADZU VP-ODS
RpC18色谱柱(150 mm × 4． 6 mm，5 μm) ;柱温:30 ℃;以甲
醇-水(80 ∶ 20)为流动相;体积流量 1． 0 mL /min;检测波长
为 252 nm;进样量 10 μL;理论板数按胡薄荷酮峰计算应不
低于 3 000。
2． 4． 2 对照品溶液的制备 精密称定胡薄荷酮对照品
14． 17 mg，置 50 mL 量瓶中，加甲醇定容，制成质量浓度为
0． 283 4 mg /mL的溶液，即得。
2． 4． 3 供试品溶液的制备 精密称定新塔花药材粉未(二
号筛)0． 5 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇 10 mL，超声提取 20
min，滤过，滤渣和滤纸再加 10 mL甲醇，超声提取 20 min，滤
过，加适量甲醇洗涤 2 次，合并滤液和洗液，转移至 25 mL量
瓶中，加甲醇定容，即得［4-5］。
2． 4． 4 线性关系的考察 精密吸取质量浓度 0． 283 4 mg /
mL的胡薄荷酮对照品溶液 1、2、3、4、5 mL分别置于 5 mL量
瓶中，加甲醇至刻度，得质量浓度分别为 0． 056 7、0． 113 4、
0． 170 0、0． 226 7、0． 283 4 mg /mL的胡薄荷酮对照品溶液，注
入高效液相色谱仪，测定峰面积。
以进样质量浓度 X为横坐标，峰面积 Y为纵坐标制作标
准曲线，得回归方程为:Y = 2． 69 × 107X + 987． 25，r = 0． 998 9
(n = 5) ，结果表明胡薄荷酮在 0． 056 7 mg /mL ～ 0． 283 4 mg /
mL范围内，与峰面积成良好的线性关系。色谱图见图 2 ～3。
图 2 胡薄荷酮对照品溶液 HPLC图谱
图 3 供试品溶液 HPLC图谱
2． 4． 5 精密度试验 用质量浓度 0． 170 0 mg /mL的胡薄荷
酮对照品溶液同一天内连续测定 5 次，测定峰面积，计算得
胡薄荷酮峰面积 RSD为 1． 28%，表明本法精密度良好。
2． 4． 6 稳定性试验 取乌鲁木齐市南山新塔花供试品溶
液，每隔 2 h 进样，测定峰面积，计算得胡薄荷酮峰面积的
RSD为 1． 34%(n = 6) ，表明在 10h内稳定性良好。
2． 4． 7 重复性试验 取乌鲁木齐市南山新塔花样品 5 份，
按供试品溶液制备项下操作并测定，计算得胡薄荷酮的平均
质量为(0． 474 ± 0． 006 0)%，RSD 为 1． 26%，表明本方法重
复性良好。
2． 4． 8 回收率试验 精密称定 0． 4 g 乌鲁木齐市南山新塔
花样品，共 6 份，均精密加入胡薄荷酮对照品溶液(0． 170 0
mg /mL)10 mL，按供试品溶液制备项下操作并测定，计算加
样回收率，见表 2。胡薄荷酮平均回收率为 99． 5 %，RSD为
1． 11%，结果表明本方法准确可靠。
表 2 胡薄荷酮加样回收率试验结果
称样量
/ g
样品中原
有量 /mg
加入对照
品量 /mg
实际测得
量 /mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
0． 400 1 1． 896 5 1． 700 0 3． 586 1 99． 4
0． 399 8 1． 895 1 1． 700 0 3． 601 2 100． 4
0． 400 5 1． 898 4 1． 700 0 3． 568 7 98． 3 99． 5 1． 11
0． 400 9 1． 900 3 1． 700 0 3． 586 7 99． 2
0． 399 6 1． 894 1 1． 700 0 3． 614 2 101． 2
0． 400 6 1． 898 8 1． 700 0 3． 579 8 98． 9
2． 4． 9 样品测定 本试验对新疆乌鲁木齐市南山、新疆昌
吉州吉木萨尔县、新疆阿勒泰地区布尔津县 3 个不同产地的
新塔花药材进行了胡薄荷酮的高效液相测定，试验结果见表
1。
3 讨论
3． 1 检测指标的选择 文献报道，用气相-质谱联用(GC-
MS)方法分析新塔花挥发油化学成份，其中质量分数最高的
为胡薄荷酮(69． 60%) ，其次是薄荷酮(19． 94%)、乙酸-2，2-
二甲基环己酯(3． 10%)、辣薄荷烯酮(1． 84%)、顺-5-甲基-2-
(1-甲基乙基)环己酮(1． 35%) ，这 5 种成分占挥发油总量的
95． 83%［6］。胡薄荷酮可作为合成薄荷脑的原料及肥皂香
料，有很强的抗炎作用［7］。由此可见，对芳香新塔花的挥发
性成分胡薄荷酮的研究具有重要的应用前景。在《维吾尔药
志》中收载的新塔花药材项下只有显微鉴别和理化鉴别，方
法专属性不好，无法对药材进行质量控制，或科研报道多用
GC-MS方法对其挥发性成分进行分析，操作复杂，对仪器要
求较高。本研究以胡薄荷酮为对照品对新塔花药材进行薄
层色谱定性鉴别，采用紫外-可见光光度计和高效液相色谱
仪对其进行测定，操作简便，便于基层普及推广，能更好地控
制新塔花药材的质量。
3． 2 薄层色谱研究 在新塔花药材的薄层色谱鉴别中，参
照《中国药典》2010 年版一部荆芥药材项下的方法，由于胡
薄荷酮有很好的脂溶性，故采用石油醚为浸提溶剂，以石油
醚(60 ～ 90 ℃)-乙酸乙酯(37 ∶ 3)为展开剂，以 1%香草醛硫
酸溶液为显色剂，加热后显紫红色斑点，表明该方法专属性
好、可操作性强。
3． 3 总萜类成分的测定 芳香新塔花挥发油成分复杂，为
多种类型化合物的混合物，其中相对含量较多为萜类化合
物，萜类化合物是存在于植物界的一大类化合物，具有多种
生物活性，并且是某些中药的主要有效成分。故用紫外分光
光度法对新塔花挥发油中的总萜类成分进行测定，操作简
单，比较适合基层单位对新塔花药材进行质量控制。
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3． 4 胡薄荷酮的测定 在 HPLC法测定新塔花药材中胡薄
荷酮含量时，比较了加热回流与超声的方法进行提取，结果
表明加热回流提取时，挥发油受热易挥发而使测得的结果偏
低，故选用超声提取。采用超声提取法对胡薄荷酮进行了提
取 2 次和提取 3 次的考察，结果表明甲醇 2 次提取就已完
全，故确定提取次数为 2 次。流动相选择时比较了甲醇-水
(50 ∶ 50)、甲醇-水(60 ∶ 40)、甲醇-水(80 ∶ 20)。结果甲醇-
水(80 ∶ 20)这一条件下胡薄荷酮出峰时间适中，主峰的分离
度、理论板数、对称性等色谱参数均符合要求，故确定为本研
究的色谱条件。
经研究，3 个产地的新塔花药材中挥发油得率在 0． 92%
～ 1． 24%范围内变化，总萜类成分质量分数在 64． 37% ～
70． 59%范围内变化，胡薄荷酮量在 0． 469% ～ 0． 570%范围
内变化，考虑到药材质量受产地、采收季节、存放和加工等因
素的影响，其中挥发油、总萜类成分、胡薄荷酮量有较大的差
异，因此有必要做进一步研究。
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高效液相色谱法测定白及中肉桂酸
麻秀萍1， 杨清秋2， 蒋朝晖1， 陆崇玉1
(1．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002;2．安顺市西秀区人民医院，贵州 安顺 561000)
收稿日期:2010-08-09
作者简介:麻秀萍(1971—) ，女(苗族) ，副教授，从事分析化学和中药制剂分析的教学、科研工作。Tel:(0851)5601577，E-mail:mxp001130
@ sina． com． cn
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定白及中肉桂酸的方法。方法 采用 Shim-Pack VP-ODS(150 mm ×4． 6 mm，5 μm)
为色谱柱，柱温 40 ℃;以乙腈-0． 1%磷酸水溶液(29 ∶ 71)为流动相，检测波长为 285 nm。结果 肉桂酸进样量在
0． 023 2 ～ 0． 208 8 μg范围内呈良好线性关系(r = 0． 999 9) ;平均回收率为 99． 10%，RSD为 1． 83%。结论 建立的方法
操作简便、灵敏、准确，为白及药材质量控制标准的完善提供科学依据。
关键词:白及;肉桂酸;高效液相色谱法
中图分类号:R284． 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2011)09-1631-03
白及系兰科植物白及 Bletilla striata (Thunb．)Reichb． f．
的干燥块茎，多年生草本，分布于贵州、四川、湖南、江苏等
地，具收敛止血，消肿生肌之功效［1］，并收载于中国药典。临
床上广泛用于治疗咳血吐血，外伤出血疮疡肿毒，皮肤皲裂，
结核咳血，溃疡病出血等，疗效显著。白及含黏液质、对羟基
苯甲酸、原儿茶酸、肉桂酸(Cinnamic acid)、联苄类等化合
物［2-3］。目前，药典只收载其显微鉴定及薄层鉴别，未见有定
量测定的报道。李及等人曾对白及中的大黄素甲醚进行定
量测定，因其量甚微，没有检测的实际意义［4］。肉桂酸具有
抗细菌、真菌作用和升高白细胞作用，是本品的有效成分之
一［5］。故本实验采用 HLPC法测定白及中肉桂酸，并进行方
法学考察，结果表明建立的方法前处理简便，专属性强，测定
结果准确、稳定，为白及药材质量控制标准的完善提供科学
依据。
1 仪器和材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪(四元泵、真空脱气机、自
动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、化学工作站) ;肉桂酸
对照品(C9H8O2，编号 0786-9802，中国药品生物制品检定所
提供，供含量测定用) ，乙腈为色谱纯，水为纯净水，其他试剂
为分析纯。
白及药材采于贵州省关岭县，采集时间为 2007 年 11
月，经贵阳中医学院董立莎教授鉴定为药典品种兰科植物白
及 Bletilla striata(Thunb．)Reichb． f． 的新鲜块茎。鲜品洗
净，部分去皮，皮与去皮块茎分别低温烘干，皮为 1 号样品，
去皮块茎为 2 号样品;鲜品洗净，切片，烘干，为 3 号样品;鲜
品按药典的炮制方法，蒸至无白心，去皮，切片，烘干，为 4 号
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2011 年 9 月
第 33 卷 第 9 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
September 2011
Vol． 33 No． 9