全 文 ：HPLC法测定螃蟹甲中山栀苷甲酯的含量
赵斌 1, 2 ,董小萍 1 ,吴健明1
　第一作者　Tel:(028)80660683;E-mail:zhaobin3226794@ 163.com
(1.成都中医药大学药学院 , 成都 610075;2.中山火炬职业技术学院 ,中山 528436)
摘要　目的:采用反相高效液相色谱法测定螃蟹甲药材中山栀苷甲酯的含量。方法:采用 TIANHEC18色谱柱(200 mm×4.6
mm, 5 μm),乙腈 -水(12∶88)为流动相;流速 1.0 mL· min-1;检测波长为 236 nm。结果:山栀苷甲酯进样量在 0.052 ～ 0.52
μg范围内 ,与峰面积呈良好线性关系(r=0.9993);高 、中 、低 3个剂量组平均回收率分别为 99.5%, 100.6%, 98.1%;RSD分
别为 1.1%, 1.3%, 0.42%。结论:该方法简便 、准确 , 重复性好 ,可作为螃蟹甲药材的质量控制方法。
关键词:螃蟹甲;山栀苷甲酯;反相高效液相色谱法
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2009)02-0323-03
HPLCdeterminationofshanzhisidemethylesterin
PhlomisyounghusbandiMukerjee
ZHAOBin1, 2 , DONGXiao-ping1 , WUJian-ming1
(1.ColegeofPharmacy, ChengduUniversityofTCM, Chengdu610075, China;2.ZhongshanTorchPolytechnic, Zhongshan528436, China)
Abstract　Objective:TodevelopanRP-HPLCmethodforthedeterminationofshanzhisidemethylesterinPhlo-
misyounghusbandiMukerjee.Methods:TIANHEC18 column(200mm×4.6mm, 5μm)wasusedwithacetonitrile
-water(12∶88)asthemobilephaseataflowrateof1.0 mL· min-1 , thedetectivewavelengthwassetat236
nm.Results:Thelinearrangeofshanzhisidemethylesterwas0.052-0.52μg(r=0.9993).Inthehigh, medium,
lowconcentration, theaveragerecoveriesofshanzhisidemethylesterwere99.5%, 100.6%, 98.1% withcore-
spondingRSD1.1%, 1.3%, 0.42%.Conclusion:Themethodissimpleandaccuratewithgoodrepeatability,
whichcanbeusedforthequalitycontrolofPhlomisyounghusbandiMukerjee.
Keywords:PhlomisyounghusbandiMukerjee;shanzhisidemethylester;RP-HPLC
　　螃蟹甲为唇形科糙苏属多年生草本植物螃蟹甲
(PhlomisyounghusbandiMukerjee)的干燥块根 ,藏
药名为 “露木尔 ”。主要分布于西藏 、青海等省
区 [ 1] 。其味苦性凉 ,具有疏风清热 、散寒润喉 、止咳
化痰 、生肌敛疮等功效 ,现收载于卫生部药品标准藏
药第一册(1995版)[ 2] 。目前未见关于该药含量测
定方法的文献报道。山栀苷甲酯属于环戊烷型环烯
醚萜苷 ,在螃蟹甲药材中含量较大。本文采用高效
液相色谱法测定螃蟹甲中山栀苷甲酯的含量 ,可为
螃蟹甲药材的质量控制提供一定的科学依据。
1　仪器与试药
岛津 LC-10ATvp型高效液相色谱仪;KQ250B
超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司);Sartori-
usBP121S电子天平(德国赛多利斯公司);乙腈为
色谱纯(Merck公司),水为重蒸水 ,其余试剂均为分
析纯 。山栀苷甲酯对照品为本试验室自制(从螃蟹
甲药材中分离得到 ,通过1H-NMR及 13C-NMR数
据确定为山栀苷甲酯 ,经 HPLC面积归一化法计算 ,
纯度在 99%以上)。螃蟹甲对照药材由中国药品生
物制品检定所提供 ,批号为 121407-200401;螃蟹
甲药材由成都中医药大学鉴定教研室严铸云副教授
鉴别为唇形科糙苏属植物螃蟹甲 (Phlomisyoung-
husbandiMukerjee)的干燥块根 。
2　方法与结果
2.1　供试品溶液的制备　取螃蟹甲粉末(过四号
筛)0.5 g,精密称定 , 置具塞锥形瓶中 ,精密加入
50%甲醇 50 mL,称定重量 ,超声处理 (150 W, 40
kHz)30min,冷却 ,再称定重量 ,加 50%甲醇补足减
失的重量 ,摇匀 ,以 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取续滤
液 ,即得。
—323—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(2)DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.02.010
2.2　对照品溶液的制备　取山栀苷甲酯对照品适
量 ,精密称定 ,加 50%甲醇制成每 1 mL含 0.05 mg
的溶液 ,即得 。
2.3　色谱条件及系统适应性试验　色谱柱:TIAN-
HEC18(200mm×4.6 mm, 5 μm);流动相:乙腈 -
水(12∶88);检测波长:236 nm;流速 ∶1.0 mL·
min-1;柱温:30 ℃;进样量 5 μL。在该色谱条件
下 ,药材色谱图中山栀苷甲酯色谱峰峰形对称 ,与其
他成分达到基线分离 ,理论板数按山栀苷甲酯峰计
算不低于 5000。色谱图见图 1。
图 1　对照品(A)及 6号样品(B)色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A)andsample
No.6(B)
1.山栀苷甲酯(shanzhisidemethylester)
2.4　线性关系的考察　分别精密吸取(0.052mg·
mL-1)对照品溶液 1, 2.5, 5, 7.5 , 10 μL注入液相色
谱仪 ,测定 。以进样量 X(μg)为横坐标 ,峰面积 Y
为纵坐标作图 ,绘制标准曲线 ,得回归方程为:
Y=1.649×106X-3.264×103　r=0.9993
结果表明:山栀苷甲酯进样量在 0.052 ～ 0.52 μg范
围内 ,与峰面积有良好的线性关系 。
2.5　精密度试验　精密吸取 0.052 mg· mL-1对照
品溶液 5μL,连续进样 6次 ,测定峰面积 ,其 RSD为
0.79%。
2.6　重复性试验　取同一药材粉末(过四号筛)6
份 ,每份约 0.5g,精密称定 ,按 “ 2.1”项下方法制备
供试品溶液。按上述色谱条件进行测定 ,计算山栀
苷甲酯平均含量为 0.38%, RSD为 1.2%。
2.7　稳定性试验　取同一份供试品溶液 , 分别于
0, 2, 4, 6, 8 h精密进样 5μL,测定峰面积 ,计算 RSD
为 1.8%,表明供试品溶液在 8h内基本稳定 。
2.8　加样回收率试验　取已知含量(0.38%)的药
材粉末 9份 ,每份约 0.25 g,精密称定 ,每 3份为一
组 ,分别精密加入 0.4707 mg· mL-1对照品溶液
1.6, 2.0, 2.4 mL,再按 “2.1”项下方法制备加样回
收供试液 ,在上述色谱条件下进行测定 ,计算回收
率。其 平 均回 收 率 分别 为 99.5%, 100.6%,
98.1%;RSD分别为 1.1%, 1.3%, 0.42%。
2.9　样品测定　分别取不同来源的螃蟹甲药材 ,按
“2.1”项下方法制备供试品溶液 ,进样 5μL,在上述
色谱条件下进行测定 ,采用外标一点法计算山栀苷
甲酯的含量 ,测定结果见表 1。
表 1　不同来源螃蟹甲中山栀苷甲酯的含量(%, n=3)
Tab1　ContentofshanzhisidemethylesterinPhlomisyounghusbandiiMukerjeefromdifferentsources
样品号
(sampleNo.)
来源
(source)
山栀苷甲酯含量
(content)/%
1 西藏昌都(Changdu, Tibet) 0.35
2 西藏昌都(Changdu, Tibet) 0.30
3 四川阿坝(Aba, Sichuan) 0.10
4 青海(购于成都荷花池中药材市场)(Qinghai, obtainedfromChengduHehuachimarketofTCM) 0.22
5 四川(购于成都荷花池中药材市场)(Sichuan, obtainedfromChengduHehuachimarketofTCM) 0.13
6 西藏(购于成都荷花池中药材市场)(Tibet, obtainedfromChengduHehuachimarketofTCM) 0.38
7 中国药品生物制品检定所对照药材(ReferencedrugfromNationalInstitutefortheControlof
PharmaceuticalBiologicalProducts)
0.29
3　讨论
3.1　螃蟹甲为常用藏药 ,其对肺部疾病有显著疗
效 ,但目前质量控制标准水平较低 ,未见其鉴别及含
量测定的文献报道。本文以环烯醚萜类化合物山栀
苷甲酯作为其含量测定指标 ,所建立的高效液相色
谱法具有操作简单 、重复性好 、准确性高等优点 ,可
为螃蟹甲药材的质量控制提供一定的科学依据。
3.2　将山栀苷甲酯对照品溶液于 200 ～ 400 nm进
行紫外扫描 , 其在 236 nm处有最大吸收 , 故选择
236 nm作为最大测定波长。
—324— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(2)
3.3　本试验对流动相甲醇 -水 、乙腈 -水系统及不
同比例进行了比较研究 ,结果表明采用乙腈 -水
(12∶88)为流动相 ,分离度较好。
3.4　本试验对药材提取溶剂甲醇 、50%甲醇 、水进行
了考察 ,结果表明以 50%甲醇作为提取溶剂提取效
率最高;还对回流提取 、超声提取 、索氏提取 3种提取
方法进行了比较 ,结果表明超声法提取效率高 ,操作
简便 ,提取时间短 。对超声时间 15, 30, 60min进行了
比较 ,结果表明提取 30 min即可基本提取完全。
参考文献
1　QinghaiInstituteForDrugControl, QinghaiInstitutionofZangMedi-
cine(青海省药品检验所 ,青海省藏医药研究所).ChinaZang
Mdecine, Vol3(中国藏药第三卷).Shanghai(上海):ShanghaiSci-
enceandTechnologyPublishers(上海科学技术出版社), 1996.310
2　DrugSpecificationsPromulgatedbytheMinistryofPublicHealth, PR
China.ZangMedicine, Vol1(卫生部药品标准藏药第一册).
1995.126
(本文于 2008年 6月 12日修改回)
中国药学杂志岛津杯
第九届全国药物分析优秀论文评选交流会征文通知
　　为推动我国药物分析事业的发展 , 促进药物分析技术的交流 , 在中国药学会支持下 ,中国药学会药物分析专业委员
会 、《中国药学杂志》编辑部和岛津国际贸易(上海)有限公司曾先后于 1992, 1995, 1997, 1999, 2001, 2003, 2005, 2007年 8
次分别在北京 、苏州 、西安 、武汉联合举办中国药学杂志岛津杯全国药物分析优秀论文评选交流会 , 该会议已成为药物分
析界的品牌会议。 2009年即将举办中国药学杂志岛津杯第九届全国药物分析优秀论文评选交流会。征文通知如下。
1　征文内容
　　近几年国内外药物分析新理论 、新技术 、新方法研究;现代分析手段和检测技术在药物分析中
的应用;新药质量标准的建立和要求;注射剂的质控和安全性研究;药物血药浓度监测和药代动力学;药
物生物利用度和溶出度的研究;药物快速分析检定新方法 、新技术;毒物快速分析检定;药典标准的相关
研究;计算机和数学在药物分析领域中的应用;药物分析技术在打假中的应用 。
2　征文要求
2.1　要求未公开发表及未在全国性会议上交流过 ,有一定创新性和指导意义。
2.2　论文体例 、格式请参见本刊 2009年第 1期稿约 。
3　其他事宜
3.1　本次会议通过论文交流后将由国内著名药物分析专家组成评委会 ,评选出优秀论文一等奖 3
名(每名奖金 3000元)、二等奖 6名(每名奖金 2000元)、三等奖 10名(每名奖金 1000元)。获得一 、二
等奖的论文在征得作者同意后将在 《中国药学杂志》上发表 。
3.2　征文截止时间:2009年 4月 30日(以邮戳为准)。稿件及信封请注明 “岛津征文”字样并附单
位介绍信 。同时将电子文件发至:daojinbei@yahoo.com.cn;zgyxzz@cpa.org.cn(标题请注明岛津征
文)。
3.3　联系地址及联系方式:地址:北京朝阳区建外大街 4号建外 SOHO九号楼 1803室(邮编:
100022)。联系人:李亚娟 田菁 电话:010-58699275/80转 831 /829;传真:010-58699295。
3.4　会议时间及地点:2009年 5月(暂定)。地点:广州市(暂定)。
3.5　应征论文被录用后 ,将通知作者 ,论文录用与否 ,一律不退稿 ,请自留底稿 。
中国药学会药物分析专业委员会
中国药学杂志编辑部
—325—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(2)